肺炎支原體快速培養(yǎng)法在呼吸道感染診斷中的應(yīng)用

楊笑瓊??秦亞軍??詹劍峰

[摘要] 目的 探討快速培養(yǎng)法在診斷肺炎支原體導(dǎo)致的呼吸道感染中的作用。 方法 對(duì)2011年12月～2013年12月來(lái)院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例進(jìn)行研究，留取咽拭子和血清，分別進(jìn)行快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR法和血清抗體法檢驗(yàn)，并就快速培養(yǎng)法與其余兩種不同的檢測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。 結(jié)果 快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗(yàn)法檢測(cè)陽(yáng)性率分別為30.0%（60/200）、29.0%（58/200）和16.5%（33/200），快速培養(yǎng)法陽(yáng)性率與熒光定量PCR法檢測(cè)陽(yáng)性率相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而快速培養(yǎng)法檢測(cè)陽(yáng)性率與血清抗體法檢測(cè)陽(yáng)性率相比較，快速培養(yǎng)法檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于血清抗體檢測(cè)法，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 快速培養(yǎng)法檢測(cè)肺炎支原體的敏感性和靈敏性可與熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)果相媲美，但裝備技術(shù)要求和檢測(cè)成本明顯低于熒光定量PCR法，同時(shí)敏感性和靈敏性顯著高于血清抗體檢測(cè)法。快速培養(yǎng)法檢測(cè)肺炎支原體不僅能有效滿足臨床需要，同時(shí)兼具有成本低的特點(diǎn)，因此這種方法具有較高的性價(jià)比，尤其適用于基層醫(yī)院。

[關(guān)鍵詞] 肺炎支原體；快速培養(yǎng)法；熒光定量PCR法；血清抗體檢驗(yàn)法

[中圖分類號(hào)] R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）15-84-03

肺炎支原體是介于病毒和細(xì)菌之間的一種較為特殊的微生物[1]。人體呼吸道黏膜存在著多種支原體，已經(jīng)被證實(shí)可以引起肺炎的支原體只有肺炎支原體[2]。由于可以引起肺炎的病原體種類較多，醫(yī)生僅僅根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)無(wú)法確定是哪種病原微生物導(dǎo)致患者發(fā)生肺炎，因而無(wú)法對(duì)癥下藥[3]，因此，病原體的檢測(cè)對(duì)于疾病的診斷和指導(dǎo)臨床用藥至關(guān)重要[4]。肺炎支原體常用的檢測(cè)方法有快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗(yàn)法[5]。本研究就2011年12月～ 2013年12月來(lái)院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例進(jìn)行研究，分別使用三種不同的檢測(cè)方法對(duì)每位患者進(jìn)行檢測(cè)，并將快速培養(yǎng)法的檢測(cè)結(jié)果與熒光定量PCR法和血清抗體檢驗(yàn)法的檢測(cè)結(jié)果相比較，探討快速培養(yǎng)法在診斷肺炎支原體導(dǎo)致的呼吸道感染中的應(yīng)用價(jià)值。研究取得滿意的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2011年12月～2013年12月來(lái)院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例，其中男118例，女82例，年齡3～25歲，平均（11.5±5.2）歲。對(duì)每位患者取兩份咽拭子并抽取靜脈血3mL，其中取咽拭子前患者必須先漱口。兩份咽拭子分別用于快速培養(yǎng)和熒光定量PCR檢測(cè)，靜脈血分離血清后做肺炎支原體特異性IgM抗體檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 快速培養(yǎng)法 快速培養(yǎng)法檢測(cè)使用肺炎支原體快速檢測(cè)試劑盒（武漢菁華時(shí)間科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)2010-3-16-03），將一份咽拭子置于液體培養(yǎng)基中攪拌數(shù)次，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h后開(kāi)始觀察結(jié)果，如必要可將觀察時(shí)間延長(zhǎng)到1～ 4周。如果液體培養(yǎng)基顏色變?yōu)辄S色，再接著進(jìn)行40倍光學(xué)顯微鏡觀察，如果顯微鏡下沒(méi)有發(fā)現(xiàn)細(xì)菌或者真菌，則結(jié)果為陽(yáng)性，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌或者真菌則結(jié)果為陰性；如果液體培養(yǎng)基顏色仍保持為原紅色或者非清亮的黃色則結(jié)果為陰性。

1.2.2 熒光定量PCR法 核酸定量檢測(cè)試劑盒選擇中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品，使用羅氏公司生產(chǎn)的PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，所有操作步驟均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行，結(jié)果直接以陽(yáng)性或者陰性報(bào)告。

