滄州市中心血站使用兩種國產(chǎn)ELISA試劑對血液篩查的結(jié)果分析

薛文穎 劉寧 魏超 鞠坤

·調(diào)查研究·

滄州市中心血站使用兩種國產(chǎn)ELISA試劑對血液篩查的結(jié)果分析

薛文穎 劉寧 魏超 鞠坤

目的為了提高輸血安全轉(zhuǎn)變檢測模式，將核酸檢測技術(shù)安全有效地應(yīng)用于血液篩查中，對目前本血站使用的兩種國產(chǎn)ELISA試劑做評估。方法對兩種ELISA試劑檢測的65 463份獻(xiàn)血者標(biāo)本檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，將差異顯著的試劑檢測出的反應(yīng)性標(biāo)本做進(jìn)一步確認(rèn)試驗(yàn)，用來評估兩種試劑的優(yōu)劣。結(jié)果本血站使用的兩種國產(chǎn)ELISA試劑在HBsAg和梅毒螺旋體抗體檢測上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在抗-HCV和抗-HIV檢測上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論目前國產(chǎn)ELISAS試劑雖進(jìn)過國家“批批”檢，但各廠家試劑在篩查標(biāo)本結(jié)果一致性上存有一定差異。為了保證血液安全采用哪一種ELISA試劑是需要在工作中對進(jìn)行評估和探討。

ELISA血液；篩查

核酸檢測技術(shù)應(yīng)用于獻(xiàn)血篩查是血站檢測工作發(fā)展趨勢，也是提高血液安全的手段之一。目前我國血站大部分采用2種不同廠家ELISA試劑平行檢測來篩查無償獻(xiàn)血者血液傳染病指標(biāo)。滄州血站對獻(xiàn)血者篩查的ELISA試劑均為國產(chǎn)試劑。工作中發(fā)現(xiàn)兩種試劑檢測出的反應(yīng)性標(biāo)本有一定數(shù)目標(biāo)本的結(jié)果不相符合。為了保證血液安全，更科學(xué)合理地將核酸檢測技術(shù)用到本血站獻(xiàn)血者篩查中，我們對2012至2012年12月31日檢測的65463份標(biāo)本檢出的HBsAg 抗-HCV梅毒螺旋體抗體 抗-HIV 反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并對抗-HCV和抗-HIV反應(yīng)性標(biāo)本做了進(jìn)一步的確認(rèn)試驗(yàn)，來評估目前滄州中心血站使用的兩種國產(chǎn)ELISA試劑的情況，結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 65 463例次符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB 18467-2011)，ALT快速篩查及HBsAg試紙條快速篩查合格采集大血后留取的血樣。

1.2 試劑與主要儀器 ELISA檢測試劑HBsAg檢測試劑為上?？迫A(批號(hào)：201111011,201204025)和珠海麗珠(批號(hào)20120203,2012050508)；抗-HCV檢測試劑為上?？迫A(批號(hào)：20120203,201207031)和珠海麗珠(批號(hào)：2012010208,2012050708)；抗HIV1/2檢測試劑為上?？迫A(批號(hào)：201201011,20120602)北京萬泰(批號(hào)：H20111211,H20120704)；梅毒檢測試劑為珠海麗珠(批號(hào)：2011091208 2012030308)北京萬泰(批號(hào)：N20120101 N20120604)。ELISA檢測儀器TECAN EVO150/8全自動(dòng)加樣器，奧斯邦的FAME24/20酶免后處理。

1.3 檢驗(yàn)方法與結(jié)果判定 將標(biāo)本同時(shí)用兩個(gè)廠家的ELISA試劑嚴(yán)格按照試劑盒說明書及操作規(guī)程進(jìn)行檢測。S/CO≥1時(shí)判定為陽性，檢測結(jié)果為不合格；1>S/CO≥0.7時(shí),用同種試劑進(jìn)行雙孔復(fù)試，有一孔S/CO≥0.7時(shí)檢測結(jié)果即判定為不合格，否則結(jié)果合格；兩種試劑 S/CO<0.7時(shí)判定為合格。(本站從血液安全方面考慮設(shè)置了灰區(qū)，灰區(qū)下線為0.7×cutoff值。)

1.4 結(jié)果確認(rèn) 將所有抗-HCV檢測 S/CO≥0.7的標(biāo)本用蛋白免疫印記法(RIBA)做確認(rèn)。將所有抗-HIV檢測 S/CO≥0.7的標(biāo)本送疾控中心確認(rèn)(WB試驗(yàn))。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 A、B兩國產(chǎn)ELISA試劑篩查結(jié)果 65 463份標(biāo)本不合格1 154份，占1.76%。HBsAg,抗-HCV,梅毒螺旋體抗體(TP),抗-HIV的不合格率分別為0.68%，0.51% 0.52%，0.06%。兩廠家試劑在抗-HCV和抗-HIV檢測上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 不合格標(biāo)本確認(rèn) 確認(rèn)結(jié)果顯示68例抗HCV陽性標(biāo)本和9例抗HIV陽性標(biāo)本A,B廠家均檢出不合格。見表2。

