鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合鼻用糖皮質(zhì)激素對變應(yīng)性鼻炎模型大鼠鼻黏膜組織中ICAM-1、IL-12表達的影響

蘇 磊，耿曼英，張俊星，張 慧，孟令浩

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科 鄭州 450014

鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合鼻用糖皮質(zhì)激素對變應(yīng)性鼻炎模型大鼠鼻黏膜組織中ICAM-1、IL-12表達的影響

蘇 磊，耿曼英#，張俊星，張 慧，孟令浩

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科 鄭州 450014

#通訊作者，女，1963年1月生，教授，主任醫(yī)師，研究方向：變應(yīng)性鼻炎基礎(chǔ)研究及治療，E-mail：manying66@126.com

鹽酸賽洛唑啉；鼻用糖皮質(zhì)激素；變應(yīng)性鼻炎；細胞間黏附分子-1；白細胞介素-12；大鼠

目的：探討鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合鼻用糖皮質(zhì)激素治療變應(yīng)性鼻炎(AR)的療效。方法60只健康SD大鼠隨機分成A、B、C 3組，每組20只。以卵清白蛋白+Al(OH)3建立大鼠AR模型后， B組用糠酸莫米松治療，C組用鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合糠酸莫米松治療，A組以生理鹽水代替，共治療1周。采用HE染色方法觀察3組大鼠鼻黏膜組織中嗜酸性粒細胞(EOS)浸潤情況；用免疫組化SP法檢測大鼠鼻黏膜組織中細胞間黏附分子-1(ICAM-1)、白細胞介素-12(IL-12)的表達水平。結(jié)果與A組比較，B、C兩組大鼠鼻黏膜組織中EOS浸潤較少，C組較B組更少(F=3 001.500，P<0.001)；A組鼻黏膜組織中ICAM-1的表達量明顯高于B、C組 (P<0.05)，其中C組ICAM-1表達量極少(F=4 458.820，P<0.001)；A組鼻黏膜組織中IL-12的表達量極少，C組IL-12表達量最高(F=6 640.770，P<0.001)。結(jié)論鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合鼻用糖皮質(zhì)激素治療可有效降低AR的鼻黏膜炎癥反應(yīng)，其療效優(yōu)于單純運用鼻用糖皮質(zhì)激素。

變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis，AR)是耳鼻喉科的常見病，其主要臨床表現(xiàn)為鼻塞、流涕、打噴嚏等，盡早清除和緩解上述癥狀是改善AR患者生活質(zhì)量的主要途徑。AR發(fā)病機制復(fù)雜，目前尚未發(fā)現(xiàn)藥物可完全將其治愈。鼻用糖皮質(zhì)激素為治療AR的一線用藥，對緩解AR的癥狀效果較佳[1]。近年來，有學(xué)者提出鼻用糖皮質(zhì)激素聯(lián)合鼻用血管收縮劑在緩解AR癥狀上優(yōu)于單純應(yīng)用鼻用糖皮質(zhì)激素[2]。血管收縮劑的代表藥物為麻黃素，因副作用較大，慎用于臨床。鹽酸賽洛唑啉是新一代鼻用血管收縮劑，可直接激動腎上腺素α受體引起血管收縮，快速減輕炎癥所致的充血和水腫，在慢性鼻炎中的療效已被證實[3]，且副作用少。細胞間黏附分子-1(cell adhesion molecule-1，ICAM-1)在AR中起著重要作用。白細胞介素-12(IL-12)能誘導(dǎo)CD4+Th細胞向Th1型細胞分化，從而抑制Th2型細胞的產(chǎn)生和特異性IgE的合成，抑制嗜酸性粒細胞(EOS)的聚集和浸潤，并誘導(dǎo)其凋亡，在各個環(huán)節(jié)對AR發(fā)病起到一定的調(diào)節(jié)作用。該實驗通過制備大鼠AR模型，觀察鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合糠酸莫米松治療前后鼻黏膜組織中ICAM-1、IL-12水平的變化，探討兩藥聯(lián)用治療AR的療效。

1 材料與方法

1.1實驗動物及分組健康SD大鼠60只(由河南省實驗動物中心提供)，雌雄不限，4～6周齡，體重180～220 g，采用隨機數(shù)字表法分為3組，每組20只，A組為對照組，B組為糠酸莫米松治療組，C組為鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合糠酸莫米松治療組。

