蘆根多糖對高脂誘導(dǎo)大鼠腎損傷的保護作用

徐行仙

[摘要] 目的 探討蘆根多糖對高脂誘導(dǎo)大鼠腎損傷的保護作用。 方法 制備高脂誘導(dǎo)大鼠腎損傷模型，將高脂大鼠分成3組，每組各10只，分別為蘆根多糖高（300 mg/kg）、低劑量組（150 mg/kg）和對照組，其中高劑量組每日灌胃給予蘆根多糖300 mg/kg，低劑量組每日灌胃給予蘆根多糖150 mg/kg，對照組每日給予等量純凈水，連續(xù)灌胃13周，測定24 h尿蛋白定量、血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、腎臟丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、低密度脂蛋白（LDL-C）、氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）及腎小球內(nèi)徑。 結(jié)果 與對照組比較，蘆根多糖高劑量組2 h尿蛋白定量、血清BUN、血清Cr、TC、TG、腎組織MDA、LDL-C、Ox-LDL等明顯降低（P < 0.05或P < 0.01），腎組織SOD明顯升高（P < 0.01），顯微結(jié)構(gòu)腎小球內(nèi)徑明顯減?。≒ < 0.05）；而低劑量組雖有一定的改善，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 蘆根多糖具有降脂抗氧化作用，能減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，減輕對腎臟的損傷，同時具有減輕尿蛋白排泄及減小腎小球內(nèi)徑的作用，因此其對高脂造成大鼠腎損害具有一定的保護作用。

[關(guān)鍵詞] 蘆根多糖；腎臟；抗氧化

[中圖分類號] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）07（a）-0024-04

蘆根多糖是從禾本科植物蘆葦?shù)叵赂o中提取的一種多糖成分，具有清熱、利尿、鎮(zhèn)咳、解毒、消炎等功效。臨床上主要用于發(fā)熱，尿路感染、肺膿瘍、支氣管炎等病的治療[1]。有文獻(xiàn)報道蘆根多糖具有保護肝臟的作用，其主要作用是通過抗氧化作用來實現(xiàn)[2-4]，雖有報道稱其可改善糖尿病小鼠的糖脂代謝[5]，但對肥胖大鼠的腎臟保護未見報道?；趯μJ根多糖的開發(fā)研究，筆者主要通過制備高脂誘導(dǎo)肥胖大鼠，探討蘆根多糖對肥胖大鼠腎臟的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

健康雄性Wistar大鼠40只，體重180～220 g，購自上海市西普爾-必凱實驗動物有限責(zé)任公司，許可證號：SCXK（滬）2008-0016。

1.1.2 藥物提取

參考相關(guān)文獻(xiàn)[3]提供的資料提取獲得蘆根多糖。

1.1.3 試劑與儀器

肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、低密度脂蛋白（LDL-C）、蛋白測定試劑盒均購于南京建成生物公司；氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）試劑盒購于ADL公司。酶標(biāo)儀：芬蘭雷博MK3，全自動生化儀：日本希森美康JCA-BM6010/C。

1.2 方法

1.2.1 肥胖大鼠模型的制備

Wistar雄性大鼠體給予普通標(biāo)準(zhǔn)飼料，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后；取10只大鼠作為空白組給予普通標(biāo)準(zhǔn)飼料，其余大鼠給予高脂飼料（配方：基礎(chǔ)飼料中白糖10%、豬油10%、蛋黃粉10%，膽固醇2%），連續(xù)喂養(yǎng)13周。

1.2.2 分組及給藥方法

給予高脂飼料大鼠分成3組，每組各10只，分別為高劑量組、低劑量組及對照組，其中高劑量組每日灌胃給予蘆根多糖300 mg/kg，低劑量組每日灌胃給予蘆根多糖150 mg/kg，對照組每日給予等量純凈水，空白組同對照組干預(yù)。連續(xù)13周。

