淋病奈瑟菌的細菌培養(yǎng)與PCR方法檢測的結(jié)果對比

魏 卓（吉林省人民醫(yī)院檢驗科，吉林 長春 130000）

淋病作為威脅公眾健康的重要疾病之一，是以淋病奈瑟菌為病原體，以泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)生化膿性感染為主要臨床表現(xiàn)的性傳播疾病[1]。快速、準確的淋病奈瑟菌檢測，對于淋病的診治以及控制具有十分重要的意義。目前臨床上有多種方法可檢測淋病奈瑟菌，各有利弊，而細菌培養(yǎng)法與PCR檢測法是較常用的方法。筆者對60例疑似淋病患者生殖道分泌物同時進行細菌培養(yǎng)、PCR檢測，并對其結(jié)果進行比較，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：60例研究病例均來自2011年6月～2013年10月我院門診及婦科就診的擬診為淋病患者。男12例，女48例，平均年齡29.2歲，病史1個月～2年。

1.2 標本采集方法：男性患者：將棉拭子置入患者尿道的1～3 cm處，輕轉(zhuǎn)棉拭子幾周后取出，以便蘸取生殖道分泌物或前列腺液[2]。女性患者：用棉拭子采集宮頸口2～3 cm處及后穹隆分泌物[3]。取出后的棉拭子應立即放入無菌試管內(nèi)送到實驗室進行檢測。

1.3 檢測方法及試劑

1.3.1 細菌培養(yǎng)法：取材后每份立即接種2個血瓊脂平板和1個巧克力平板。1個血瓊脂平板和巧克力平板放入35℃、6%（V/V）CO2培養(yǎng)箱，1個血瓊脂平板放入35℃需氧培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48 h。嚴格按照產(chǎn)品說明書及《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行鑒定[4]。

1.3.2 PCR檢測方法：嚴格按照PCR試劑說明書進行操作。

1.3.3 試劑：熒光實時定量PCR試劑盒，由大連寶生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。血瓊脂培養(yǎng)基、巧克力培養(yǎng)基及生化試劑，由上海信然實業(yè)有限公司。

1.4 效果評定：細菌經(jīng)培養(yǎng)后，圓形、凸起、濕潤、半透明或灰白菌落呈氧化酶試驗陽性和革蘭染色陰性的判定為淋病奈瑟球菌陽性。PCR法：通過凝膠電泳觀察色帶判定結(jié)果。依據(jù)淋病奈瑟菌陽性檢測率，評定其檢測方法的效果。

1.5 統(tǒng)計學方法：使用SPSS 16.0對各項資料進行統(tǒng)計、分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

對疑似淋病奈瑟菌感染患者的檢測結(jié)果表明：采用細菌培養(yǎng)法檢測60例樣本中26例為淋病奈瑟菌陽性，陽性檢出率為43.3%；采用PCR方法檢測60例樣本中45例為淋病奈瑟菌陽性，陽性檢出率為75.0%。兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），詳見表1。

表1 兩種檢測方法陽性檢出情況比較

3 討論

淋病作為我國日趨流行的性傳播疾病之一，主要通過性接觸傳播。當被淋病奈瑟菌感染后，患者出現(xiàn)畏寒、發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、尿道口有膿性分泌物、宮頸紅腫、分泌物增多、子宮附件炎以及皮膚、關(guān)節(jié)出現(xiàn)炎性反應性病變。雖然本病具有高傳染性、發(fā)病急、局部癥狀重等特點。但是有一部分患者，感染淋病奈瑟菌后無臨床癥狀，甚至有文獻報道60%為無癥狀的陰性帶菌者，不易察覺，危害性更大，這對于控制疾病的傳播極為不利[5]。

目前臨床診斷淋病主要依據(jù)實驗室檢查。其中對淋病奈瑟菌檢測常用方法有分泌物直接涂片法、快速抗原檢測法、細菌培養(yǎng)法、聚合酶鏈反應（PCR）檢測法。分泌物直接涂片法雖然方法簡便、易鑒定，但其陽性檢測率低，誤診率、漏診率高?？焖倏乖瓩z測法作為無創(chuàng)性檢測方法，具有無需任何儀器設(shè)備、操作時間短、易于肉眼觀察等優(yōu)勢，但同樣存在陽性檢測率低的問題[6]。

細菌培養(yǎng)法是目前世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的淋病檢測金標準[7]。細菌培養(yǎng)法對標本采集、檢測人員操作技術(shù)、細菌培養(yǎng)條件均有較高的要求。同時本方法檢測時間長、操作繁瑣、服用抗生素易產(chǎn)生假陰性等缺點。以上各要素在一定程度上均可影響細菌的陽性檢出率。PCR檢測方法是通過體外酶合成特異性DNA片段來檢測目的DNA片段的方法，因此具有特異性強、靈敏度高、快速簡便的特點。本方法較細菌培養(yǎng)法比較，對標本的質(zhì)量要求低，對于死亡的細菌同樣具有特異性。同時，PCR檢測法是針對細菌的DNA進行檢測，因此它能克服標本過少的問題。本研究的結(jié)果表明，細菌培養(yǎng)法陽性檢出率為43.3%；PCR檢測方法陽性檢出率為75.0%，兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。筆者認為，對于淋病奈瑟菌采用PCR檢測方法具有高效率、高特異性、低誤診率、低漏診率，是臨床上檢測淋病奈瑟菌的好方法。

[1] 陳秀英.應用細菌培養(yǎng)法與PCR檢測法檢測淋病奈瑟菌的對比研究[J].求醫(yī)問藥,2012,10(5):236.

[2] 稅開毅.三種檢測淋病奈瑟菌方法結(jié)果比較[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2009,6(29):137.

[3] 舒培敬.淋病奈瑟菌不同檢測方法的效果評價[J].中國民族民間醫(yī)藥,2009,11(4):2.

[4] 葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2009:779.

[5] 吳玉霞.淋病奈瑟菌的細菌培養(yǎng)與PCR方法檢測的結(jié)果對比[J].右江醫(yī)學,2011,39(3):337.

[6] 陳 響,尚 紅.常見性傳播疾病實驗指標的評價[J].遼寧醫(yī)學雜志,2004,18(6):322.

[7] Zohar Y,Cueto JA,Elizur A,et al.Neuroendocrinology of reproduction inteleost fi sh[J].Gen Comp Endocrinol,2010,165(3):438.