穩(wěn)定的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型構(gòu)建分析

馬智+孟江萍

[摘要] 目的 分析穩(wěn)定的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型構(gòu)建的方法。 方法 選取60只清潔級(jí)C5BL/6小鼠，將小鼠按照編號(hào)，隨機(jī)分為兩組，化療組和激素組各30只。分別觀(guān)察藥物注射后，小鼠睪丸生精小管內(nèi)精子和精子細(xì)胞消失情況。 結(jié)果 化療組小鼠在接受藥物注射后第4周，睪丸生精小管內(nèi)精子及精子細(xì)胞消失，化療后20周仍未產(chǎn)生精子，激素組在經(jīng)過(guò)苯甲酸雌二醇連續(xù)注射后，于第4周睪丸生精小管內(nèi)精子以及精子細(xì)胞完全消失，連續(xù)注射第20周時(shí)，部分小鼠睪丸生精小管內(nèi)發(fā)現(xiàn)了少量的精子細(xì)胞與精子存在。兩組小鼠睪丸重量存在顯著差異性，具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 激素組采用苯甲酸雌二醇注射構(gòu)建的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型缺乏穩(wěn)定性，化療組經(jīng)過(guò)白消安、環(huán)磷酰胺注射后構(gòu)建的小鼠無(wú)精子癥模型較為穩(wěn)定，是構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的首選方法，值得進(jìn)行推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 小鼠；無(wú)精子癥；動(dòng)物模型；效果

[中圖分類(lèi)號(hào)] R332???[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A???[文章編號(hào)] 2095-0616（2014）11-30-03

Analysis of stable mice azoospermatism animal model building

MA?Zhi??MENG?Jiangping

Assisted Reproduction Center,First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China

[Abstract] Objective To analyze the methods of stable mice azoospermatism animal model building. MethodsSixty mice with clean grade C5BL/6 were randomly divided into the chemotherapy group with 30 mice and the hormone group with 30 mice according to the serial number. The sperm and spermoblast disappearance situation in the mice's testicular seminiferous tubules after the drug injection of the two groups was observed. Results In the chemotherapy group, the mice's sperm and spermoblast in the testicular seminiferous tubules disappeared in the 4th week of drug injection,and no sperm was produced in the 20th week of chemotherapy. In the hormone group,after continuous injection of estradiol benzoate,the mice's sperm and spermoblast in the testicular seminiferous tubules disappeared completely in the 4th week,and in the 20th week of continuous injection,little spermoblast and sperm was found in the mice's testicular seminiferous tubules. The two groups of mice had significantly different testical weight,with statistical significance(P＜0.05). Conclusion The mice azoospermatism animal model established by injecting estradiol benzoate in the hormone group lacks stability.The mice azoospermatism animal model established by injecting busulfan and cyclophosphamide in the chemotherapy group is relatively stable,which is the first choice of establishing mice azoospermatism animal model and worthy of promotion and application.

[Key words] Mouse;Azoospermatism;Animal model;Effect

近年來(lái)，無(wú)精子癥細(xì)胞代替療法是醫(yī)學(xué)界的研究熱點(diǎn)[1-3]，開(kāi)展無(wú)精子癥細(xì)胞代替療法研究需要使用大量的無(wú)精子癥動(dòng)物模型，構(gòu)建穩(wěn)定的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型對(duì)于推動(dòng)臨床研究工作的發(fā)展有著積極地促進(jìn)作用。目前構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的主要方法有兩種，即化療法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型與轉(zhuǎn)基因無(wú)精子癥動(dòng)物模型。化療法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型在研究中已經(jīng)得到了極為廣泛的應(yīng)用，雖然化療法操作簡(jiǎn)單、成本低廉[4-6]，但是小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型缺乏穩(wěn)定性，轉(zhuǎn)基因法雖

然穩(wěn)定性較高，但是成本高昂、操作難度大。本研究主要是通過(guò)確定有效的化療注射藥物，以期構(gòu)建穩(wěn)定的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型，現(xiàn)根據(jù)我院小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的構(gòu)建情況進(jìn)行報(bào)道。

1?材料與方法

1.1?研究設(shè)計(jì)

選取60只清潔級(jí)C5BL/6小鼠，將小鼠按照編號(hào)，隨機(jī)分為兩組，化療組和激素組各30只?；熃M小鼠年齡在4～8周，平均年齡在（6.02±0.35）周，體重在24～28g左右，平均體重為（26.33±0.24）g；激素組小鼠年齡在5～8周，平均年齡為（6.36±0.28）周，體重在24～28g左右，平均體重為（26.09±0.28）g。兩組小鼠年齡與體重對(duì)比無(wú)明顯差異，不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2?儀器與試劑

