真菌性角膜炎臨床實(shí)驗(yàn)室快速診斷方法的探討

于瑞

【摘要】 目的 觀察熒光染色法應(yīng)用于真菌性角膜炎臨床快速診斷的效果。方法 臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本60例為研究對(duì)象， 所有標(biāo)本均應(yīng)用熒光染色法、真菌培養(yǎng)和墨汁-KOH濕片鏡檢三種方法檢測(cè)， 比較不同方法的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 在45例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中， 墨汁-KOH濕片鏡檢有28例陽性， 陽性率為62.22%（28/45）， 熒光染色法陽性40例， 陽性率為88.89%（40/45）， 兩種方法陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 熒光染色法具有快速、操作簡(jiǎn)便、陽性符合率高等特點(diǎn)， 是真菌性角膜炎一種有效的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。

【關(guān)鍵詞】 角膜炎；真菌培養(yǎng)；熒光染色法；墨汁-KOH濕片法

真菌性角膜炎是由真菌感染引起具有很高致盲率的感染性角膜病變， 近年來， 其發(fā)病率呈不斷升高趨勢(shì)。目前角膜刮片鏡檢和真菌培養(yǎng)是臨床常用的檢測(cè)方法， 但角膜刮片鏡檢靈敏度和特異性均較低， 真菌培養(yǎng)是臨床診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”， 但耗時(shí)較長(zhǎng)， 不利于患者的早期診斷， 患者常因確診延誤影響臨床治療[1]。因此選擇快速、簡(jiǎn)便、有效的診斷方法以確定病因?qū)χ笇?dǎo)臨床治療具有重要的意義。自2010年5月以來， 本院對(duì)送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本分別采用熒光染色法、真菌培養(yǎng)和墨汁-KOH濕片鏡檢三種方法檢測(cè)， 并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較和分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2010年5月～2013年9月本院臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本60例為研究對(duì)象， 其中男31例， 女29例， 年齡23～56歲。

1. 2 檢測(cè)方法 患者眼部采用愛爾卡因表面麻醉， 無菌棉拭棒擦去表面壞死組織， 用無菌手術(shù)刀片刮取角膜潰瘍周邊和基底部， 取樣標(biāo)本送本院實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。墨汁-KOH濕片法：挑取送檢的角膜潰瘍組織于載玻片上涂片， 滴加10%KOH和墨汁混合液（按9：1比例混合）1滴， 蓋上蓋玻片后鏡檢；熒光染色法：取角膜潰瘍組織于載玻片上， 滴加熒光染色液1滴， 蓋上蓋玻片后鏡檢；真菌培養(yǎng)：將角膜潰瘍組織接種于沙氏培養(yǎng)基中， 25℃培養(yǎng)2周， 觀察培養(yǎng)結(jié)果、鑒定菌種并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理， 計(jì)數(shù)資料用率（%）表示， 陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn)， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

60例臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本中， 真菌培養(yǎng)陽性45例， 陽性率為75.00%。以真菌培養(yǎng)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)， 45例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中墨汁-KOH濕片法28例陽性， 陽性率為62.22%， 熒光染色法40例陽性， 陽性率為88.89%， 墨汁-KOH濕片法和熒光染色法檢測(cè)結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 詳見表1。

表1 兩種染色方法鏡檢結(jié)果比較（n， %）

方法 例數(shù) 陽性 陰性 陽性率

墨汁-KOH濕片法 45 28 17 62.22

熒光染色法 45 40 5 88.89

注：兩組比較， P<0.05

3 討論

真菌性角膜炎是由曲霉菌、鐮刀菌等致病性真菌引起的感染性眼部疾病， 患者常伴有視力減退、角膜潰瘍等癥狀。近年來， 由于糖皮質(zhì)激素、廣譜抗菌藥物、免疫抑制劑的濫用及角膜接觸鏡的使用不當(dāng)?shù)龋?導(dǎo)致角膜真菌感染的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。真菌性角膜炎發(fā)病具有進(jìn)展快、癥狀隱匿、不易診斷等特點(diǎn)， 常造成臨床的漏診和誤診， 加之一些抗真菌藥物對(duì)眼部疾病的療效有限， 如治療不及時(shí)， 可導(dǎo)致角膜混濁、潰瘍甚至穿孔， 嚴(yán)重影響患者的工作和生活質(zhì)量[2]。因此早期診斷和治療是患者獲得良好療效的關(guān)鍵。

