靈芝孢子提取物對裸鼠卵巢上皮性癌細(xì)胞生長的影響

楊 超，班 玲，王 亮，劇蘊(yùn)慧，申莉瑛，趙素芬(.河北省石家莊市第二醫(yī)院婦科，河北 石家莊 05005；.河北省胸科醫(yī)院呼吸科，河北 石家莊 05004；3.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦科，河北 石家莊 050000)

·論著·

靈芝孢子提取物對裸鼠卵巢上皮性癌細(xì)胞生長的影響

楊 超1，班 玲1，王 亮2，劇蘊(yùn)慧1，申莉瑛1，趙素芬3*
(1.河北省石家莊市第二醫(yī)院婦科，河北 石家莊 050051；2.河北省胸科醫(yī)院呼吸科，河北 石家莊 050041；3.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦科，河北 石家莊 050000)

目的探討破壁靈芝孢子提取物對裸鼠卵巢上皮性癌細(xì)胞生長的影響。方法建立裸鼠移植性人卵巢上皮性癌模型24只，隨機(jī)分為對照組、紫杉醇組、靈芝組及靈芝+紫杉醇組，每組6只。比較各組腫瘤體積、平均瘤質(zhì)量及抑瘤率。結(jié)果對照組瘤體體積增大最明顯，靈芝+紫杉醇組瘤體體積增大最慢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；靈芝組、紫杉醇組、靈芝+紫杉醇組瘤質(zhì)量低于對照組，其中靈芝+紫杉醇組平均瘤質(zhì)量最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。靈芝+紫杉醇組抑瘤率高于紫杉醇組和靈芝組(P<0.01)。結(jié)論靈芝孢子提取物具有抑制裸鼠卵巢上皮性癌細(xì)胞生長的作用，并增強(qiáng)化療藥物紫杉醇的作用。

卵巢腫瘤；破壁靈芝孢子粉；裸鼠移植模型

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.09.027

卵巢癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，病死率居婦科惡性腫瘤的首位，是嚴(yán)重威脅婦女生命的疾病。近年來，從中草藥和天然植物中提取和尋找防治腫瘤的有效成分是治療腫瘤的希望和新途徑之一，靈芝孢子內(nèi)所含營養(yǎng)物質(zhì)是靈芝子實(shí)體的數(shù)十倍，目前對靈芝孢子粉的抗腫瘤研究和利用越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的重視。本研究應(yīng)用靈芝+紫杉醇抑制移植性人卵巢上皮性癌，報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料：靈芝孢子粉批號為083668，購自加拿大energene天然藥品有限公司；人卵巢上皮癌細(xì)胞株SKOV3，為加拿大約克大學(xué)生命科學(xué)系Chun Peng實(shí)驗(yàn)室保存。 實(shí)驗(yàn)動物采用BALB/C/nu/nu無胸腺裸小鼠，共24只，雌性，4～5周齡，體質(zhì)量16～20g。購于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，飼養(yǎng)于無菌實(shí)驗(yàn)室的凈化空氣層流架中。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物模型的建立及分組：用注射器抽取對數(shù)生長期人卵巢上皮癌細(xì)胞株SKOV3 5×105個細(xì)胞，接種于裸鼠背側(cè)近后肢處，建立裸鼠移植性人卵巢上皮性癌模型，隨機(jī)分為對照組、紫杉醇組、靈芝組及靈芝+紫杉醇組，每組6只裸鼠。

1.2.2 給藥方法及濃度：接種1周后開始給藥，靈芝組裸鼠破壁靈芝孢子粉按濃度500mg/kg給予灌胃，每周1次，連續(xù)4周；紫杉醇組裸鼠紫杉醇按30mg/kg給予腹腔內(nèi)注射，每周1次，連續(xù)4周；靈芝+紫杉醇組同時給予靈芝孢子和紫杉醇(給藥方法同上)，連續(xù)4周；對照組每天灌胃相同體積0.9%氯化鈉注射液。

1.2.3 檢測指標(biāo)：每天觀察裸鼠飲食、精神、體質(zhì)量變化，每周測量移植瘤的最長徑(a)及最短徑(b)，根據(jù)公式計算腫瘤體積。末次給藥后24h將裸鼠處死，計算抑瘤率=(對照組腫瘤體積-實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積)/(對照組腫瘤體積)×100%。

2 結(jié) 果

各組在第1周時腫瘤尚未形成，第2周以后瘤體開始增大，到第4周，瘤體增長速度明顯不同，對照組生長最大，靈芝組生長受到明顯抑制，紫杉醇較靈芝組抑制更強(qiáng)，但抑制最強(qiáng)的是靈芝+紫杉醇組(圖1)。各組腫瘤平均質(zhì)量，靈芝組、紫杉醇組和靈芝+紫杉醇組均低于對照組(P<0.01)，靈芝+紫杉醇組又低于靈芝組和紫杉醇組(P<0.01)。靈芝+紫杉醇組抑瘤率低于靈芝組和紫杉醇組(P<0.01)。見表1。

