結核桿菌PCR對肺外結核的早期診斷價值

高登 肖輝

結核桿菌PCR對肺外結核的早期診斷價值

高登 肖輝

目的 探討結核桿菌聚合酶鏈反應(PCR)在肺外結核病中早期診斷的臨床意義。方法 收集134例標本, 分別用抗酸染色法、培養(yǎng)法、PCR法對結核桿菌進行檢測比較。結果 抗酸染色法與PCR法比較陽性率分別為23.4%、53.2%；培養(yǎng)法與PCR法比較陽性率分別為28.3%、47.8%, 兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。PCR法陽性率比抗酸染色法、培養(yǎng)法分別高出了29.8%、19.5%；并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標本PCR法100%陽性, 對照組PCR法100%陰性。結論 PCR法對結核桿菌的檢測具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點, 在肺外結核的早期診斷中具有很好的診斷參考價值。

結核桿菌聚合酶鏈反應；肺外結核；早期；快速；診斷價值

肺外結核是指結核桿菌感染肺部以外的組織、器官等引起的結核病。常見的如結核性腦膜炎、結核性胸(腹)膜炎、淋巴結核、腎結核、骨結核等。肺結核的診斷通過流行病學、影像學、痰檢等方法診斷已經很成熟［1］。肺外結核由于發(fā)病范圍廣、檢測所需標本如腦脊液、胸腹水等獲取相對困難、特殊, 與肺結核相比有其特殊性。因而在肺外結核中應用結核桿菌PCR(聚合酶鏈反應)技術能夠準確、快速的進行診斷?，F就本院2009年1月～2014年3月結核桿菌PCR檢測的134例標本的檢測, 現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 134例結核桿菌PCR檢測均為本院的住院患者。其中男83例, 年齡3～78歲, 平均年齡36.3歲；女51例, 年齡5～82歲, 平均年齡30.4歲。134例患者中, 77例被臨床確診為肺外結核, 為實驗組；57例確診為非肺外結核,為對照組。

1.2 標本 134例標本中有胸腹水81例, 腦脊液24例, 尿液13例, 血液8例, 穿刺液8例。以上標本均由護士采集于加蓋的滅菌容器中(血液標本用EDTA-K2抗凝血)立即送檢。1.3 儀器及方法

1.3.1 PCR法 儀器用ABI GeneAmp 5700型基因擴增儀,試劑由中山大學達安基因股份有限公司生產的結核分枝桿菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光法)。操作和陰陽性判斷均按照試劑說明書進行。

1.3.2 抗酸染色法 用萋尼氏抗酸染色法做濃集涂片染色,按標準操作規(guī)程, 以-～++++報告結果。

1.3.3 結核桿菌培養(yǎng)法 標本離心取沉淀物接種到改良羅氏培養(yǎng)基斜面上, 置37℃培養(yǎng)8周。有不透明淡黃色、粗糙、干燥、凸起于培養(yǎng)基或成菜花樣菌落生長并做抗酸染色。符合以上條件者為培養(yǎng)陽性, 否則陰性。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行統計學分析。計量資料以均數±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

肺外結核77例中, PCR法陽性41例, 陽性率53.2% (41/77)；抗酸染色法陽性18例, 陽性率23.4%(18/77), 并且18例抗酸染色陽性標本PCR呈陽性。經統計學處理, 兩種方法比較差異有統計學意義(P＜0.05)。在送檢標本中, 有46例做結核桿菌培養(yǎng), 陽性13例, 陽性率28.3%(13/46), 在培養(yǎng)的46例標本中PCR法陽性22例, 陽性率47.8%(22/46), 并且13例培養(yǎng)陽性標本PCR法全部陽性。兩法比較差異有統計學意義(P＜0.05)。PCR法陽性結果數值5.88×102～3.29×105copy/ml。涂片陽性在±～+++之間。在對照組非肺外結核的57例中, PCR法、抗酸染色法及培養(yǎng)法均為陰性。見表1, 表2。

表1 PCR法與抗酸染色法陽性率比較［n (%)］

表2 PCR法與培養(yǎng)法陽性率比較［n (%)］

3 討論

肺外結核在身體除毛發(fā)、指甲外多器官組織都可發(fā)病,感染途徑、表現癥狀不盡相同, 診斷方法、檢測手段也各有不同。多數患者的病情都被其他病癥所掩蓋。因而早期診斷顯得尤其重要。通常所用的檢查方法中, 結核菌素試驗, 其陽性僅表示受結核桿菌感染, 并不一定發(fā)病?？顾崛旧芷渌种U菌等的影響, 準確度、靈敏度都受到一定程度的限制。本次實驗陽性率僅23.4%。大量的病例僅憑這種方法會漏檢。培養(yǎng)法雖然對結核病的診斷比較可靠, 但結核桿菌生長緩慢, 通常需要2～4周才有菌落生長。另外, 有些病例經抗癆藥物治療后, 結核桿菌受抑制, 需要6～8周甚至20周才出現菌落。更甚者由于抗癆藥物的影響導致細胞壁缺陷而使培養(yǎng)失敗。也就是說, 培養(yǎng)法準確度、靈敏度雖可取, 本次實驗培養(yǎng)法陽性率28.3%, 但重要的一點是：培養(yǎng)法由于耗時長, 對臨床的早期診斷和治療基本上是沒有意義的。而PCR法是在特定的反應體系中通過樣本中結核桿菌DNA, 對其進行體外快速、高保真的復制增殖, 使標本中極微量的結核桿菌DNA被迅速放大到巨大的信號而被檢測到, 具有高特異性、高靈敏度、快速簡便等特點。本次實驗結果其拷貝數5.88×102～3.29×105copy/ml足以說明這一點。其陽性率與抗酸染色法、培養(yǎng)法比較, 分別高出了29.8%、19.5%。并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標本在PCR法中100%陽性。突顯了PCR法的高準確度和高靈敏度。此特點已有報道［2,3］。PCR法在定性分析中, 因對擴增產物要進行瓊脂電泳, 存在PCR污染問題?？梢蛭廴径霈F假陽性。但本次實驗是定量分析, 整個反應體系是邊擴增邊檢測, 反應體系是一個密閉的反應體系。很少存在污染而呈現假陽性。因而在57例非肺外結核病例中, PCR法均為陰性。這也從另一方面說明了PCR法的高特異性和高靈敏性。

綜上所述, PCR法檢測結核桿菌, 其靈敏度和準確度明顯高于其他檢測方法。具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點, 在肺外結核的早期診斷和治療中具有重要的應用價值,應成為一種成熟的常規(guī)方法而大力推廣。使其在結核病的診治中發(fā)揮重要的作用。

［1］ 金建東.熒光定量PCR檢測痰結核桿菌 DNA 及其臨床應用.齊齊哈爾醫(yī)學院學報, 2010, 31(22):3565-3566.

［2］ 羅振元, 黃盛文, 吳嫻,等.1624例不同類型樣本結核桿菌DNA檢測結果分析.醫(yī)學信息(上旬刊), 2010, 23(9):3376-3378.

［3］ 丁娟娟, 陳卓昌.熒光定量PCR檢測胸腔積液中結核分支桿菌DNA的臨床研究.山東醫(yī)藥, 2012, 52(20):71-72.

2014-07-16］

756299 寧夏西吉縣人民醫(yī)院檢驗科(高登)；寧夏西吉白崖鄉(xiāng)衛(wèi)生院(肖輝)