乳癌患者原發(fā)灶、復發(fā)灶中VEGF與Cath-D蛋白的表達

寧殿賓，陳英敏，暴 雷

河北省人民醫(yī)院普外一科 石家莊 050051

乳癌患者原發(fā)灶、復發(fā)灶中VEGF與Cath-D蛋白的表達

寧殿賓△，陳英敏，暴 雷

河北省人民醫(yī)院普外一科 石家莊 050051

△男，1973年10月生，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：乳腺腫瘤，E-mail：ningdianbin@163.com

乳癌；血管內(nèi)皮生長因子；組織蛋白酶D；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

目的：檢測乳癌患者原發(fā)灶、復發(fā)灶中VEGF、組織蛋白酶D(Cath-D)蛋白的表達。方法采用免疫組化SP法檢測38例乳癌患者(有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者25例)和22例乳癌胸壁復發(fā)患者(有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者5例)原發(fā)灶、復發(fā)灶及有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達。結(jié)果正常乳腺組織，乳癌原發(fā)灶、復發(fā)灶中VEGF、Cath-D蛋白的表達差異有統(tǒng)計學意義(χ2=50.029和24.461，P<0.05)，且乳癌原發(fā)灶、復發(fā)灶中VEGF、Cath-D蛋白的表達均高于正常乳腺組織，但二組織間差異無統(tǒng)計學意義。乳癌患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF、Cath-D蛋白的表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(χ2=9.017和5.963，P<0.05)。乳癌組織中VEGF和Cath-D蛋白的表達呈正關(guān)聯(lián)(rP=0.411,P<0.001)。結(jié)論乳癌原發(fā)灶、復發(fā)灶及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳癌組織中VEGF與Cath-D蛋白高表達，二者可能在乳癌復發(fā)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起協(xié)同作用。

據(jù)統(tǒng)計，我國每年女性乳癌發(fā)病16.9萬，死亡約4.5萬;乳癌居女性常見惡性腫瘤的第2位，居女性常見惡性腫瘤死亡原因的第6位[1]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和局部復發(fā)是乳癌預(yù)后的重要影響因素之一。惡性腫瘤的生長、侵襲及轉(zhuǎn)移受多種因素的影響，是一個多步驟的復雜過程，與腫瘤的血管生成密切相關(guān)。近年來，VEGF、組織蛋白酶D(cathepsin-D,Cath-D)作為判斷乳癌患者復發(fā)、轉(zhuǎn)移的重要指標而備受關(guān)注[2-4]。作者應(yīng)用免疫組化SP法檢測了乳癌原發(fā)灶、復發(fā)灶以及有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳癌組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達，分析其相關(guān)性，報道如下。

1 對象與方法

1.1研究對象選擇河北省人民醫(yī)院2001年1月至2012年12月行手術(shù)治療的乳癌患者，均為女性，其中乳癌原發(fā)患者38例，乳癌胸壁復發(fā)患者22例；原發(fā)患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者25例,復發(fā)患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者5例；年齡28～64歲，平均年齡52歲；Ⅰ期8例,Ⅱ期30例,Ⅲ期22例；浸潤性導管癌35例，浸潤性小葉癌25例。同時選取38例乳癌原發(fā)患者手術(shù)切除的癌旁正常乳腺組織作為對照。

1.2Cath-D和VEGF的免疫組化SP法檢測術(shù)中切除的乳癌原發(fā)灶、復發(fā)灶標本經(jīng)體積分數(shù)10%甲醛溶液固定，4 μm連續(xù)切片，保存待測。采用免疫組化SP法進行染色，嚴格按照試劑說明書操作。Cath-D 和鼠抗人VEGF 單抗均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，使用時均按1:100稀釋。主要步驟:切片脫蠟、水化后以體積分數(shù)3%H2O2孵育10 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶; 抗原修復后分別滴加一抗，37 ℃ 孵育1～2 h 或過夜，PBS 沖洗，5 min×3次; 滴加生物素標記的二抗，37 ℃孵育20 min，PBS 沖洗，5 min×3 次; 滴加辣根酶標記鏈霉卵白素，37 ℃孵育20～30 min，PBS 沖洗，5 min×3次; DAB顯色; 自來水充分沖洗、復染、脫水、透明、封片。實驗均由同一病理技師操作。

