HPLC法測定婦炎康顆粒中黃芪甲苷含量

何屹 王興海

·藥物研究·

HPLC法測定婦炎康顆粒中黃芪甲苷含量

何屹 王興海

婦炎康顆粒；黃芪甲苷；含量測定

婦炎康顆粒由黃芪、當(dāng)歸、川芎、赤芍、丹皮五味中藥組成，具有益氣活血、逐瘀散結(jié)、行氣止痛功能，臨床主要用于慢性盆腔炎氣虛血瘀證。經(jīng)多年臨床使用，療效確切。本文采用HPLC(蒸發(fā)光散射檢測器)法對主藥黃芪有效成分黃芪甲苷進(jìn)行含量測定方法[1-5]研究，以完善婦炎康顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-10AT高效液相色譜儀，SEDE×75檢測器(迪馬公司)，色譜柱Dikma ODS C18(5 μm，150×4.6mm)；XWK-3A空氣泵(天津市華生儀器分析廠)；JA2003N電子天平(上海精密科學(xué)儀器廠)；KQ-50DE型數(shù)控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0781-20008供含量測定用)；乙腈為色譜純；水為三蒸水；婦炎康顆粒(陜中附院自制制劑，批號120301,120401,120501)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備：精密稱取已干燥至恒重的黃芪甲苷對照品5.8 mg，加甲醇(色譜純)定容至10 ml，從中取2 ml溶液定容至5 ml，制成0.232 mg/ml的對照溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備：取樣品粉末研細(xì)，取約10 g，精稱，加甲醇50 ml，稱定重量，超聲(功率220 W，頻率50 kHz)30 min，放至室溫，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液25 ml，置水浴上蒸干，殘渣加水20 ml，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20 ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌兩次，每次60 ml，棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次60 ml，合并水洗后的正丁醇液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇定容至5 ml量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，備用。

2.1.3 陰性樣品干擾的考察：按婦炎康顆粒的處方制備不含黃芪的陰性制劑。取陰性樣品約10.0 g，精密稱定，按供試品制備方法制成陰性樣品溶液，照樣品測定方法測定，結(jié)果表明，陰性樣品中的其他成分對黃芪甲苷測定無干擾。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱Dikma ODS C18(5 μm，150×4.6 mm)；柱溫：室溫；流動相：乙腈∶水(32∶68)；流速：1.0 ml/min；蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度為99℃；黃芪甲苷和樣品中其他色譜峰的分離度良好；理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計算不低于10 000。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察：取0.232 mg/ml的黃芪甲苷對照溶液，分別以2、4、8、12、16、20 μl量進(jìn)樣，記錄色譜圖，計算峰面積，并以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量(C)為橫坐標(biāo)，作一直線見附圖，求得回歸方程：A=7316.3C-1231.7，R2=0.9991。結(jié)果表明，在0.464～4.640 μg內(nèi)，黃芪甲苷峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度考察：將濃度為0.232 mg/ml的黃芪甲苷對照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μl，測得峰面積的RSD為2.22%。見表1。

表1 精密度試驗考察結(jié)果

2.3.3 重復(fù)性考察：取同一批樣品6份，分別按供試品處理方法處理，按含量測定項下方法測定，計算其中芍藥苷含量。見表2。

表2 重現(xiàn)性試驗考察結(jié)果

2.3.4 穩(wěn)定性考察：取一組樣品溶液，分別在0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，測得峰面積值。見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗考察結(jié)果

2.3.5 加樣回收率考察：取已知黃芪甲苷含量(0.1180 mg/g)的同一批樣品6份，約10.0 g，精密稱定，分別加入一定量的對照品(溶液)，按照含量測定項下的方法進(jìn)行測定，記錄色譜圖，計算峰面積值，求出加樣回收率。見表4。

黃芪甲苷回收率(%)=(測得黃芪甲苷的總含量-樣品中的黃芪甲苷含量)/黃芪甲苷對照品的加入量×100%。

表4 加樣回收率試驗考察結(jié)果

2.4 樣品含量測定 分別取3批樣品，按供試品溶液制備方法處理，進(jìn)樣10 μl，記錄色譜圖，計算峰面積值，用外標(biāo)法求樣品中芍藥苷的含量。見表5。

表5 樣品含量測定試驗考察結(jié)果

由上表可見，三批中試樣品中黃芪甲苷的含量分別為0.1166 mg/g、0.1198 mg/g、0.1157 mg/g，平均含量為0.1174 mg/g。又因每袋8 g，考慮到樣品中黃芪甲苷含量隨飲片的品質(zhì)與裝量差異的影響，結(jié)合大生產(chǎn)實際情況，將樣品中黃芪甲苷的含量在平均值的基礎(chǔ)上下調(diào)20%，故暫定本品每袋含黃芪甲苷量不得少于0.75 mg。

3 討論

本文對婦炎康顆粒制劑中主藥黃芪有效成分黃芪甲苷進(jìn)行了含量測定方法考察，可作為婦炎康顆粒質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的參考。在HPLC法測定黃芪甲苷的含量時，應(yīng)用的是蒸發(fā)光散射檢測器，由于其穩(wěn)定性差于紫外檢測器，因此，在測定時應(yīng)使儀器處于較為穩(wěn)定狀態(tài)，應(yīng)盡量在較為安靜和受外界影響較小的環(huán)境中進(jìn)行。

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2 金毅群，隋軍，賈蘭秀． HPLC 蒸發(fā)光散射檢測器測得芪丹健腦顆粒的黃芪甲苷的含量． 中醫(yī)藥學(xué)報，2006，2: 22-23．

3 張錦文，寥梅，張勇慧，等． 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定參芪扶正注射液中黃芪甲苷含量． 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，3: 104-106．

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10.3969/j.issn.1002-7386.2014.09.061

712000 陜西省咸陽市，陜西中醫(yī)學(xué)院

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1002-7386(2014)09-1411-02

2013-09-23)