1.2.3 血清抗體檢測(cè)法 將患者血清以3000r/min轉(zhuǎn)速離心10min后取出血清，然后進(jìn)行肺炎支原體特異性IgM抗體檢測(cè)，采用肺炎支原體特異性IgM抗體檢測(cè)試劑盒（膠體金法）進(jìn)行測(cè)試。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，如果沒(méi)有出現(xiàn)質(zhì)控點(diǎn)則表明試驗(yàn)操作不當(dāng)或者試劑失效，應(yīng)當(dāng)重新按照規(guī)定測(cè)試；如果出現(xiàn)質(zhì)控點(diǎn)則表示試驗(yàn)正常，可以進(jìn)行結(jié)果判定，若僅有質(zhì)控點(diǎn)則表明結(jié)果為陰性，只有在出現(xiàn)2個(gè)斑點(diǎn)的情況下才能確定試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

將快速培養(yǎng)法的檢測(cè)結(jié)果（即檢出的陽(yáng)性率）分別與熒光定量PCR法和血清抗體檢驗(yàn)法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行兩兩比較，用陽(yáng)性檢出率的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義判定檢驗(yàn)方法的效果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)經(jīng)epidata輸入計(jì)算機(jī)，應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，兩組間陽(yáng)性率的比較采用x2檢驗(yàn)，α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

200例疑似患者分別通過(guò)快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗(yàn)法檢測(cè)陽(yáng)性率分別為30.0%（60/200）、29.0%（58/200）和16.5%（33/200），快速培養(yǎng)法陽(yáng)性率與熒光定量PCR法檢測(cè)陽(yáng)性率相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.05，P>0.05）；快速培養(yǎng)法檢測(cè)陽(yáng)性率與血清抗體法檢測(cè)陽(yáng)性率相比較，快速培養(yǎng)法檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于血清抗體檢測(cè)法，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=10.21，P<0.05）。具體比較見(jiàn)表1、2。

3 討論

肺炎支原體比較容易引起人肺炎，據(jù)相關(guān)資料表明肺炎支原體引起的肺炎占到非細(xì)菌性肺炎的一半以上[6]。肺炎支原體引起的人體肺組織病理變化主要表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎，又稱為原發(fā)性非典型

肺炎[7]。肺炎支原體可以從急性感染者的咽部、肺部、氣管、支氣管以及胸水中分離出來(lái)，也有部分人是肺炎支原體攜帶者。攜帶者一般無(wú)臨床癥狀，但其可作為重要的傳染源，是疾病預(yù)防控制過(guò)程中需要加以重視的環(huán)節(jié)[8]。支原體肺炎的臨床癥狀一般較為輕微，發(fā)病緩慢，患者發(fā)熱、咳嗽以及黏液或者膿性痰甚至血痰等癥狀較常見(jiàn)，一般來(lái)說(shuō)不具有明顯的肺部體征[9]。

支原體肺炎的感染途徑主要是因?yàn)榻】等私佑|了或者吸入了肺炎支原體患者排出的分泌物，人群對(duì)于肺炎支原體的抵抗力較弱，普遍易感，患者中兒童和青少年占絕大部分[10]。支原體肺炎的發(fā)生具有明顯的季節(jié)性，大多發(fā)生于夏末秋初，春季和冬季也有少量散發(fā)。研究顯示[11]，近年來(lái)肺炎支原體感染引起肺炎的發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)，尤其值得注意的是支原體肺炎在家庭或者醫(yī)院中的爆發(fā)性流行。

本研究顯示快速培養(yǎng)法陽(yáng)性率與熒光定量PCR法檢測(cè)陽(yáng)性率相比較陽(yáng)性率比較接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；快速培養(yǎng)法檢測(cè)陽(yáng)性率與血清抗體法檢測(cè)陽(yáng)性率相比較，快速培養(yǎng)法檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于血清抗體檢測(cè)法，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)研究表明PCR法檢測(cè)肺炎支原體具有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，但是PCR操作首先需要較好的設(shè)備，其次需要高素質(zhì)的人才，因此成本較高，每次檢測(cè)所需費(fèi)用非常昂貴，目前尚不具備廣泛推廣的條件[12]。而快速培養(yǎng)法檢測(cè)肺炎支原體的靈敏度和可靠性與PCR法非常接近，但每次檢測(cè)的成本較低，在患者可承受范圍以內(nèi)，因而具備廣泛推廣的條件。

綜上所述，快速培養(yǎng)法檢測(cè)肺炎支原體的敏感性和靈敏性可與熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)果相媲美，但裝備技術(shù)要求和檢測(cè)成本明顯低于熒光定量PCR法，同時(shí)敏感性和靈敏性顯著高于血清抗體檢測(cè)法。快速培養(yǎng)法檢測(cè)肺炎支原體不僅能有效滿

足臨床需要同時(shí)兼具有成本低的特點(diǎn)，因此這種方法具有較高的性價(jià)比，可以作為基層醫(yī)院檢測(cè)方法的重要選擇。

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（收稿日期：2014-04-15）