恩施硒茶多酚的抗衰老作用

王振富 鐘 靈 楊付明

(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 恩施 445000)

許多研究表明，自由基損傷與衰老密切相關(guān)。人參多糖、香菇多糖等許多中草藥提取物能直接清除自由基，提高超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)等抗氧化酶的活性及降低丙二醛(MDA)含量，發(fā)揮抗衰老作用〔1，2〕。茶多酚(TP)是從鮮茶葉中分離提取的多酚類復(fù)合體，其主要成分為黃烷醇(主要是兒茶素)、花色素(包括茶黃素、茶黑素等)、黃酮及黃酮醇、酚酸及縮酚酸4類化合物。TP是公認(rèn)的天然抗氧化劑，具有降血脂、降血壓、降血糖、抗腫瘤、防止腦梗死、抗血栓、抗突變、抗輻射、抗衰老等多種作用〔3〕。本實(shí)驗(yàn)通過建立D-半乳糖小鼠衰老模型，采用溶劑提取法提取茶多酚，進(jìn)一步探討恩施硒茶多酚抗衰老作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1主要試劑和儀器 D-半乳糖(中國上海慧星生化試劑有限公司)；香菇菌多糖片(武漢迪奧藥業(yè)有限公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；WFZ- UV2000紫外可見分光光度計(jì)(尤尼科上海儀器有限公司)，T J270-30A 紅外分光光度計(jì)(天津光學(xué)儀器廠) ，TGL-16G高速臺式離心機(jī)(上海安亭儀器廠) ，F(xiàn)-160型藥物粉碎機(jī)(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)，RE52-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海滬西分析儀器廠)。

1.2恩施硒茶多酚的制備〔4〕硒茶購于恩施自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，茶葉原料→溶劑提取→濾過→去雜質(zhì)→萃取→干燥→粗品。冷凍干燥保存。實(shí)驗(yàn)前以純水為溶劑配制不同濃度樣品，4℃低溫保存，備用(采用雙道束原子熒光光譜法測定硒的含量為1.947 8 μg/g)。

1.3實(shí)驗(yàn)動物分組、造模及處理 昆明種小鼠，體重28～32 g，由湖北民族學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。將60只小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只(雌雄各5只)：空白組，模型組，香菇菌多糖組和茶多酚低、中、高劑量組?？瞻捉M，灌胃等體積生理鹽水；模型組頸背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg和灌胃等體積生理鹽水；陽性組頸背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg和灌胃等體積香菇菌多糖100 mg/kg；根據(jù)預(yù)試驗(yàn)確定低、中、高茶多酚劑量各組劑量小鼠的每日用量，分別灌胃75，150，300 mg/kg和同時(shí)頸背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg。按0.2 ml/10 g灌胃1次/d，連續(xù)給藥60 d。

1.4觀察指標(biāo)與方法

1.4.1小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的測定 末次給藥24 h后，稱量所有小鼠體質(zhì)量，解剖小鼠，取其胸腺和脾臟，按“胸腺(mg)/體質(zhì)量(g)、脾臟(mg)/體質(zhì)量(g)”計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。

1.4.2小鼠血MDA含量、SOD活力測定 末次給藥24 h后，眼眶取血 ，并立即離心取其血清。按MDA試劑盒說明書操作。于532 nm處測定各管吸光度，計(jì)算血清中MDA含量。按SOD試劑盒說明書操作。于550 nm處測定各管吸光度，計(jì)算血清中SOD活力。

1.4.3小鼠肝組織GSH-Px活力測定 將小鼠頸椎脫臼位處死，迅速取其肝臟，剔去結(jié)締組織、稱量、勻漿器研磨、加預(yù)冷的生理鹽水制備成10% 的組織勻漿。冷凍離心(2～4℃ ) ，取其上清液，用GSH-Px試劑盒測定GSH-Px活力。

1.4.4小鼠腦組織CAT活力測定 將小鼠處死,取其腦組織，稱量，加預(yù)冷的生理鹽水進(jìn)行勻漿制備成10%的組織勻漿。冷凍離心(2～4℃) ，取其上清液，用CAT試劑盒測定過氧化氫酶活力。

2 結(jié) 果

2.1硒茶多酚對衰老小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響 與空白組比較，模型組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較，茶多酚低、中、高劑量組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 硒茶多酚對衰老小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響

2.2硒茶多酚對衰老小鼠MDA含量和SOD、GSH-Px 、CAT活力的影響 與空白組比較，模型組MDA含量有顯著性升高,SOD 、GSH-Px、 CAT活力有顯著性降低(P<0.05)；與模型組比較，茶多酚低、中、高劑量組MDA含量有顯著性降低(P<0.05)，茶多酚低、中、高劑量組SOD活力均有提高，中劑量組有顯著性(P<0.01)，低、高劑量組無顯著性差異；茶多酚低、中、高劑量組GSH-Px活力均有極顯著提高(P<0.01)；茶多酚中、高劑量組CAT活力有極顯著性提高(P<0.01)，低劑量組則差異無顯著(P>0.05)。見表2。

表2 硒茶多酚對衰老小鼠MAD含量和SOD、GSH-Px 、CAT活力的影響

3 討 論

衰老的自由基學(xué)說是Denham Harman在1956年提出的，認(rèn)為衰老過程中的退行性變化是由于細(xì)胞正常代謝過程中產(chǎn)生的自由基的有害作用造成的。所謂自由基又稱游離基,就是具有未配對的原子、原子團(tuán)、分子或離子叫自由基。自由基的化學(xué)性質(zhì)活潑，有極強(qiáng)的氧化反應(yīng)能力，可使各種生物膜的不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化，形成過氧化脂質(zhì)〔5〕，這些產(chǎn)物具有一定毒性，能使蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間發(fā)生交聯(lián)，發(fā)生去氫、加成、裂解等反應(yīng)，從而引起DNA的雙螺旋交聯(lián)出現(xiàn)錯(cuò)誤或無法分裂，一些酶的活性改變，影響細(xì)胞的代謝。D- 半乳糖是機(jī)體的正常營養(yǎng)成分，當(dāng)半乳糖過多時(shí)，可由半乳糖氧化酶催化生成醛糖和過氧化氫，產(chǎn)生超氧陰離子自由基。過量的氧自由基可引起神經(jīng)元細(xì)胞的損傷，使腦內(nèi)總RNA和蛋白質(zhì)含量下降，腦內(nèi)神經(jīng)元密度降低，造成動物學(xué)習(xí)記憶能力下降及機(jī)體的衰老〔6〕。許多中草藥是強(qiáng)有力的抗氧化劑，適當(dāng)補(bǔ)充外源性抗氧化物質(zhì)，可提高機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的活力，降低過氧化質(zhì)子含量，從而起到抗衰老作用〔7〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示硒茶多酚可通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、提高機(jī)體抗氧化能力和直接清除自由基等發(fā)揮其延緩衰老的作用，但作用效果與劑量有一定依從關(guān)系，其機(jī)制待于進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

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5李義奎，王欽茂.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1989：202.

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7楊 輝，程清洲，許 彬，等.竹節(jié)參多糖抗腦衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009；20(9)：2311-2.