1.3結(jié)果判斷每張切片由2名醫(yī)生雙盲觀測。Cath-D 蛋白陽性染色位于細胞質(zhì)，呈棕黃色。選取8個高倍鏡視野，計數(shù)8個視野中的陽性細胞總數(shù)，除以細胞總數(shù)計算陽性細胞百分比。陽性細胞百分比<20%為陰性，≥20%為陽性。VEGF蛋白陽性表達主要定位于細胞質(zhì)和細胞膜。根據(jù)染色強度和陽性細胞百分比進行綜合計分。選取5個高倍鏡視野，同上計算陽性細胞百分比。無陽性細胞計0 分，≤25%計1分，～50%計2分，～75%計3分，﹥75%計4 分; 著色強度以多數(shù)陽性細胞呈現(xiàn)的染色計分，無著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分；2項計分相加，0～2分為陰性，≥3 分為陽性。

1.4統(tǒng)計學處理應(yīng)用SPSS 11.5處理數(shù)據(jù)。采用χ2檢驗比較原發(fā)灶、復發(fā)灶、正常乳腺組織以及有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳癌組織中VEGF和Cath-D蛋白的表達，采用列聯(lián)系數(shù)分析乳癌組織中VEGF和Cath-D蛋白表達的關(guān)系。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1正常乳腺組織、乳癌原發(fā)灶和復發(fā)灶組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達比較見表1。由表1可以看出，乳癌復發(fā)灶和乳癌原發(fā)灶組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達較正常乳腺組織增強。

2.2乳癌患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF、Cath-D蛋白的表達比較見表2。由表2可以看出，乳癌患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF、Cath-D蛋白的表達較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組增強。

表1 3種組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達 例(%)

*:與正常乳腺組織相比，P<0.017。

表2 乳癌患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF、 Cath-D蛋白的表達 例(%)

2.3乳癌組織中VEGF、Cath-D蛋白表達的關(guān)系見表3。

表3乳癌組織中VEGF、Cath-D蛋白表達的關(guān)系例

VEGFCath?D陽性陰性陽性427陰性47

rP=0.411,P<0.001。

3 討論

乳癌的侵襲與轉(zhuǎn)移是一個涉及多方面因素的過程，其中腫瘤細胞的過度增殖及新血管的生成是重要的影響因素。腫瘤的生長依賴腫瘤新生血管的形成，血管生成對腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。VEGF是重要的血管生成正性調(diào)節(jié)因子和最強的促血管內(nèi)皮細胞分裂劑。有研究[3]結(jié)果顯示VEGF 是促進乳癌血管生成的重要調(diào)節(jié)因子；微血管最豐富區(qū)位于乳腺惡性腫瘤與正常組織交界區(qū)。李穎嘉等[4]研究發(fā)現(xiàn)乳腺惡性腫瘤組VEGF及其主要受體Flk-1/KDR 的表達、MVD 計數(shù)均顯著高于良性腫瘤組；VEGF 能特異性地刺激內(nèi)皮細胞增殖，具有促血管通透性作用，為血管內(nèi)皮細胞的遷移和腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)。該研究中乳癌原發(fā)組織及復發(fā)組織VEGF蛋白的表達均高于正常乳腺組織，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF蛋白的表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，與國內(nèi)研究[5-6]結(jié)果一致。這說明VEGF 蛋白表達增高可促進乳癌的發(fā)生、復發(fā)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示VEGF促進腫瘤血管內(nèi)皮細胞增殖，導致腫瘤血管數(shù)量增加，為乳癌細胞的轉(zhuǎn)移提供通道。

Cath-D是相對分子質(zhì)量為34 000的蛋白。它低濃度存在于各種細胞胞質(zhì)中,在正?；蛐∪~增生的乳腺組織中濃度都很低[7]。Cath-D 能刺激細胞生長, 活化后可以直接催化基底膜和細胞外基質(zhì)的降解，形成局部溶解區(qū)，構(gòu)成腫瘤細胞移動的通道，并間接破壞血管基膜[8]。Cath-D還可以激活Cath-B，誘導產(chǎn)生活化的尿激酶型-纖溶酶原激活劑，后者也具有與Cath-D相似的功能。該研究結(jié)果顯示乳癌原發(fā)組織及復發(fā)組織Cath-D蛋白的表達均高于正常乳腺組織，而且乳癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Cath-D蛋白的表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示Cath-D在乳癌復發(fā)和轉(zhuǎn)移中起著重要作用。有研究[9-10]顯示，Cath-D可作為上游基因調(diào)節(jié)MMP-2 表達，MMP-2可以啟動MMPs 級聯(lián)反應(yīng)，促進ECM 降解，誘導腫瘤細胞向周圍組織及淋巴結(jié)播散，同時MMP-2 可以啟動血管生成，直接促進新生血管形成，促進腫瘤生長和發(fā)生血道轉(zhuǎn)移。于湛等[11]在對胃癌的研究中同樣發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Cath-D蛋白的陽性表達率高于無轉(zhuǎn)移組，推測Cath-D蛋白可刺激癌細胞生長, 降解并破壞基底膜和細胞外基質(zhì), 為癌細胞轉(zhuǎn)移提供條件。