1.2動物造模及組織制備所有動物均采用卵清白蛋白(ovalbumin，OVA)致敏建立大鼠AR模型[4-5]：首先將配好的含OVA(10 mg)+Al(OH)3干粉(20 mg)變應(yīng)原混懸液1 mL對大鼠腹腔注射行基礎(chǔ)致敏，隔日1次，共7次。隨后進行致敏加強，即以50 g/L OVA混懸液50 μL雙側(cè)滴鼻進行鼻內(nèi)局部激發(fā)，1次/d，共2周。從第1次給藥開始記錄鼻部癥狀[4]:如鼻癢(致敏動物用前爪抓鼻)、噴嚏、清涕等出現(xiàn)的時間、嚴重程度，按評分標準評分，疊加分數(shù)，計總分，總分超過5分者為造模成功。模型建立成功后，B組以糠酸莫米松噴鼻治療，各1噴/側(cè)，2次/d，共7 d；C組以鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合糠酸莫米松鼻噴霧劑噴鼻治療，各1噴/側(cè)，2次/d，共7 d；A組大鼠以生理鹽水代替。治療結(jié)束后，以戊巴比妥鈉溶液(40 mg/kg)腹腔注射麻醉，斷頭法處死大鼠，迅速采集大鼠鼻呼吸區(qū)黏膜組織并用體積分數(shù)10%甲醛固定。

1.3組織病理學(xué)觀察取固定好的鼻黏膜切片行HE染色，200倍光學(xué)顯微鏡下觀察EOS浸潤情況，鏡下其主要特點為分葉雙核，細胞質(zhì)被染成紅色。在每張標本中選取5個高倍鏡視野，計數(shù)EOS數(shù)目。取其平均數(shù)作為最終結(jié)果，并將高倍鏡視野下較為典型的圖片進行拍照。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 18.0進行分析，應(yīng)用單因素方差分析比較3組大鼠治療前后的鼻部癥狀評分改變以及大鼠鼻黏膜組織中EOS、ICAM-1和IL-2表達的差異，兩兩比較用Bonferroni法,檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1各組大鼠治療前后鼻部癥狀評分比較見表1。3組動物激發(fā)后均出現(xiàn)噴嚏、搔鼻和流清涕等AR的典型癥狀，鼻部癥狀評分均>5分。治療后B、C組大鼠鼻部癥狀較A組明顯減輕。

表1 各組大鼠治療前后鼻部癥狀評分比較

*:F=319.221,P<0.001。

2.2組織病理學(xué)觀察見圖1、表2。A組大鼠鼻黏膜組織中呈現(xiàn)出大量炎性細胞浸潤，有較明顯的杯狀細胞和腺體增生，出現(xiàn)大面積的纖毛損傷，EOS數(shù)量較其他兩組明顯增多；B組大鼠鼻黏膜較為完整，未見明顯腺腔及血管擴張，有少量杯狀細胞和腺體局限增生，有極少量炎性細胞浸潤；C組大鼠鼻黏膜完整，EOS浸潤很少，上皮基本完整，血管稍有擴張，偶見炎性細胞浸潤。

圖1 各組HE染色鏡檢結(jié)果(×400)

2.3大鼠鼻黏膜組織中ICAM-1和IL-12蛋白表達情況見圖2、表2。ICAM-1在大鼠鼻黏膜組織中主要表達于上皮細胞、嗜酸或堿性粒細胞等炎性細胞的胞質(zhì)內(nèi)。IL-12在大鼠鼻黏膜組織中主要分布在上皮細胞和腺體上皮細胞質(zhì)中。

圖2 各組大鼠鼻黏膜組織中ICAM-1(上排)和IL-12(下排)蛋白的表達(SP,×400)

表2 各組大鼠鼻黏膜組織中EOS、ICAM-1、IL-12的表達

*:與A組比較，P<0.05；#：與B組比較，P<0.05。

3 討論

AR是一種全球性常見性疾病[6]，嚴重影響人們的生活質(zhì)量。目前針對AR的治療仍缺乏行之有效的治療手段，因此人們在不斷地努力揭示AR的發(fā)病機制，尋求高效、毒副作用小且穩(wěn)定持久的治療方法。該實驗中3組動物被OVA抗原預(yù)激發(fā)后，均出現(xiàn)了噴嚏、搔鼻和流清涕等典型的AR癥狀，評分遠遠高于5分，說明模型構(gòu)建成功。治療后，大鼠AR癥狀明顯緩解，且鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合糠酸莫米松治療組大鼠AR癥狀緩解更為理想，提示糖皮質(zhì)激素與血管收縮劑聯(lián)合應(yīng)用治療AR較單用糖皮質(zhì)激素療效更佳。