真菌培養(yǎng)和KOH濕片法是真菌傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢查方法， 但真菌培養(yǎng)過程復(fù)雜， 培養(yǎng)時(shí)間需1～2周， 檢測(cè)結(jié)果往往具有一定的滯后性， 不能做到快速診斷， 因而影響患者的臨床治療[3]。本文作者采用的墨汁-KOH濕片法， 雖然具有診斷快、操作簡(jiǎn)便及鏡下對(duì)比度強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)， 但其檢測(cè)結(jié)果符合率偏低， 存在一定的假陽性結(jié)果， 易造成臨床的誤診和漏診而直接影響患者的治療。本文結(jié)果顯示， 在60例臨床送檢的疑似標(biāo)本中， 經(jīng)真菌培養(yǎng)后有45例陽性， 表明臨床僅從外傷史和臨床癥狀判斷患者真菌感染有一定的誤診率， 此外， 部分病例在進(jìn)行真菌培養(yǎng)前已經(jīng)應(yīng)用抗真菌藥物治療也是導(dǎo)致患者真菌培養(yǎng)結(jié)果陰性的原因。在45例真菌培養(yǎng)陽性的標(biāo)本中， 墨汁-KOH濕片法檢測(cè)28例為陽性， 陽性率為62.22%， 熒光染色法40例為陽性， 陽性率為88.89%， 兩種檢測(cè)方法陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 表明熒光染色法的檢測(cè)結(jié)果符合率明顯優(yōu)于墨汁-KOH濕片法， 并且在臨床常用的真菌檢測(cè)方法中熒光染色法的費(fèi)用相對(duì)較低， 可以做到對(duì)眼部真菌病變的早期、快速診斷。

綜上所述， 作者認(rèn)為熒光染色法具有操作簡(jiǎn)便、快速及陽性符合率較高等優(yōu)勢(shì)， 可作為眼部真菌感染臨床實(shí)驗(yàn)室早期診斷的首選方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 魏文利，張蕊石，周向京.聯(lián)合試驗(yàn)在真菌性角膜炎診斷中的應(yīng)用.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2011，27（1）：113-114.

[2] 穆紅梅，皮百木，李家臣，等.真菌性角膜炎的流行病學(xué)、臨床和微生物特征分析.眼科新進(jìn)展， 2013，33（9）：879-880.

[3] 王連喜，劉宏巨.真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)方法.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2012，9（5）：638-639.

[收稿日期：2014-04-21]endprint

【摘要】 目的 觀察熒光染色法應(yīng)用于真菌性角膜炎臨床快速診斷的效果。方法 臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本60例為研究對(duì)象， 所有標(biāo)本均應(yīng)用熒光染色法、真菌培養(yǎng)和墨汁-KOH濕片鏡檢三種方法檢測(cè)， 比較不同方法的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 在45例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中， 墨汁-KOH濕片鏡檢有28例陽性， 陽性率為62.22%（28/45）， 熒光染色法陽性40例， 陽性率為88.89%（40/45）， 兩種方法陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 熒光染色法具有快速、操作簡(jiǎn)便、陽性符合率高等特點(diǎn)， 是真菌性角膜炎一種有效的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。

【關(guān)鍵詞】 角膜炎；真菌培養(yǎng)；熒光染色法；墨汁-KOH濕片法

真菌性角膜炎是由真菌感染引起具有很高致盲率的感染性角膜病變， 近年來， 其發(fā)病率呈不斷升高趨勢(shì)。目前角膜刮片鏡檢和真菌培養(yǎng)是臨床常用的檢測(cè)方法， 但角膜刮片鏡檢靈敏度和特異性均較低， 真菌培養(yǎng)是臨床診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”， 但耗時(shí)較長(zhǎng)， 不利于患者的早期診斷， 患者常因確診延誤影響臨床治療[1]。因此選擇快速、簡(jiǎn)便、有效的診斷方法以確定病因?qū)χ笇?dǎo)臨床治療具有重要的意義。自2010年5月以來， 本院對(duì)送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本分別采用熒光染色法、真菌培養(yǎng)和墨汁-KOH濕片鏡檢三種方法檢測(cè)， 并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較和分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2010年5月～2013年9月本院臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本60例為研究對(duì)象， 其中男31例， 女29例， 年齡23～56歲。

