四乙?；埬懣嘬绽砘再|(zhì)研究*

★ 曾文雪 宋曉玲 江澤慧 熊耀坤 王躍生

(1. 江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330006；2. 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院 江西 南昌 330006；3. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥所 北京 100700)

藥物的理化性質(zhì)是藥物分子結(jié)構(gòu)的綜合體現(xiàn)，它不僅是藥物呈現(xiàn)生物活性的一個(gè)重要因素，而且它密切關(guān)系著藥物的穩(wěn)定性、毒副作用、劑型及臨床使用等[1]。四乙酰化龍膽苦苷為龍膽苦苷四乙?；a(chǎn)物，與龍膽苦苷具有相似的藥理活性，可發(fā)揮保肝利膽的作用。故本文通過(guò)前期研究制備的四乙?；埬懣嘬?，對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行研究，包括熔點(diǎn)、表觀溶解度、表觀油水分配系數(shù)、穩(wěn)定性等，為后續(xù)的開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

SCL-10AVP shimadzu高效液相色譜儀(SPD-M10AVP 紫外檢測(cè)器、SIL-10ADVP自動(dòng)進(jìn)樣器)；齊勒管熔點(diǎn)測(cè)定儀；SHZ-82氣浴恒溫振蕩器(常州國(guó)華電器有限公司)； LS-2000A低溫恒溫光照儀(上海黃海藥檢所)；LRH-250-S恒溫恒濕培養(yǎng)箱(廣東醫(yī)療器械廠)；101-3-BS-Ⅱ電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)；AR-5120電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；四乙酰化龍膽苦苷(自制，純度大于98%)；乙腈、甲醇為色譜純；其余試劑為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 熔點(diǎn)測(cè)定 取干燥至恒重的四乙?；埬懣嘬?，用熔點(diǎn)毛細(xì)管制樣，于熔點(diǎn)儀上檢測(cè)，平行3份，以平均值作為檢測(cè)值，結(jié)果為137.9℃。龍膽苦苷的熔點(diǎn)為191℃，說(shuō)明龍膽苦苷結(jié)構(gòu)中引入乙?；?，熔點(diǎn)降低。

2.2 表觀溶解度測(cè)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 色譜條件：以Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)為固定相；以乙腈-水(55∶45)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm；流速為1.0 mL/min。

對(duì)照品溶液的配制：取四乙酰化龍膽苦苷(純度>98%)適量，精密稱定，加乙腈溶解，配成濃度為0.531 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，用乙腈稀釋至10 mL，得龍膽苦苷乙?；a(chǎn)物的濃度為0.0531 mg/mL。

線性考察：自動(dòng)進(jìn)樣器吸取2，5，8，10，15，20，30 μL對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。以質(zhì)量(Y)和峰面積(X)做線性回歸，得到回歸方程為Y=1×10-6X-0.0143 (r=0.9999)，結(jié)果表明，四乙酰化龍膽苦苷質(zhì)量在0.1062×10-3～1.593×10-3mg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.2.2 不同溶劑中的表觀溶解度測(cè)定 在10 mL具塞磨口試管中，分別加入4 mL以下溶劑：甲醇、乙醇、乙腈、水。取四乙?；埬懣嘬占尤胍陨先軇┲校敝凉鼙趻煊胁蝗芙馕餅橹?。將所有試管蓋上塞子密閉，置于振蕩器中振蕩，溫度(25±1)℃，于24，48，72 h取樣，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，液相檢測(cè)，計(jì)算四乙酰化龍膽苦苷在不同溶劑中的溶解度。結(jié)果見(jiàn)表1。四乙?；埬懣嘬赵谒械谋碛^溶解度為0.11mg/mL，說(shuō)明四乙酰化龍膽苦苷極微溶于水，且在溶解較慢。在有機(jī)溶劑中四乙?；埬懣嘬盏谋碛^溶解度隨著溶劑非極性的增加顯著增加，在氯仿中的表觀溶解度比在水中大了10 000多倍。

表1 四乙?；埬懣嘬赵诓煌軇┲械谋碛^溶解度(mg/mL，±s，n=3)

2.3 表觀油/水分配系數(shù)測(cè)定 準(zhǔn)確量取70 mL水飽和的正辛醇，加入一定量的四乙?；埬懣嘬?，超聲溶解，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)HPLC檢測(cè)，測(cè)得濃度作為總濃度(C總)。精密吸取5 mL經(jīng)過(guò)濾的水飽和正辛醇含藥溶液至3個(gè)玻璃管中，都加入正辛醇飽和的水溶液5 mL。置于振蕩器中振蕩，溫度(37±1)℃，72 h后，分別吸取醇層及水層，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣檢測(cè)。正辛醇層、水層中含量分別為1.95±0.04，0.078±0.003mg/mL，lgP為1.40。