1.2.3 24 h尿蛋白定量

于12周末將大鼠放在洗凈的代謝籠里，收集24 h的尿液，留尿期間禁食，不禁水，記錄尿量后取5 mL，2500 r/min，離心10 min，考馬斯亮藍(lán)G-250法（CBB）測定24 h尿蛋白定量（24 h UAlb，mg/24 h）。

1.2.4 血清指標(biāo)測定

實驗進(jìn)行至13周末，大鼠禁食12 h，麻醉后腹主動脈取血，離心，取上清液，分采用比色法（除蛋白）測定血清Cr，二乙酰-肟比色法測定BUN，TC酶法測定TC，TG酶法測定TG。

1.2.5 腎組織MDA、SOD的測定

13周末，解剖大鼠，取出腎臟，放置液氮中。測定時取出約0.1 g的腎組織，加9倍體積生理鹽水，在冰浴中勻漿后，離心，取上清液，分別采用硫代巴比妥酸（TBA）法測定MDA與羥胺法測定SOD。

1.2.6 腎組織LDL-C與Ox-LDL的測定

1.2.6.1 腎組織LDL-C的測定 13周末，解剖大鼠，取出腎臟，放置液氮中。測定時取出約0.1 g的腎組織加入20倍體積的氯仿-甲醇（2∶1）勻漿液中，在冰浴中勻漿后，室溫下慢搖動過夜，2000 r/min，離心10 min，取上清液，加入0.2倍體積的生理鹽水，充分混勻，2000 r/min，離心10 min，除去上層液相，下層有機相在真空抽干機中抽干后，加入1 mL氯仿充分溶解脂質(zhì)并采用比色法進(jìn)行測定。

1.2.6.2 腎組織Ox-LDL測定 取出0.1 g腎組織加入10倍體積的生理鹽水，于冰浴中制成10%勻漿，4000 r/min，離心10 min，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測。

1.2.7 腎小球內(nèi)徑的測定

腎組織常規(guī)處理后，經(jīng)過碘酸雪夫（PAS）染色，光鏡下觀察腎小球病變。隨機選取含血管極和（或）尿極的最大腎小球的區(qū)域拍攝圖像，用MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)測量該腎小球相互垂直的兩個最大直徑，每張組織切片至少檢測5個腎小球，取平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 16.0對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 蘆根多糖對24 h尿蛋白定量的影響

從表1可知，與空白組比較，對照組24 h UALb明顯升高（P < 0.01）。與對照組比較，蘆根多糖高劑量24 h UALb顯著降低（P < 0.05）。表明蘆根多糖具有一定降低尿蛋白的作用。

2.2 蘆根多糖對血肌酐、尿素氮的影響

從表2可知，與空白組比較，對照組Scr、BUN均明顯升高（P < 0.01）。與對照組比較，蘆根多糖高劑量Scr、BUN均顯著降低（P < 0.01或P < 0.05），但蘆根多糖低劑量組無明顯變化。表明蘆根多糖具有一定的改善腎功能的作用。

2.3 蘆根多糖對血脂的影響

從表3可知，與空白組比較，對照組血清TC、TG均顯著升高（P < 0.01）。與對照組比較，蘆根多糖高劑量組血清TC、TG均顯著下降（P < 0.01）；而低劑量組對血清TC、TG有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。表明蘆根多糖具有一定的降脂作用。

2.4 蘆根多糖對腎組織丙二醛與超氧化物歧化酶的影響

從表4可知，與空白組比較，對照組腎組織MDA明顯升高，SOD明顯下降（P < 0.01）。與對照組比較，蘆根多糖高劑量組腎組織MDA明顯下降，SOD明顯升高（P < 0.01），但蘆根多糖低劑量組無明顯變化。表明蘆根多糖具有一定的抗氧化作用。

2.5 蘆根多糖對腎組織低密度脂蛋白與氧化低密度脂蛋白的影響

從表5可知，與空白組比較，對照組腎臟LDL-C與Ox-LDL均顯著升高（P < 0.01）。與對照組比較，蘆根多糖高劑量組腎臟LDL-C與Ox-LDL顯著降低（P < 0.01），但蘆根多糖低劑量組無明顯變化。表明蘆根多糖具有一定的抗脂質(zhì)氧化作用。