1. 2 檢測(cè)方法 患者眼部采用愛爾卡因表面麻醉， 無菌棉拭棒擦去表面壞死組織， 用無菌手術(shù)刀片刮取角膜潰瘍周邊和基底部， 取樣標(biāo)本送本院實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。墨汁-KOH濕片法：挑取送檢的角膜潰瘍組織于載玻片上涂片， 滴加10%KOH和墨汁混合液（按9：1比例混合）1滴， 蓋上蓋玻片后鏡檢；熒光染色法：取角膜潰瘍組織于載玻片上， 滴加熒光染色液1滴， 蓋上蓋玻片后鏡檢；真菌培養(yǎng)：將角膜潰瘍組織接種于沙氏培養(yǎng)基中， 25℃培養(yǎng)2周， 觀察培養(yǎng)結(jié)果、鑒定菌種并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理， 計(jì)數(shù)資料用率（%）表示， 陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn)， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

60例臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本中， 真菌培養(yǎng)陽性45例， 陽性率為75.00%。以真菌培養(yǎng)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)， 45例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中墨汁-KOH濕片法28例陽性， 陽性率為62.22%， 熒光染色法40例陽性， 陽性率為88.89%， 墨汁-KOH濕片法和熒光染色法檢測(cè)結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 詳見表1。

表1 兩種染色方法鏡檢結(jié)果比較（n， %）

方法 例數(shù) 陽性 陰性 陽性率

墨汁-KOH濕片法 45 28 17 62.22

熒光染色法 45 40 5 88.89

注：兩組比較， P<0.05

3 討論

真菌性角膜炎是由曲霉菌、鐮刀菌等致病性真菌引起的感染性眼部疾病， 患者常伴有視力減退、角膜潰瘍等癥狀。近年來， 由于糖皮質(zhì)激素、廣譜抗菌藥物、免疫抑制劑的濫用及角膜接觸鏡的使用不當(dāng)?shù)龋?導(dǎo)致角膜真菌感染的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。真菌性角膜炎發(fā)病具有進(jìn)展快、癥狀隱匿、不易診斷等特點(diǎn)， 常造成臨床的漏診和誤診， 加之一些抗真菌藥物對(duì)眼部疾病的療效有限， 如治療不及時(shí)， 可導(dǎo)致角膜混濁、潰瘍甚至穿孔， 嚴(yán)重影響患者的工作和生活質(zhì)量[2]。因此早期診斷和治療是患者獲得良好療效的關(guān)鍵。

真菌培養(yǎng)和KOH濕片法是真菌傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢查方法， 但真菌培養(yǎng)過程復(fù)雜， 培養(yǎng)時(shí)間需1～2周， 檢測(cè)結(jié)果往往具有一定的滯后性， 不能做到快速診斷， 因而影響患者的臨床治療[3]。本文作者采用的墨汁-KOH濕片法， 雖然具有診斷快、操作簡(jiǎn)便及鏡下對(duì)比度強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)， 但其檢測(cè)結(jié)果符合率偏低， 存在一定的假陽性結(jié)果， 易造成臨床的誤診和漏診而直接影響患者的治療。本文結(jié)果顯示， 在60例臨床送檢的疑似標(biāo)本中， 經(jīng)真菌培養(yǎng)后有45例陽性， 表明臨床僅從外傷史和臨床癥狀判斷患者真菌感染有一定的誤診率， 此外， 部分病例在進(jìn)行真菌培養(yǎng)前已經(jīng)應(yīng)用抗真菌藥物治療也是導(dǎo)致患者真菌培養(yǎng)結(jié)果陰性的原因。在45例真菌培養(yǎng)陽性的標(biāo)本中， 墨汁-KOH濕片法檢測(cè)28例為陽性， 陽性率為62.22%， 熒光染色法40例為陽性， 陽性率為88.89%， 兩種檢測(cè)方法陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 表明熒光染色法的檢測(cè)結(jié)果符合率明顯優(yōu)于墨汁-KOH濕片法， 并且在臨床常用的真菌檢測(cè)方法中熒光染色法的費(fèi)用相對(duì)較低， 可以做到對(duì)眼部真菌病變的早期、快速診斷。