2.4 穩(wěn)定性考察

2.4.1 高溫試驗(yàn) 將一定量白色粉末狀供試品置于培養(yǎng)皿中，攤成≤5mm厚的薄層，60℃溫度下放置10天，于第5天和第10天取樣，觀察外觀，檢測(cè)含量[2]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，四乙酰化龍膽苦苷在高溫條件下放置10天，外觀由白色粉末變成淡黃色團(tuán)狀，含量具有顯著變化，結(jié)果表明四乙酰化龍膽苦苷對(duì)溫度敏感。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 高溫試驗(yàn)結(jié)果±s，n=3)

2.4.2 高濕度試驗(yàn) 將一定量白色粉末狀供試品置于培養(yǎng)皿中，攤成≤5mm厚的薄層，置于恒濕干燥器中，干燥器下部放置KNO3飽和溶液形成相對(duì)濕度92.5%的恒濕條件。供試品在高濕度條件下放置10天，于第5天和第10天取樣，觀察外觀，稱量吸濕增重及檢測(cè)含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，四乙?；埬懣嘬赵诟邼駰l件下放置10天，外觀未見(jiàn)明顯改變，含量無(wú)顯著變化，且第5天、第10天吸濕率均小于0.1%，結(jié)果表明四乙?；埬懣嘬諏?duì)濕度不敏感。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 高濕度試驗(yàn)結(jié)果±s，n=3)

2.4.3 強(qiáng)光照射試驗(yàn) 將一定量供試品置于培養(yǎng)皿中，攤成≤5mm厚的薄層，置于裝有日光燈的光照箱內(nèi)，于照度為4500±500lx的條件下放置10天，于第5天和第10天取樣，觀察外觀，檢測(cè)含量。結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，四乙酰化龍膽苦苷在高溫條件下放置10天，外觀未見(jiàn)明顯改變，含量有一定下降，表明四乙?；埬懣嘬諏?duì)強(qiáng)光敏感。

表4 強(qiáng)光照射試驗(yàn)結(jié)果±s，n=3)

2.4.4 不同pH條件下的穩(wěn)定性 精密稱取5 mg四乙酰龍膽苦苷于10 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得四乙酰龍膽苦苷儲(chǔ)備液。取儲(chǔ)備液1 mL于10 mL容量瓶中，加入37℃恒溫水浴中預(yù)熱的pH 2.0、5.0、6.8、7.8～8.0磷酸鹽緩沖液及pH 1.2鹽酸溶液至刻度，搖勻，至37℃恒溫水浴，于0,1,2,4,6,8,12,24 h取樣0.5 mL，冰浴終止反應(yīng)，放至室溫后，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)行HPLC測(cè)定。結(jié)果表明，四乙?；埬懣嘬赵谒嵝詶l件下易降解，在pH1.2和pH2.0磷酸鹽緩沖液中12 h內(nèi)降解均大于50%，隨著pH值增加，四乙?；埬懣嘬战到鉁p少。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 在不同pH溶劑中的含量變化

3 討論

3.1 四乙酰化龍膽苦苷在水中的表觀溶解度僅為0.11mg/mL，說(shuō)明四乙酰化龍膽苦苷微溶于水，而且在水中溶解較慢，48h達(dá)到溶解平衡。龍膽苦苷在水中的表觀溶解度為76.5mg/mL[3]，龍膽苦苷結(jié)構(gòu)中引入四個(gè)乙?；螅苄源蟠蠼档?。四乙酰化龍膽苦苷在乙醇中溶解較慢，達(dá)到平衡溶解時(shí)間較長(zhǎng)，在甲醇中溶解較快，但溶解度比乙醇中小。易溶于乙腈和氯仿中。

3.2 本文采用操作簡(jiǎn)單的搖瓶法測(cè)定四乙酰化龍膽苦苷的油/水分配系數(shù)，試驗(yàn)選用正辛醇為模擬生物膜相的有機(jī)溶劑，主要是因?yàn)檎链紭O性與多數(shù)有機(jī)體液的極性相差不大，其溶解度參數(shù)與生物膜的溶解度參數(shù) 21.07 MPa1/2一致[4]。過(guò)低的P值(logP<-2)，化合物不能穿過(guò)脂質(zhì)膜；相反，過(guò)高的P值(logP>3，化合物因?yàn)橹苄詮?qiáng)很難從細(xì)胞另一側(cè)的膜釋放出來(lái)，故藥物的最佳P值在-1

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