（1）英資邁世通（鶴壁）藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的白消安，國(guó)藥準(zhǔn)字H41021975。（2）通化茂祥制藥有限公司生產(chǎn)的環(huán)磷酰胺，國(guó)藥準(zhǔn)字H22022233。（3）廣州白云山明興制藥有限公司生產(chǎn)的苯甲酸雌二醇注射液，國(guó)藥準(zhǔn)字H44022008。（4）浙江濟(jì)民制藥有限公司生產(chǎn)的0.9%生理鹽水，國(guó)藥準(zhǔn)字H20046424。

1.3?方法

1.3.1?化療組?首先，將30只清潔級(jí)C5BL/6小鼠隨機(jī)分為三組，每組10只。每組所有小鼠均接受白消安與環(huán)磷酰胺注射。白消安的注射劑量控制在10mg/kg，環(huán)磷酰胺注射劑量控制在120mg/kg。三組小鼠根據(jù)飼養(yǎng)時(shí)間分為4周組、12周組與20周組。在藥物注射后，由于出現(xiàn)的免疫抑制反應(yīng)導(dǎo)致部分小鼠死亡，4周組死亡4只，12周組死亡5只，20周組死亡6只，死亡率為50.00%。存活小鼠能夠正?；顒?dòng)與飲食，體重未見(jiàn)明顯下降。三組小鼠分別于4、12、20周取出小鼠睪丸組織與附睪組織，稱(chēng)取小鼠睪丸重量，然后將其切片進(jìn)行病理學(xué)分析。

endprint

1.3.2?激素組?首先，將30只清潔級(jí)C5BL/6小鼠隨機(jī)分為三組，每組10只。然后每天給予小鼠苯甲酸雌二醇注射，注射劑量控制在4.0mg/kg，連續(xù)注射2周（14d）。接著停止藥物注射并繼續(xù)飼養(yǎng)三組小鼠。飼養(yǎng)過(guò)程中，4周組未出現(xiàn)小鼠死亡，12周組小鼠死亡1只，20周未見(jiàn)小鼠死亡，死亡率為6.67%。存活小鼠生長(zhǎng)情況良好，能夠進(jìn)行正常的飲食與活動(dòng)，體重未見(jiàn)明顯變化。于4、12、20周取出小鼠睪丸組織以及附睪組織，稱(chēng)取小鼠睪丸重量，然后將其切片進(jìn)行病理學(xué)分析。

所有小鼠均于睪丸、附睪組織取出后斷頸處死。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)上述兩組患者各項(xiàng)記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行分類(lèi)和匯總處理，采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)上述匯總數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)數(shù)資料采取率（%）表示，組間率對(duì)比采取x2檢驗(yàn)；對(duì)比以P＜0.05為有顯著性差異。

2?結(jié)果

2.1?精子情況

化療組小鼠在接受藥物注射后第4周，睪丸生精小管內(nèi)精子及精子細(xì)胞消失，化療后20周仍未產(chǎn)生精子；激素組在經(jīng)過(guò)苯甲酸雌二醇連續(xù)注射后，于第4周睪丸生精小管內(nèi)精子以及精子細(xì)胞完全消失，連續(xù)注射第20周時(shí)，部分小鼠睪丸生精小管內(nèi)發(fā)現(xiàn)了少量的精子細(xì)胞與精子存在。兩組小鼠精子量存在顯著差異性（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1??兩組精子實(shí)驗(yàn)情況[n（%）]

組別 4周后精子細(xì)胞消失 20周后產(chǎn)生精子

化療組（30只） 30（100.00） 0

激素組（30只） 30（100.00） 18（60.00）

x2 0.154 20.414

P ＞0.05 ＜0.05

2.2?小鼠體重、睪丸重量比較

經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)治療，兩組小鼠體重未見(jiàn)明顯差異性，不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?；熃M小鼠睪丸重量較激素組更低，具有顯著差異性，具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表2。

