HPLC法測(cè)定腎石消膠囊中迷迭香酸的含量

平崇 郭迎霞 吳海霞

·藥物研究·

HPLC法測(cè)定腎石消膠囊中迷迭香酸的含量

平崇 郭迎霞 吳海霞

目的建立用反相高效液相色譜法測(cè)定腎石消膠囊中迷迭香酸含量的方法。方法采用SHIMADZU VP-ODS 5μm 250×4.6 mm色譜柱，以甲醇-0.1%三氟乙酸(40：60)為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm。結(jié)果迷迭香酸進(jìn)樣量在0.5015～5.0151 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998)(n=5)，平均回收率為99.6%，RSD為0.57%。結(jié)論該法結(jié)果準(zhǔn)確、方法簡(jiǎn)便、分離度高，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；腎石消膠囊；迷迭香酸

腎石消膠囊是邯鄲市中醫(yī)院的自制制劑，在臨床應(yīng)用療效顯著，由夏枯草、延胡索、金錢草等九味中藥材組成。具化石排石、利濕止痛的功效,主要用于泌尿系結(jié)石及泌尿系感染的治療。此制劑現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單，尚無(wú)定量?jī)?nèi)容，經(jīng)查閱和參考相關(guān)文獻(xiàn)[1，2]，建立了用高效液相色譜法測(cè)定其君藥夏枯草有效成分迷迭香酸的含量，該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、靈敏度高，為制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)打下了基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

島津LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津)，檢測(cè)器：UV-VIS，LCsolution色譜工作站；T1901型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用)；AUW120D電子天平(日本島津)(十萬(wàn)分之一)；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)(功率：400W、頻率：40KHZ)；迷迭香酸對(duì)照品(批號(hào)：111871-201203，含量：98.8%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；腎石消膠囊(邯鄲市中醫(yī)院提供)(生產(chǎn)批號(hào)：120101、120201、120301、120302、120303、120401)；甲醇為色譜純，水為純化水,其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS 5 μm 250×4.6 mm (日本島津)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%三氟乙酸(40：60)；流速：1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：330 nm；進(jìn)樣量：10 μl；理論塔板數(shù)按迷迭香酸峰計(jì)算不低于5 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取迷迭香酸對(duì)照品0.01269 g，置50 ml容量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，制成每毫升含0.251 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：精密稱取本品2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例依據(jù)該制劑制備工藝制備不含夏枯草的陰性對(duì)照供試品，依據(jù)供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)確證

2.3.1 線性關(guān)系考察：分別精密吸取對(duì)照品溶液2、5、10、15、20 μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以迷迭香酸進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y= 1.584×106X-1.275×10-4，r=0.9998。結(jié)果表明，迷迭香酸進(jìn)樣量在0.5015～5.0151 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μl，按上述色譜條件注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照溶液在與迷迭香酸對(duì)照品主峰的保留時(shí)間相同位置峰處無(wú)色譜峰(見(jiàn)圖1)。

圖1 腎石消膠囊液相色譜圖

2.3.3 精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液(濃度為0.251 mg/ml)10 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次,計(jì)算迷迭香酸色譜峰面積的RSD為0.23%(n=5)。結(jié)果表明精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)(120101)樣品5份，按2.2.2項(xiàng)下方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，迷迭香酸平均含量為0.236 mg/g，RSD為0.41%(n=5)。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液(批號(hào)為120101)，分別于0、2、4、8、12、24按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)得迷迭香酸峰面積RSD為0.39%，結(jié)果表明供試品溶液室溫下放置24 h穩(wěn)定。

2.3.6 回收率試驗(yàn)：取已知含量的同一批號(hào)(批號(hào)：120101，含量0.236 mg/g)樣品共6份，每份約1.0 g，精密稱定，每份樣品分別精密加入低、中、高濃度迷迭香酸對(duì)照液(分別精密量取迷迭香酸對(duì)照品溶液4、5、6 ml，分置250 ml容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，備用)50 ml，稱定重量，按2.2.2項(xiàng)下方法操作，在上述色譜條件下測(cè)定。見(jiàn)表1。

表1 迷迭香酸回收率測(cè)定結(jié)果

2.4 樣品測(cè)定 按2.2.2項(xiàng)下的方法，在上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定(n=4)，測(cè)得6批樣品含量分別為0.236 mg/g(RSD=0.33%)、0.244 mg/g(RSD=0.37%)、0.242 mg/g(RSD=0.19%)、0.245 mg/g(RSD=0.26%)、0.216 mg/g(RSD=0.49%)、0.217 mg/g(RSD=0.41%)。

3 討論

3.1 用紫外分光光度法對(duì)迷迭香酸對(duì)照品溶液在200～400 nm范圍掃描，在199 nm和331nm處有最大吸收峰，考慮到流動(dòng)相在低波處有較強(qiáng)的末端吸收，為減少干擾，提高信噪比，選擇與《中國(guó)藥典》2010年版夏枯草含量測(cè)定項(xiàng)下的330 nm處為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 本試驗(yàn)供試品溶液制備對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行了考察了，分別超聲10、15、20、25、30、35 min后進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果顯示20 min時(shí)測(cè)定成分已經(jīng)提取完全，故超聲時(shí)間定為20 min即可充分提取。

1 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部).北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.263.

2 李偉光，梁敬鈺.迷迭香酸的研究進(jìn)展.海峽藥學(xué)，2004,16:121.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.10.054

056001 河北省邯鄲第三棉紡織有限公司職工醫(yī)院藥劑科(平崇)；河北省邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心(郭迎霞、吳海霞)

R 917.4

A

1002-7386(2014)10-1558-02

2013-11-11)