綜上所述， 作者認(rèn)為熒光染色法具有操作簡(jiǎn)便、快速及陽性符合率較高等優(yōu)勢(shì)， 可作為眼部真菌感染臨床實(shí)驗(yàn)室早期診斷的首選方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 魏文利，張蕊石，周向京.聯(lián)合試驗(yàn)在真菌性角膜炎診斷中的應(yīng)用.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2011，27（1）：113-114.

[2] 穆紅梅，皮百木，李家臣，等.真菌性角膜炎的流行病學(xué)、臨床和微生物特征分析.眼科新進(jìn)展， 2013，33（9）：879-880.

[3] 王連喜，劉宏巨.真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)方法.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2012，9（5）：638-639.

[收稿日期：2014-04-21]endprint

【摘要】 目的 觀察熒光染色法應(yīng)用于真菌性角膜炎臨床快速診斷的效果。方法 臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本60例為研究對(duì)象， 所有標(biāo)本均應(yīng)用熒光染色法、真菌培養(yǎng)和墨汁-KOH濕片鏡檢三種方法檢測(cè)， 比較不同方法的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 在45例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中， 墨汁-KOH濕片鏡檢有28例陽性， 陽性率為62.22%（28/45）， 熒光染色法陽性40例， 陽性率為88.89%（40/45）， 兩種方法陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 熒光染色法具有快速、操作簡(jiǎn)便、陽性符合率高等特點(diǎn)， 是真菌性角膜炎一種有效的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。

【關(guān)鍵詞】 角膜炎；真菌培養(yǎng)；熒光染色法；墨汁-KOH濕片法

真菌性角膜炎是由真菌感染引起具有很高致盲率的感染性角膜病變， 近年來， 其發(fā)病率呈不斷升高趨勢(shì)。目前角膜刮片鏡檢和真菌培養(yǎng)是臨床常用的檢測(cè)方法， 但角膜刮片鏡檢靈敏度和特異性均較低， 真菌培養(yǎng)是臨床診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”， 但耗時(shí)較長(zhǎng)， 不利于患者的早期診斷， 患者常因確診延誤影響臨床治療[1]。因此選擇快速、簡(jiǎn)便、有效的診斷方法以確定病因?qū)χ笇?dǎo)臨床治療具有重要的意義。自2010年5月以來， 本院對(duì)送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本分別采用熒光染色法、真菌培養(yǎng)和墨汁-KOH濕片鏡檢三種方法檢測(cè)， 并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較和分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2010年5月～2013年9月本院臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本60例為研究對(duì)象， 其中男31例， 女29例， 年齡23～56歲。

1. 2 檢測(cè)方法 患者眼部采用愛爾卡因表面麻醉， 無菌棉拭棒擦去表面壞死組織， 用無菌手術(shù)刀片刮取角膜潰瘍周邊和基底部， 取樣標(biāo)本送本院實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。墨汁-KOH濕片法：挑取送檢的角膜潰瘍組織于載玻片上涂片， 滴加10%KOH和墨汁混合液（按9：1比例混合）1滴， 蓋上蓋玻片后鏡檢；熒光染色法：取角膜潰瘍組織于載玻片上， 滴加熒光染色液1滴， 蓋上蓋玻片后鏡檢；真菌培養(yǎng)：將角膜潰瘍組織接種于沙氏培養(yǎng)基中， 25℃培養(yǎng)2周， 觀察培養(yǎng)結(jié)果、鑒定菌種并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理， 計(jì)數(shù)資料用率（%）表示， 陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn)， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