表2??藥物干預(yù)效果比較（，g）

組別 體重 睪丸重量

干預(yù)前 干預(yù)后 干預(yù)前 干預(yù)后

化療組（30只） 159.5±10.3 161.3±9.9 8.5±0.5 8.4±0.4

激素組（30只） 160.2±9.8 162.5±1.01 8.6±0.4 8.8±0.5

t 0.141 4.451

P ＞0.05 ＜0.05

3?討論

目前構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的主要方法有兩種，即化療法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型與轉(zhuǎn)基因無(wú)精子癥動(dòng)物模型[7-8]?；煼?gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型已經(jīng)有很長(zhǎng)一段時(shí)間的應(yīng)用歷史，是目前最為常見(jiàn)的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型構(gòu)建方式[3]，但是采用化療法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的時(shí)候，小鼠的死亡率較高。導(dǎo)致小鼠死亡率較高的主要原因是由于藥物注射劑量選擇不當(dāng)，如果藥物注射劑量偏大，那么小鼠死亡率無(wú)疑會(huì)明顯上升，如果藥物注射劑量偏小，那么小鼠生精功能可能會(huì)出現(xiàn)不同程度的恢復(fù)，生精小管內(nèi)精子細(xì)胞與精子量會(huì)明顯上升。

采用激素注射構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型屬于近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新方式[9-12]，主要是通過(guò)給予小鼠苯甲酸雌二醇皮下注射，以長(zhǎng)時(shí)間不間斷的持續(xù)注射破壞小鼠體內(nèi)生精小管精子、精母細(xì)胞活性，使其大量脫落，進(jìn)而破壞小鼠生精功能，構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型。苯甲酸雌二醇能夠很好的抑制小鼠血清睪酮分泌，也能起到良好的抑制精子生成的作用[13-15]。

在本次研究中，采用的是化療法與激素法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型，化療組主要采用白消安與環(huán)磷酰胺注射，不過(guò)小鼠死亡率較高，達(dá)到了50.00%，略高于張樹(shù)成等[5]的報(bào)道中死亡率42.00%。但是化療法在構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的時(shí)候，并未對(duì)存活小鼠正常飲食、活動(dòng)產(chǎn)生任何影響，作用機(jī)制僅集中于破壞小鼠睪丸生精功能。治療完成后，小鼠體重未見(jiàn)明顯變化。不過(guò)本研究中化療組小鼠死亡率仍然較高，探討合適劑量的藥物注射對(duì)于保證小鼠存活率、構(gòu)建穩(wěn)定的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型有著重要的意義。化療法在構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型方面具有良好的穩(wěn)定性，本次研究中至20周結(jié)束時(shí)，小鼠生精小管內(nèi)均未見(jiàn)任何精子與精子細(xì)胞。激素組采用苯甲酸雌二醇注射，小鼠死亡率得到明顯降低，僅為6.67%。但是在20周時(shí)，小鼠生精小管中發(fā)現(xiàn)精子與精子細(xì)胞存在，小鼠睪丸重量明顯高于化療組小鼠。表明，激素法在構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型時(shí)缺乏良好的穩(wěn)定性，因此不建議對(duì)此方式進(jìn)行臨床推廣使用[6]。

綜上所述，激素組采用苯甲酸雌二醇注射構(gòu)建的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型缺乏穩(wěn)定性，化療組經(jīng)過(guò)白消安、環(huán)磷酰胺注射后構(gòu)建的小鼠無(wú)精子癥模型較為穩(wěn)定，是構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的首選方法，值得進(jìn)行推廣應(yīng)用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 黃勛彬，李紅鋼.小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的構(gòu)建[J].中華男科學(xué)雜志，2007，2（5）：147-149.

[2] 唐愛(ài)發(fā)，周永翠，余振東，等.Mm.158494基因在白消安引起的無(wú)精子癥小鼠中的表達(dá)[J].中國(guó)男科學(xué)雜志，2008，9（2）：1-4.

[3] 范紅艷，王艷春，顧饒勝.生精障礙動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，2（13）：120-123.

[4] 李智會(huì)，胡曉芹，符小春.化療藥物建立小鼠無(wú)精子癥模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，3（16）：138-141.

[5] 張樹(shù)成，賀斌，王尚明，等.少精子癥和無(wú)精子癥動(dòng)物模型及其在中藥研究中的應(yīng)用[J].四川中醫(yī)，2009，8（2）：40-43.

[6] 周雪原，任宇，郭旭東，等.白消安致大鼠無(wú)精子癥模型的建立[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，32（6）：6234-6238.

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[8] 李智會(huì)，胡曉芹，符小春.化療藥物建立小鼠無(wú)精子癥模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，3（15）：138-141.