AR的一個主要病理特征是以EOS浸潤為主的鼻黏膜慢性炎癥[7]。有研究[8]顯示，EOS在機體炎癥部位聚集時可出現(xiàn)一種自動放大效應(yīng)，這種效應(yīng)能夠活化機體中白細胞及其他結(jié)構(gòu)性細胞，使這些細胞能更好地釋放出更多的趨化因子、細胞因子、炎癥介質(zhì)等物質(zhì)，從而進一步加重機體的炎癥反應(yīng)。經(jīng)過不同干預(yù)措施后，A組大鼠鼻黏膜呈現(xiàn)大量炎性細胞浸潤，EOS浸潤計數(shù)明顯多于B、C組；與B組相比，C組大鼠鼻黏膜未見明顯的EOS浸潤，說明聯(lián)合用藥對于抑制AR的炎癥反應(yīng)作用明顯。

在正常情況下，ICAM-1在人體單核細胞、上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、淋巴細胞等細胞表面呈極低水平表達，但當受到一些過敏原，細胞因子(如INF-γ、IL-1β、TNF-α)或缺氧等刺激后，其表達會迅速上調(diào)，廣泛表達于造血及非造血來源的多種細胞表面，參與并維持炎癥反應(yīng)及相關(guān)的免疫應(yīng)答[9]。該實驗結(jié)果顯示，A組動物鼻黏膜中可見大量ICAM-1陽性細胞，B組和C組只有少量ICAM-1陽性細胞；與B組相比，C組ICAM-1表達量更少，說明ICAM-1的大量表達與AR的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)聯(lián)性。

IL-12主要是由單核細胞和巨噬細胞分泌，它的產(chǎn)生能夠誘導(dǎo)CD4+Th細胞向Th1型細胞分化，進而能夠平衡Th2型細胞的功能性亢進，抑制Th2型細胞產(chǎn)生和特異性IgE合成，從而進一步抑制EOS的聚集和浸潤以及誘導(dǎo)細胞凋亡。該實驗結(jié)果顯示，IL-12在大鼠鼻黏膜中主要分布在上皮細胞和一些腺體上皮細胞中；A組大鼠鼻黏膜中IL-12表達量極少，而B組、C組表達量明顯增加，且C組IL-12表達量最高。有學(xué)者[10]曾經(jīng)用糖皮質(zhì)激素布地奈德對AR小鼠在激發(fā)刺激前局部鼻腔滴鼻進行干預(yù)，其結(jié)果顯示，小鼠鼻腔中IL-12的表達量明顯增高，EOS浸潤的數(shù)量則與IL-12的表達呈負相關(guān)，提示IL-12的表達增強與EOS浸潤降低存在一定的相關(guān)性，該實驗結(jié)果與上述文獻中的結(jié)論相一致。

總之，鹽酸賽洛唑啉聯(lián)合鼻用糖皮質(zhì)激素治療可有效降低AR的鼻黏膜炎癥反應(yīng)，緩解鼻黏膜水腫，有效緩解鼻塞、打噴嚏等癥狀，其療效優(yōu)于單純運用鼻用糖皮質(zhì)激素。兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用的作用機制可能與減少鼻黏膜中ICAM-1的表達，增加鼻黏膜中IL-12的表達有關(guān)。但由于該實驗干預(yù)時間較短，特別是鹽酸賽洛唑啉作為近年來的一種新型藥物，其遠期療效仍需進一步探討。

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(2013-08-09收稿 責(zé)任編輯趙秋民)

Effects of combination of xylometazoline hydrochloride and nasal corticosteroids on expressions of ICAM-1 and IL-12 in nasal mucosa from rats with allergic rhinitis

SULei，GENGManying，ZHANGJunxing，ZHANGHui，MENGLinghao

DepartmentofOtolaryngology,theSecondAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450014

xylometazoline hydrochloride;nasal corticosteroid;allergic rhinitis;ICAM-1;IL-12;rat

Aim: To investigate the effects of xylometazoline hydrochloride combined with nasal corticosteroids in the treatment of allergic rhinitis. Methods: A total of 60 SD rats were randomly allocated into 3 groups, 20 rats in each group. Using OVA + Al(OH)3to establish rat model of allergic rhinitis. Group B was treated with momestasone furoate, group C was treated with xylometazoline hydrochloride plus momestasone furoate, group A was treated with normal saline for 1 week. The eosinophils in nasal mucosa were observed using HE staining. Using immunohistochemistry(SP method) to detect ICAM-1 and IL-12 expression levels of the three groups. Results: Compared with group A, the eosinophils in group B and C were much fewer; compared with group B, it was much fewer in group C(F=3 001.500，P<0.001). The expression level of ICAM-1 in nasal mucosa of group A was higher than those in group B and C,and that in group C was the lowest(F=4 458.820，P<0.001); the expression level of IL-12 in nasal mucosa of group A was lower than those in group B and C,and that in group C was the highest(F=6 640.770，P<0.001).Conclusion: It is much better to joint xylometazoline hydrochloride and mometasone furoate to relieve allergic rhinitis symptoms than the simple application of nasal corticosteroid.

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.03.025

R765.21