銀杏葉提取物對SKOV3種植性卵巢癌Bcl-2、Bax的影響

馬 哲 薛惠榮 黃秀英

(北華大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，吉林 吉林 132011)

銀杏葉提取物(EGb 761)主要應(yīng)用于心腦血管疾病的防治〔1〕，而近年來的一些研究發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物對某些腫瘤具有抑制增殖的作用。研究顯示 EGb 761及內(nèi)脂B可明顯降低乳腺癌細(xì)胞增殖〔2〕，給予銀杏葉提取物可抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29增殖〔3〕，銀杏葉提取物山奈酚可通過誘導(dǎo)凋亡抑制胰腺癌細(xì)胞增殖〔4〕。研究還顯示銀杏葉提取物明顯遏制二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)的肝癌增殖〔5〕以及 N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍誘發(fā)的 SD大鼠胃癌前病變〔6〕。但關(guān)于銀杏葉提取物對卵巢癌的研究資料目前尚無報道。本研究利用SKOV3細(xì)胞株構(gòu)建裸鼠種植性卵巢癌模型，觀察銀杏葉提取物對卵巢癌組織中Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響，從凋亡角度探討其中的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料 銀杏葉提取物(商品名：金納多，德國威舒培大藥房)； Bax抗體、Bcl-2抗體、PV-6000 免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB 顯色試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；其他試劑為國產(chǎn)分析純。人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3由吉林省腫瘤醫(yī)院提供。雌性4周齡裸小鼠，由北京云菱生物技術(shù)有限公司提供。

1.2方法 體外培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞， 收集對數(shù)生長期細(xì)胞，生理鹽水調(diào)整至細(xì)胞數(shù)濃度為2×107/ml給予裸鼠皮下注射(0.2 ml/只)，接種2 w后，將成模裸鼠隨機(jī)分為模型組、銀杏葉提取物低劑量組(50 mg·kg-1·d-1)、銀杏葉提取物高劑量組(100 mg·kg-1·d-1)，每組10只。模型組及銀杏葉提取物各劑量組分別腹腔注射生理鹽水或相應(yīng)濃度藥物1次/d，銀杏葉提取物組連續(xù)給藥3 w。3 w后處死動物，取出腫瘤稱重后固定于4%甲醛溶液中。免疫組織化學(xué)法檢測Bcl-2、Bax在移植瘤組織中的表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1各組動物狀態(tài)及瘤重 模型組動物狀態(tài)尚可，實(shí)驗至第16天時1只動物死亡，而給予銀杏葉提取物的動物狀態(tài)較好，體重?zé)o明顯下降，實(shí)驗期間無動物死亡。 與模型組比較，各治療組腫瘤重量均有降低趨勢，其中銀杏葉提取物高劑量組差異顯著(P<0.05)，瘤重抑制率達(dá)14.1%。見表1。

2.2腫瘤組織中Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)情況 Bcl-2、Bax蛋白在模型組動物中均有較高水平的表達(dá)，陽性信號主要位于胞質(zhì)。經(jīng)銀杏葉提取物治療后的裸鼠腫瘤組織中Bcl-2的表達(dá)有所降低(P<0.05)，而Bax蛋白的表達(dá)有所升高(P<0.05)，特別是銀杏葉提取物組高劑量組變化較明顯。

表1 各組裸鼠體重及瘤重

A、D：模型組；B、E：銀杏葉提取物組低劑量組；C、F：銀杏葉提取物組高劑量組;A～C：Bcl-2；D～F：Bax

3 討 論

銀杏葉藥用史已有五千多年，有良好的用藥經(jīng)驗，藥物毒性小。銀杏葉提取物成分復(fù)雜，有效化學(xué)成分多，藥理作用廣泛，其中多種物質(zhì)具有抗氧化、清除自由基、促進(jìn)凋亡等抗腫瘤的藥理基礎(chǔ)。多項研究已顯示銀杏葉提取物可抑制腫瘤或癌前病變的增殖，其中一些研究顯示，其抑制腫瘤的作用與腫瘤細(xì)胞凋亡密切相關(guān)〔2～7〕。銀杏葉提取物可降低人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29 中bcl-2 mRNA、提高p53 mRNA表達(dá)，從而誘導(dǎo)其凋亡〔3〕。在N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍誘發(fā)的SD大鼠胃癌前病變的研究中也顯示，銀杏葉提取物治療后大鼠Bcl-2、 c-myc及FasL等癌基因均表達(dá)降低，凋亡基因Fas 表達(dá)明顯升高〔6〕。此外，關(guān)于白血病細(xì)胞U937的研究也顯示，銀杏葉提取物中的銀杏酸成分可通過誘導(dǎo)凋亡明顯抑制U937的增殖〔7〕。

化療是卵巢癌的重要治療手段，關(guān)于銀杏葉提取物輔助化療的研究也有報道，如銀杏葉提取物聯(lián)合他莫昔芬治療乳腺癌大鼠，其療效優(yōu)于他莫昔芬單獨(dú)治療組〔8〕。一項臨床Ⅱ期實(shí)驗也顯示給予胰腺癌病人5-氟尿嘧啶聯(lián)合銀杏葉提取物，病人耐受性強(qiáng)于單獨(dú)使用5-氟尿嘧啶〔9〕。

本研究發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物可以抑制卵巢移植瘤的增殖，給予銀杏葉提取物的SKOV3種植性卵巢癌裸鼠瘤重有降低趨勢，但本實(shí)驗中銀杏葉提取物瘤重抑制程度并不高，主要原因考慮為銀杏葉提取物作用緩和，而本模型為短療程治療。

Bcl-2和Bax 是一對凋亡調(diào)節(jié)蛋白，Bax自身可形成同源二聚體，同源二聚體Bax/Bax的比例大于異源二聚Bcl-2/Bax時可促進(jìn)細(xì)胞的凋亡，反之則抑制細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗結(jié)果顯示，給予銀杏葉提取物的動物Bcl-2表達(dá)明顯降低，而Bax的表達(dá)明顯增高，并呈劑量依賴性。提示銀杏葉提取物可能通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡從而抑制卵巢移植瘤的生長。

4 參考文獻(xiàn)

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3Chen XH,Miao YX,Wang XJ,etal.Effects of Ginkgo biloba extract EGb761 on human colon adenocarcinoma cells〔J〕.Cell Physiol Biochem,2011;27(3-4):227-32.

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8Dias MC,Furtado KS,Rodrigues MA,etal.Effects of Ginkgo biloba on chemically-induced mammary tumors in rats receiving tamoxifen〔J〕.BMC Complement Altern Med,2013,doi: 10.1186/1472-6882-13-93.

9Hauns B,H?ring B,K?hler S,etal.Phase Ⅱ study with 5-fluorouracil and ginkgo biloba extract(GBE 761 ONC)in patients with pancreatic cancer〔J〕.Phytother Res,2001;15(1):34-8.