[9] 張希.少精子癥和梗阻性無(wú)精子癥患者精子頂體完整性及精子形態(tài)與其輔助生殖治療結(jié)果的研究[D].廣州：暨南大學(xué)，2013.

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[15] 相俊，紀(jì)亞忠，黃盛松.經(jīng)皮附睪精子細(xì)針抽吸術(shù)在無(wú)精子癥診斷中的應(yīng)用[J].臨床醫(yī)學(xué)，2013，11（3）：65-66.

（收稿日期：2014-03-01）

endprint

1.3.2?激素組?首先，將30只清潔級(jí)C5BL/6小鼠隨機(jī)分為三組，每組10只。然后每天給予小鼠苯甲酸雌二醇注射，注射劑量控制在4.0mg/kg，連續(xù)注射2周（14d）。接著停止藥物注射并繼續(xù)飼養(yǎng)三組小鼠。飼養(yǎng)過(guò)程中，4周組未出現(xiàn)小鼠死亡，12周組小鼠死亡1只，20周未見(jiàn)小鼠死亡，死亡率為6.67%。存活小鼠生長(zhǎng)情況良好，能夠進(jìn)行正常的飲食與活動(dòng)，體重未見(jiàn)明顯變化。于4、12、20周取出小鼠睪丸組織以及附睪組織，稱(chēng)取小鼠睪丸重量，然后將其切片進(jìn)行病理學(xué)分析。

所有小鼠均于睪丸、附睪組織取出后斷頸處死。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)上述兩組患者各項(xiàng)記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行分類(lèi)和匯總處理，采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)上述匯總數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)數(shù)資料采取率（%）表示，組間率對(duì)比采取x2檢驗(yàn)；對(duì)比以P＜0.05為有顯著性差異。

2?結(jié)果

2.1?精子情況

化療組小鼠在接受藥物注射后第4周，睪丸生精小管內(nèi)精子及精子細(xì)胞消失，化療后20周仍未產(chǎn)生精子；激素組在經(jīng)過(guò)苯甲酸雌二醇連續(xù)注射后，于第4周睪丸生精小管內(nèi)精子以及精子細(xì)胞完全消失，連續(xù)注射第20周時(shí)，部分小鼠睪丸生精小管內(nèi)發(fā)現(xiàn)了少量的精子細(xì)胞與精子存在。兩組小鼠精子量存在顯著差異性（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1??兩組精子實(shí)驗(yàn)情況[n（%）]

組別 4周后精子細(xì)胞消失 20周后產(chǎn)生精子

化療組（30只） 30（100.00） 0

激素組（30只） 30（100.00） 18（60.00）

x2 0.154 20.414

P ＞0.05 ＜0.05

2.2?小鼠體重、睪丸重量比較

經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)治療，兩組小鼠體重未見(jiàn)明顯差異性，不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?；熃M小鼠睪丸重量較激素組更低，具有顯著差異性，具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表2。

表2??藥物干預(yù)效果比較（，g）

組別 體重 睪丸重量

干預(yù)前 干預(yù)后 干預(yù)前 干預(yù)后

化療組（30只） 159.5±10.3 161.3±9.9 8.5±0.5 8.4±0.4

激素組（30只） 160.2±9.8 162.5±1.01 8.6±0.4 8.8±0.5

t 0.141 4.451

P ＞0.05 ＜0.05

3?討論

目前構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的主要方法有兩種，即化療法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型與轉(zhuǎn)基因無(wú)精子癥動(dòng)物模型[7-8]?；煼?gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型已經(jīng)有很長(zhǎng)一段時(shí)間的應(yīng)用歷史，是目前最為常見(jiàn)的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型構(gòu)建方式[3]，但是采用化療法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的時(shí)候，小鼠的死亡率較高。導(dǎo)致小鼠死亡率較高的主要原因是由于藥物注射劑量選擇不當(dāng)，如果藥物注射劑量偏大，那么小鼠死亡率無(wú)疑會(huì)明顯上升，如果藥物注射劑量偏小，那么小鼠生精功能可能會(huì)出現(xiàn)不同程度的恢復(fù)，生精小管內(nèi)精子細(xì)胞與精子量會(huì)明顯上升。

采用激素注射構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型屬于近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新方式[9-12]，主要是通過(guò)給予小鼠苯甲酸雌二醇皮下注射，以長(zhǎng)時(shí)間不間斷的持續(xù)注射破壞小鼠體內(nèi)生精小管精子、精母細(xì)胞活性，使其大量脫落，進(jìn)而破壞小鼠生精功能，構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型。苯甲酸雌二醇能夠很好的抑制小鼠血清睪酮分泌，也能起到良好的抑制精子生成的作用[13-15]。