圖1 各組腫瘤體積變化情況

組別瘤質(zhì)量(g)抑瘤率(%)對照組0．98±0．28-紫杉醇組0．64±0．12?36．2±4．72靈芝組0．64±0．18?36．9±5．36靈芝+紫杉醇組0．41±0．26?#Δ56．7±3．59#Δ F6．86638．161 P<0．01<0．01

*P<0.01與對照組比較 #P<0.01與靈芝組比較 ΔP<0.01與紫杉醇組比較(q檢驗(yàn))

3 討 論

靈芝孢子是靈芝的種子，有一層非常堅韌的外壁，有抗腫瘤[1]、降血糖、增強(qiáng)免疫功能、抗炎、抗病毒、保肝、降血清膽固醇、抗輻射作用，它的相對分子質(zhì)量在50 000以上，主要以β-葡聚糖為主[2-3]。此外，還有肽多糖、甘露蒲聚糖、阿拉伯半乳聚糖、半乳葡聚糖、雜多糖等。靈芝多糖具有抗腫瘤及提高機(jī)體免疫活性的功能[4-5]。最初發(fā)現(xiàn)靈芝多糖的抗腫瘤作用是在移植性肉瘤小鼠的腹腔積液中[6]。靈芝多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)是決定其生物活性功能的主要因素，相對分子質(zhì)量大小直接影響其抑制腫瘤的作用，只有當(dāng)靈芝多糖的相對分子質(zhì)量>1×104時才能明顯抑制腫瘤的活性，其中α-葡聚糖和β-葡聚糖也有不同的抗癌機(jī)制，α型結(jié)構(gòu)多無活性，它在主鏈上的取代度和側(cè)鏈長度的不同決定了水溶液中的構(gòu)象和β-D-(1-3)葡聚糖的生物活性[7]。α-葡聚糖是通過結(jié)合的補(bǔ)體受體3介導(dǎo)來實(shí)現(xiàn)靈芝多糖的抗癌活性。

靈芝孢子粉通過提高小鼠自身免疫力對小鼠肝癌細(xì)胞株HAC、小鼠白血病細(xì)胞株YAC-1和小鼠肥大細(xì)胞性白血病細(xì)胞株P(guān)815腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生一定的殺傷性，其中靈芝孢子粉的總抑瘤率為42.2%，靈芝孢子粉組的殺傷活性分別為27.3%、23.4%和20.0%。說明靈芝孢子粉通過激活和提高細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(特異性)和自然殺傷細(xì)胞、非特異性殺傷細(xì)胞的抗腫瘤作用來抑制腫瘤細(xì)胞增殖[8]。體外研究[9]發(fā)現(xiàn)靈芝孢子可使人卵巢上皮癌細(xì)胞OV2008停滯于G1/S期。體內(nèi)研究[10]發(fā)現(xiàn)，靈芝孢子可通過周期阻滯來誘導(dǎo)裸鼠卵巢上皮性癌細(xì)胞凋亡。

本研究給予裸鼠卵巢癌模型不同用藥，靈芝+紫杉醇組抑瘤率為(56.7±3.59)%，靈芝組為(36.9±5.36)%，紫杉醇組為(36.2±4.72)%，表明靈芝孢子提取物具有抑制裸鼠卵巢上皮性癌細(xì)胞生長的作用，并增強(qiáng)化療藥物紫杉醇的作用。

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[3] 趙桂梅，張麗霞，于挺敏，等.靈芝孢子粉水溶性多糖的分離、純化及結(jié)構(gòu)研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2000,17(2):182-185.

[4] 謝明，譚玉林，麻明彪，等.化療聯(lián)合中藥對人乳腺癌裸鼠移植瘤生長及TMSG-1表達(dá)的影響[J].湘南學(xué)院學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2013,15(4):1-5.

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[6] 陳娟，余英豪.破壁靈芝孢子粉對小鼠T細(xì)胞淋巴瘤的抑制作用[J].實(shí)驗(yàn)動物與比較醫(yī)學(xué)，2011,31(6):426-431.

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(本文編輯：趙麗潔)

2014-06-19；

2014-08-27

石家莊市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計劃項(xiàng)目(12146993)

楊超(1980-)，女，河北石家莊人，河北省石家莊市第二醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事婦科疾病診治研究。

*通訊作者。E-mail:zhaosfchina@yahoo.com.cn

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1007-3205(2014)09-1070-02