60例臨床送檢疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片標(biāo)本中， 真菌培養(yǎng)陽性45例， 陽性率為75.00%。以真菌培養(yǎng)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)， 45例真菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本中墨汁-KOH濕片法28例陽性， 陽性率為62.22%， 熒光染色法40例陽性， 陽性率為88.89%， 墨汁-KOH濕片法和熒光染色法檢測(cè)結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 詳見表1。

表1 兩種染色方法鏡檢結(jié)果比較（n， %）

方法 例數(shù) 陽性 陰性 陽性率

墨汁-KOH濕片法 45 28 17 62.22

熒光染色法 45 40 5 88.89

注：兩組比較， P<0.05

3 討論

真菌性角膜炎是由曲霉菌、鐮刀菌等致病性真菌引起的感染性眼部疾病， 患者常伴有視力減退、角膜潰瘍等癥狀。近年來， 由于糖皮質(zhì)激素、廣譜抗菌藥物、免疫抑制劑的濫用及角膜接觸鏡的使用不當(dāng)?shù)龋?導(dǎo)致角膜真菌感染的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。真菌性角膜炎發(fā)病具有進(jìn)展快、癥狀隱匿、不易診斷等特點(diǎn)， 常造成臨床的漏診和誤診， 加之一些抗真菌藥物對(duì)眼部疾病的療效有限， 如治療不及時(shí)， 可導(dǎo)致角膜混濁、潰瘍甚至穿孔， 嚴(yán)重影響患者的工作和生活質(zhì)量[2]。因此早期診斷和治療是患者獲得良好療效的關(guān)鍵。

真菌培養(yǎng)和KOH濕片法是真菌傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢查方法， 但真菌培養(yǎng)過程復(fù)雜， 培養(yǎng)時(shí)間需1～2周， 檢測(cè)結(jié)果往往具有一定的滯后性， 不能做到快速診斷， 因而影響患者的臨床治療[3]。本文作者采用的墨汁-KOH濕片法， 雖然具有診斷快、操作簡(jiǎn)便及鏡下對(duì)比度強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)， 但其檢測(cè)結(jié)果符合率偏低， 存在一定的假陽性結(jié)果， 易造成臨床的誤診和漏診而直接影響患者的治療。本文結(jié)果顯示， 在60例臨床送檢的疑似標(biāo)本中， 經(jīng)真菌培養(yǎng)后有45例陽性， 表明臨床僅從外傷史和臨床癥狀判斷患者真菌感染有一定的誤診率， 此外， 部分病例在進(jìn)行真菌培養(yǎng)前已經(jīng)應(yīng)用抗真菌藥物治療也是導(dǎo)致患者真菌培養(yǎng)結(jié)果陰性的原因。在45例真菌培養(yǎng)陽性的標(biāo)本中， 墨汁-KOH濕片法檢測(cè)28例為陽性， 陽性率為62.22%， 熒光染色法40例為陽性， 陽性率為88.89%， 兩種檢測(cè)方法陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 表明熒光染色法的檢測(cè)結(jié)果符合率明顯優(yōu)于墨汁-KOH濕片法， 并且在臨床常用的真菌檢測(cè)方法中熒光染色法的費(fèi)用相對(duì)較低， 可以做到對(duì)眼部真菌病變的早期、快速診斷。

綜上所述， 作者認(rèn)為熒光染色法具有操作簡(jiǎn)便、快速及陽性符合率較高等優(yōu)勢(shì)， 可作為眼部真菌感染臨床實(shí)驗(yàn)室早期診斷的首選方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 魏文利，張蕊石，周向京.聯(lián)合試驗(yàn)在真菌性角膜炎診斷中的應(yīng)用.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2011，27（1）：113-114.

[2] 穆紅梅，皮百木，李家臣，等.真菌性角膜炎的流行病學(xué)、臨床和微生物特征分析.眼科新進(jìn)展， 2013，33（9）：879-880.

[3] 王連喜，劉宏巨.真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)方法.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2012，9（5）：638-639.

[收稿日期：2014-04-21]endprint