另外，該研究結(jié)果還顯示VEGF、Cath-D在乳癌組織中同時出現(xiàn)表達上調(diào)，存在正關(guān)聯(lián)，提示它們可能在乳癌的復發(fā)、轉(zhuǎn)移中起協(xié)同作用，具體機制有待進一步研究。

綜上所述，乳癌原發(fā)灶與復發(fā)灶及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳癌組織中VEGF與Cath-D蛋白高表達，二者可能在乳癌復發(fā)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起協(xié)同作用。聯(lián)合檢測VEGF、Cath-D的表達在判斷乳癌的復發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后方面有重要的臨床意義。

[1]張敏璐,黃哲宙,鄭瑩.中國2008年女性乳腺癌發(fā)病、死亡和患病情況的估計及預(yù)測[J].中華流行病學雜志,2012,33(10):1049

[2]烏拉木,余科達,沈鎮(zhèn)宙,等.組織蛋白酶D在乳腺導管內(nèi)癌及伴早期浸潤中的表達及其與復發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].中國癌癥雜志,2010,20(4):247

[3]李穎嘉,楊莉,夏瓊,等.乳腺腫瘤血管生成功能性變化特征及其機制[J].南方醫(yī)科大學學報,2009,29(8):1557

[4]李穎嘉,文戈,王倩.VEGF及其主要受體Flk-1/KDR在乳腺良惡性腫瘤中的表達及其意義[J].南方醫(yī)科大學學報,2009,29(1):70

[5]黃柏強,賀勇,郝秀靜,等.乳腺癌及癌旁組織中VEGF及survivin-2B mRNA的表達意義[J].第四軍醫(yī)大學學報,2008,29(16):1479

[6]雷杰,費建東,劉振顯,等.乳腺癌組織中Ang-2及VEGF的表達及意義[J].腫瘤防治研究,2008,35(4):263

[7]Masson O,Prébois C,Derocq D,et al.Cathepsin-D, a key protease in breast cancer, is up-regulated in obese mouse and human adipose tissue, and controls adipogenesis[J].PLoS One,2011,6(2):e16452

[8]Brujan I,Margaritescu C,Simionescu C,et al.Cathepsin-D expression in breast lesion: an immunohistochemical study[J].Rom J Morphol Embryol,2009,50(1):31

[9]李偉漢.乳腺癌患者癌組織中組織蛋白酶D和基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達及其判斷預(yù)后的價值[J].中國老年學雜志,2012,32(4):719

[10]Sullu Y,Demirag GG,Yildirim A,et al.Matrix metalloproteinase-2(MMP-2) and MMP-9 expression in invasive ductal carcinoma of the breast[J].Pathol Res Pract,2011,207(12):747

[11]于湛,高劍波,陳奎生,等.胃癌的螺旋CT征象與MMP-9及Cath-D蛋白表達的關(guān)系[J].鄭州大學學報:醫(yī)學版,2010,45(6):1004

(2013-11-07收稿 責任編輯徐春燕)

Expressions of VEGF and Cath-D in primary and recurrent focuses from patients with breast cancer

NINGDianbin,CHENYingmin,BAOLei

DepartmentofGeneralSurgery,HebeiProvincialPeople'sHospital,Shijiazhuang050051

breast cancer; VEGF; Cath-D; lymph node metastasis

Aim: To investigate the expressions of VEGF and Cath-D in primary and recurrent focuses from patients with breast cancer. Methods: Immunohistochemical SP method was used to detect the expressions of VEGF and Cath-D in 38 cases of breast cancer(25 with lymph node metastasis) and 22 cases of recurrent breast cancer(5 with lymph node metastasis).Results: The expressions of VEGF and Cath-D in primary focuses and recurrent focuses had no significant difference, but both of them were higher than normal breast tissue(χ2=50.029 and 24.461，P<0.05). The expressions of VEGF and Cath-D in breast cancer tissue with lymphatic metastasis were higher than that of without lymphatic metastasis(χ2=9.017 and 5.963，P<0.05). The expressions of VEGF and Cath-D in breast cancer tissue were positively associated(rP=0.411,P<0.001). Conclusion: There are high expressions of VEGF and Cath-D in primary， recurrent focuses and breast cancer tissue with lymph node metastasis from patients with breast cancer,and they may have synergetic effect on the recurrence and lymphatic metastasis of breast cancer.

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.04.034

R737.9