3 討論

2012年初，我國衛(wèi)生行政主管部門出臺(tái)的《血站技術(shù)操作規(guī)程》其中對血液的檢測方法的應(yīng)用有了新的要求，允許采血機(jī)構(gòu)采用ELISA檢測和核酸檢測各一遍的檢測模式，對血液安全檢測[1]。為了提高輸血安全使用先進(jìn)的檢測方法是血站發(fā)展的方向。為此我們要對目前檢測情況下血液安全檢測的有效性進(jìn)行評估。我們對血站四項(xiàng)ELISA檢測項(xiàng)目一年的檢測結(jié)果(65463份)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)分析。滄州血站使用的A B兩國產(chǎn)試劑在HBsAg和TP檢測上結(jié)果無顯著差異，但在抗-HCV和抗-HIV檢測中存在顯著差異。這與廠家包被抗原的片段及生產(chǎn)工藝有關(guān)[2]。

表1 65 463人份血液傳染性指標(biāo)檢測不合格結(jié)果 份

表2 抗-HCV，抗HIV 不合格標(biāo)本檢測結(jié)果及確認(rèn) 例(%)

抗-HCV檢測中334例標(biāo)本不合格，經(jīng)確認(rèn)68例陽性,6例結(jié)果不確定。A，B兩廠家試劑均已檢出，未有漏檢發(fā)生?？?HCV檢測中單項(xiàng)陽性及灰區(qū)的報(bào)廢較多共262份占78.44%。260例標(biāo)本確認(rèn)為陰性占77.84%(假陽性率)。A，B兩廠家試劑假陽性率為36.75%和76.80%。同國內(nèi)主要廠家抗-HCV的假陽性率25.0%～82.1%[3]一致。B試劑的假陽性率遠(yuǎn)高于A試劑。使用假陽性較高的試劑不僅對血液資源是一種浪費(fèi)，同時(shí)也給無償獻(xiàn)血者帶來不該有的心理負(fù)擔(dān)。生產(chǎn)廠家有待進(jìn)一步提高試劑特異性降低假陽性率。目前，本站HCV假陽性較高的情況下，在未對檢測標(biāo)本進(jìn)行陽性確認(rèn)，就對獻(xiàn)血者進(jìn)行獻(xiàn)血屏蔽，本人認(rèn)為對獻(xiàn)血者是不公的，更不利于獻(xiàn)血事業(yè)的發(fā)展。

抗-HIV檢測中共檢出37份標(biāo)本不合格。經(jīng)確認(rèn)的9例不合格，7例結(jié)果不確定。A，B兩廠家試劑均檢出9例不合格標(biāo)本。A廠家試劑檢出3例不確定標(biāo)本，有4例不確定標(biāo)本未檢出；B試劑廠家檢出7例不確定標(biāo)本。A試劑廠家試劑盒包被物質(zhì)為HIV-1/HIV-2特異性抗原。屬第三代試劑。B試劑廠家試劑盒的包被物為重組HIV抗原和抗P24單抗，屬于第四代試劑。由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)看第四代試劑比第三代試劑在檢測HIVP24抗原上有一定優(yōu)勢。這與第四代HIV酶免檢測試劑雖然增加了P24抗原檢測，理論上縮短了檢測窗口期，實(shí)際意義卻不是很大[4]的說法不一致。任何單片段的抗體或抗原的感染者我們都不能排除其傳播該病毒的可能性。因此，試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，HIV第四代用于篩查獻(xiàn)血者血液比第三代更安全。

對試劑全面質(zhì)量評估，從眾多質(zhì)量參差不齊的廠家中選出高質(zhì)量試劑，提高檢出率及檢出的準(zhǔn)確性。不僅在減少血液浪費(fèi)提高輸血安全方面有必要。而且如果按新的《血站技術(shù)操作規(guī)程》血機(jī)構(gòu)采用ELISA檢測和核酸檢測各一遍的檢測模式，這項(xiàng)工作就顯得更為重要[5]。采供血機(jī)構(gòu)在開展室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評的同時(shí)還應(yīng)建立血站檢測結(jié)果上傳機(jī)制，或開展集中化檢測工作，不僅能促進(jìn)試劑質(zhì)量的提高，而且能實(shí)時(shí)全面掌控采供血機(jī)構(gòu)整體的檢測水平。

1 中華人民共和國衛(wèi)生部.全血及成分血質(zhì)量要求.GB18469-2012.

2 周靜宇.血站用部分國產(chǎn)ELISA試劑批內(nèi)和批間變異.臨床輸血與檢驗(yàn)，2011,13：53-55.

3 李金明主編.臨床酶免疫測定技術(shù).第1版.北京：人民軍醫(yī)出版社，2005.202-206.

4 莊華,張建偉,何亞琴,等.第3、4代HIV檢測試劑在血液篩查中的應(yīng)用.臨床輸血與檢驗(yàn)，2012,14：327-328.

5 曾勁峰,鄭欣,許曉絢.ELISA檢測與NAT在血液篩查應(yīng)用中的互補(bǔ)性研究.中國輸血雜志,2012,25：1012-1014.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.10.053

061000 河北省滄州市中心血站

R 446.11

A

1002-7386(2014)10-1556-02

2013-11-08)