在本次研究中，采用的是化療法與激素法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型，化療組主要采用白消安與環(huán)磷酰胺注射，不過(guò)小鼠死亡率較高，達(dá)到了50.00%，略高于張樹(shù)成等[5]的報(bào)道中死亡率42.00%。但是化療法在構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的時(shí)候，并未對(duì)存活小鼠正常飲食、活動(dòng)產(chǎn)生任何影響，作用機(jī)制僅集中于破壞小鼠睪丸生精功能。治療完成后，小鼠體重未見(jiàn)明顯變化。不過(guò)本研究中化療組小鼠死亡率仍然較高，探討合適劑量的藥物注射對(duì)于保證小鼠存活率、構(gòu)建穩(wěn)定的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型有著重要的意義?；煼ㄔ跇?gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型方面具有良好的穩(wěn)定性，本次研究中至20周結(jié)束時(shí)，小鼠生精小管內(nèi)均未見(jiàn)任何精子與精子細(xì)胞。激素組采用苯甲酸雌二醇注射，小鼠死亡率得到明顯降低，僅為6.67%。但是在20周時(shí)，小鼠生精小管中發(fā)現(xiàn)精子與精子細(xì)胞存在，小鼠睪丸重量明顯高于化療組小鼠。表明，激素法在構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型時(shí)缺乏良好的穩(wěn)定性，因此不建議對(duì)此方式進(jìn)行臨床推廣使用[6]。

綜上所述，激素組采用苯甲酸雌二醇注射構(gòu)建的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型缺乏穩(wěn)定性，化療組經(jīng)過(guò)白消安、環(huán)磷酰胺注射后構(gòu)建的小鼠無(wú)精子癥模型較為穩(wěn)定，是構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的首選方法，值得進(jìn)行推廣應(yīng)用。

[參考文獻(xiàn)]

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[14] 劉春玲，吳曉云.無(wú)精子癥和嚴(yán)重少精子癥患者Y染色體微缺失染色體核型和性激素結(jié)果分析[J].中華男科學(xué)雜志，2013，10（5）：890-895.

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（收稿日期：2014-03-01）

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1.3.2?激素組?首先，將30只清潔級(jí)C5BL/6小鼠隨機(jī)分為三組，每組10只。然后每天給予小鼠苯甲酸雌二醇注射，注射劑量控制在4.0mg/kg，連續(xù)注射2周（14d）。接著停止藥物注射并繼續(xù)飼養(yǎng)三組小鼠。飼養(yǎng)過(guò)程中，4周組未出現(xiàn)小鼠死亡，12周組小鼠死亡1只，20周未見(jiàn)小鼠死亡，死亡率為6.67%。存活小鼠生長(zhǎng)情況良好，能夠進(jìn)行正常的飲食與活動(dòng)，體重未見(jiàn)明顯變化。于4、12、20周取出小鼠睪丸組織以及附睪組織，稱(chēng)取小鼠睪丸重量，然后將其切片進(jìn)行病理學(xué)分析。

所有小鼠均于睪丸、附睪組織取出后斷頸處死。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)上述兩組患者各項(xiàng)記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行分類(lèi)和匯總處理，采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)上述匯總數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)數(shù)資料采取率（%）表示，組間率對(duì)比采取x2檢驗(yàn)；對(duì)比以P＜0.05為有顯著性差異。

2?結(jié)果

2.1?精子情況

化療組小鼠在接受藥物注射后第4周，睪丸生精小管內(nèi)精子及精子細(xì)胞消失，化療后20周仍未產(chǎn)生精子；激素組在經(jīng)過(guò)苯甲酸雌二醇連續(xù)注射后，于第4周睪丸生精小管內(nèi)精子以及精子細(xì)胞完全消失，連續(xù)注射第20周時(shí)，部分小鼠睪丸生精小管內(nèi)發(fā)現(xiàn)了少量的精子細(xì)胞與精子存在。兩組小鼠精子量存在顯著差異性（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1??兩組精子實(shí)驗(yàn)情況[n（%）]

組別 4周后精子細(xì)胞消失 20周后產(chǎn)生精子

化療組（30只） 30（100.00） 0

激素組（30只） 30（100.00） 18（60.00）

x2 0.154 20.414

P ＞0.05 ＜0.05

2.2?小鼠體重、睪丸重量比較

經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)治療，兩組小鼠體重未見(jiàn)明顯差異性，不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?；熃M小鼠睪丸重量較激素組更低，具有顯著差異性，具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表2。