2.6 蘆根多糖對腎小球內(nèi)徑的影響

從表6可知，與空白組比較，對照組腎小球內(nèi)徑明顯升高（P < 0.01）。與對照組比較，蘆根多糖高劑量對腎小球內(nèi)徑顯著降低（P < 0.05）。表明蘆根多糖具有一定的改善腎小球內(nèi)徑的作用。

3 討論

目前對高脂飼料誘導(dǎo)的動物模型研究較多，同時也有很多報道中藥對肥胖大鼠的降脂作用及其臟器功能保護作用[6-8]。而肥胖引起的腎臟病被稱為肥胖相關(guān)性腎小球病（ORG），最早由Weisinger等[9]于1974年報道。近年來，腎臟疾病的降脂治療更被提到了一個很高的地位。然而，降脂治療是否可改善原有腎臟疾病，減少蛋白尿，減慢腎衰進(jìn)程，目前尚無統(tǒng)一認(rèn)識[10]。而且ORG的發(fā)病機制至今欠清，可能多因素參與致病。研究表明TC、TG、LDL血癥均有脂質(zhì)腎毒性， 可通過直接沉積在腎組織造成腎小球內(nèi)皮細(xì)胞損傷及腎小球硬化[11]，也可以通過損傷腎組織和動脈壁的抗氧化能力、增加腎臟內(nèi)一些細(xì)胞因子間接參與腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展。Ox-LDL具有較強的內(nèi)皮細(xì)胞毒性作用，且氧化程度越高，其損傷作用越強[12]。在腎臟，Ox-LDL與細(xì)胞膜受體結(jié)合而沉積于腎臟固有細(xì)胞內(nèi)，促使其釋放各種因子，最終引起腎小球細(xì)胞增生和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的沉積[13]。隨著疾病發(fā)展，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，腎小球內(nèi)出吞噬小泡。總之，增高的脂質(zhì)通過受體或受體后機制在腎小球內(nèi)聚集，直接或間接地影響細(xì)胞間信號傳遞、刺激MC和系膜外基質(zhì)增殖、分泌大量炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子、吸引炎癥細(xì)胞趨化和聚集，并形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致腎小球破壞和硬化[10]。

一般認(rèn)為，24 h UALb是判定腎病有無的可靠指標(biāo)，血清Cr和BUN反映早期腎損害的相關(guān)性指標(biāo)，降脂、減輕脂質(zhì)氧化可有效減輕腎臟細(xì)胞的損害，顯微結(jié)構(gòu)腎小球內(nèi)徑的減小有利于減少尿蛋白的漏出。

筆者采用高脂誘導(dǎo)大鼠制備肥胖大鼠對照，其表現(xiàn)為血脂過高及腎臟損傷等[14-15]，運用蘆根多糖每日灌胃治療，連續(xù)13周，測定血清指標(biāo)，與對照組比較，蘆根多糖高劑量組24 h UALb、血清BUN、血清Cr、TC、TG、腎組織MDA、LDL-C、Ox-LDL等明顯降低（P < 0.05或P < 0.01），腎組織SOD明顯升高（P < 0.01），顯微結(jié)構(gòu)腎小球內(nèi)徑明顯減小（P < 0.05）；低劑量組雖然有一定的改善作用，但未顯示出明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果表明，蘆根多糖具有減少尿蛋白排泄、改善腎功能、降脂、抗氧化、降低腎臟組織LDL-C與Ox-LDL、減小腎小球內(nèi)徑等作用。蘆根多糖具有降脂抗氧化作用，能減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，減輕對腎臟的損傷[16]，同時具有減輕尿蛋白排泄及減小腎小球內(nèi)徑的作用，因此其對高脂造成的大鼠腎損害具有一定的保護作用。

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（收稿日期：2014-03-06 本文編輯：衛(wèi) 軻）

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（收稿日期：2014-03-06 本文編輯：衛(wèi) 軻）

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（收稿日期：2014-03-06 本文編輯：衛(wèi) 軻）