表2??藥物干預(yù)效果比較（，g）

組別 體重 睪丸重量

干預(yù)前 干預(yù)后 干預(yù)前 干預(yù)后

化療組（30只） 159.5±10.3 161.3±9.9 8.5±0.5 8.4±0.4

激素組（30只） 160.2±9.8 162.5±1.01 8.6±0.4 8.8±0.5

t 0.141 4.451

P ＞0.05 ＜0.05

3?討論

目前構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的主要方法有兩種，即化療法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型與轉(zhuǎn)基因無(wú)精子癥動(dòng)物模型[7-8]?；煼?gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型已經(jīng)有很長(zhǎng)一段時(shí)間的應(yīng)用歷史，是目前最為常見(jiàn)的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型構(gòu)建方式[3]，但是采用化療法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的時(shí)候，小鼠的死亡率較高。導(dǎo)致小鼠死亡率較高的主要原因是由于藥物注射劑量選擇不當(dāng)，如果藥物注射劑量偏大，那么小鼠死亡率無(wú)疑會(huì)明顯上升，如果藥物注射劑量偏小，那么小鼠生精功能可能會(huì)出現(xiàn)不同程度的恢復(fù)，生精小管內(nèi)精子細(xì)胞與精子量會(huì)明顯上升。

采用激素注射構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型屬于近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新方式[9-12]，主要是通過(guò)給予小鼠苯甲酸雌二醇皮下注射，以長(zhǎng)時(shí)間不間斷的持續(xù)注射破壞小鼠體內(nèi)生精小管精子、精母細(xì)胞活性，使其大量脫落，進(jìn)而破壞小鼠生精功能，構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型。苯甲酸雌二醇能夠很好的抑制小鼠血清睪酮分泌，也能起到良好的抑制精子生成的作用[13-15]。

在本次研究中，采用的是化療法與激素法構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型，化療組主要采用白消安與環(huán)磷酰胺注射，不過(guò)小鼠死亡率較高，達(dá)到了50.00%，略高于張樹(shù)成等[5]的報(bào)道中死亡率42.00%。但是化療法在構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的時(shí)候，并未對(duì)存活小鼠正常飲食、活動(dòng)產(chǎn)生任何影響，作用機(jī)制僅集中于破壞小鼠睪丸生精功能。治療完成后，小鼠體重未見(jiàn)明顯變化。不過(guò)本研究中化療組小鼠死亡率仍然較高，探討合適劑量的藥物注射對(duì)于保證小鼠存活率、構(gòu)建穩(wěn)定的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型有著重要的意義?；煼ㄔ跇?gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型方面具有良好的穩(wěn)定性，本次研究中至20周結(jié)束時(shí)，小鼠生精小管內(nèi)均未見(jiàn)任何精子與精子細(xì)胞。激素組采用苯甲酸雌二醇注射，小鼠死亡率得到明顯降低，僅為6.67%。但是在20周時(shí)，小鼠生精小管中發(fā)現(xiàn)精子與精子細(xì)胞存在，小鼠睪丸重量明顯高于化療組小鼠。表明，激素法在構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型時(shí)缺乏良好的穩(wěn)定性，因此不建議對(duì)此方式進(jìn)行臨床推廣使用[6]。

綜上所述，激素組采用苯甲酸雌二醇注射構(gòu)建的小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型缺乏穩(wěn)定性，化療組經(jīng)過(guò)白消安、環(huán)磷酰胺注射后構(gòu)建的小鼠無(wú)精子癥模型較為穩(wěn)定，是構(gòu)建小鼠無(wú)精子癥動(dòng)物模型的首選方法，值得進(jìn)行推廣應(yīng)用。

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[10] 周永翠，唐愛(ài)發(fā)，桂耀庭.新基因TSG23在正常和無(wú)精子癥睪丸組織中的表達(dá)差異[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，05（1）：530-531，533.

[11] 邱卓琳.不同生精功能無(wú)精子癥患者行ICSI后胚胎發(fā)育潛能相關(guān)研究[D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2012.

[12] 鄭菊芬，施長(zhǎng)根.非梗阻性無(wú)精子癥和隱匿精子癥與睪丸體積、血FSH和AZF基因微缺失的相關(guān)性分析[J].生殖與避孕，2013，12（3）：811-815.

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（收稿日期：2014-03-01）

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