舒脈寧注射液中人參皂苷Rg1和Re的含量測定

郝少君 李文俊 張正臣

·藥學(xué)研究·

舒脈寧注射液中人參皂苷Rg1和Re的含量測定

郝少君 李文俊 張正臣

目的用高效液相色譜(HPLC)法測定舒脈寧注射液中人參皂苷Rg1、Re的含量。方法色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相為乙腈-0.05%磷酸。結(jié)果人參皂苷Rg1在0.05～0.45 mg/ml時呈良好的線性關(guān)系；人參皂苷Rg1的平均回收率為99.84% (RSD=1.35%)。人參皂苷Re在0.04～0.36 mg/ml時呈良好的線性關(guān)系；人參皂苷Re的平均回收率為100.36% (RSD=1.01%)。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、分離效果良好，專屬性強(qiáng)，可用于舒脈寧注射液的質(zhì)量評價。

舒脈寧注射液；人參皂苷Rg1；人參皂苷Re；高效液相色譜法

舒脈寧注射液是以人參、莪術(shù)、當(dāng)歸、川芎4味藥材制成的中藥注射液，具有補(bǔ)氣行血，活血化瘀、通脈搜絡(luò)的功效。方中人參為君藥，本實(shí)驗(yàn)以高效液相色譜法對舒脈寧注射液中人參皂苷Rg1、Re進(jìn)行含量測定研究。

1 儀器與試藥

島津-高效液相色譜儀，島津LC-10ATVP泵，SPD-10A VP紫外檢測器，77251自動進(jìn)樣器，N2000雙通道色譜工作站；AS3120A超聲波清洗器；AL104電子分析天平(瑞士梅特勒公司)。人參皂苷Rg1對照品 (含量測定用，批號110703-200221)和人參皂苷Re對照品(含量測定用，批號110754-200218)由中國藥品生物制品檢定所提供；舒脈寧注射液由解放軍第371醫(yī)院制劑室提供。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；C18(5 μm，150 mm×4.6 mm)；流動相為乙腈-0.05%磷酸(20∶80)；流速：1.0 ml/min；檢測波長203 nm；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備：分別精密稱取人參皂苷Rg1、Re對照品適量，加甲醇制成每毫升含人參皂苷Rg1 0.5 mg、Re0.4 mg的混合對照品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備：精密量取本品10 ml，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次，10 ml/次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，10 ml/次，棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，10 ml/次 ，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備：按處方量稱取不含人參的其他藥味，按制劑工藝制成制劑后，以供試品溶液的制備方法，制成陰性溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在上述色譜條件下，分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，各進(jìn)樣10 μl，記錄色譜圖，結(jié)果：理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算：n=6 525(≥3 000)；主峰與雜質(zhì)峰的分離度>1.5；陰性溶液在人參皂苷Rg1、Re出峰處不干擾。符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。見圖1。

人參皂苷Rg1、Re混合對照品(A)，舒脈寧注射液樣品(B)，缺人參的陰性樣品(C)

(1)人參皂苷Rg1；(2)人參皂苷Re

圖1 舒脈寧注射液HPLC圖

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密量取對照品溶液1、3、5、7、9 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成不同濃度的對照品溶液，精密量取各10 μl，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積(X)對進(jìn)樣濃度(C，μg/ml)進(jìn)行線性回歸，得人參皂苷Rg1回歸方程為y=3E+06x-16 190，r=0.9995；人參皂苷Re回歸方程為y=4E+06x+984.4，r=0.9996。結(jié)果表明：人參皂苷Rg1在0.05～0.45 mg/ml范圍內(nèi)線性良好；人參皂苷Re在0.04～0.36 mg/ml范圍內(nèi)線性良好。見表1。

2.5 精密度試驗(yàn) 取線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下的3號人參皂苷Rg1、Re混合對照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果人參皂苷Rg1峰面積的RSD=0.33%(n=5)，人參皂苷Re峰面積的RSD=0.27%(n=5)。表明本法的精密度良好。

表1 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別在0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，測得人參皂苷Rg1峰面積的RSD=0.95%(n=5)，人參皂苷Re峰面積的RSD=0.90% (n=5)，結(jié)果表明在測定條件下，供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按上述“供試品溶液的制備”方法，對同一批樣品分別制備5份供試品溶液，按上述色譜條件，各吸取10 μl進(jìn)樣測定，結(jié)果人參皂苷Rg1平均含量為0.14 mg/ml，RSD為1.18%；人參皂苷Re平均含量為0.10 mg/ml，RSD為1.0%。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品5 ml，5份分別精密加入人參皂苷Rg1、Re混合對照品溶液(人參皂苷Rg1 0.5 mg/ml、Re 0.4 mg/ml)1.3 ml；按上述“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，按上述色譜條件，各吸取10 μl進(jìn)樣測定，計算回收率。見表2、3。

表2 人參皂苷Rg1回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 人參皂苷Re回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測定 取不同批號的樣品，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，按外標(biāo)法，用峰面積計算樣品含量。見表4。

3 討論

[1-3]，用乙腈-0.05%磷酸溶液系統(tǒng)，使用(20∶80)、(25∶75)、(30∶70)配比，經(jīng)試驗(yàn)(20∶80)配比色譜圖良好，最后選定乙睛-0.05%磷酸溶液(20∶80)為最佳條件。

表4 舒脈寧注射液中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的含量測定結(jié)果 mg/ml

正丁醇提取次數(shù)的考察 精密量取本品10 ml兩份，1份用水飽和的正丁醇提取3次，10 ml/次，1份用水飽和的正丁醇提取4次，10 ml/次，正丁醇提取液分別放置，各用用氨試液洗滌2次，10 ml/次，棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，10 ml/次 ，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得兩份供試品溶液。照前法測定，2份供試品溶液色譜圖中，人參皂苷Rg1峰峰面積差異不大，液相色譜法峰面積誤差一般控制在為2%。說明提取次數(shù)3次即可保證提取完全。

舒脈寧注射液由人參、莪術(shù)、川芎、當(dāng)歸組成，臨床觀察治療氣虛血瘀型缺血性中風(fēng)具有很好的療效[4]。其中人參補(bǔ)正固本、大補(bǔ)元?dú)?、開心益智、保中守神為益氣之主藥。研究表明，人參主要成分為人參皂苷，主要藥理作用為改善微循環(huán)，提高組織抗缺氧能力，抑制血小板聚集，有 Ca2+拮抗作用，影響前列腺素代謝[5]。

原質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)采用的是HPLC法測定當(dāng)歸、川芎中的阿魏酸的含量，考慮人參為該方中君藥，人參皂苷Rg1、Re為主要有效成分，對其定量測定方法進(jìn)行試驗(yàn)[6，7]。結(jié)果該方法簡便、準(zhǔn)確、分離效果良好，專屬性強(qiáng)，可用于舒脈寧注射液的質(zhì)量評價。

參考文獻(xiàn)

1 國家藥典委員會.中國藥典2010版(一部).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

2 陳舒茵，申洪超，黎瑞汝，等.高效液相色譜法測定律復(fù)康膠囊中人參皂苷Re和Rg1的含量.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010,4：1-2.

3 付桂香，趙世萍，范保全，等.高效液相色譜法測定人參五味子糖漿中人參皂苷Rg1和Re的含量.藥物分析雜志，2004,24：206-208.

4 郭鑌榮,郝少君,王同聚,等.舒脈寧注射液治療氣虛血瘀型缺血性中風(fēng)的臨床觀察.實(shí)用醫(yī)藥雜志,2010,27:132-133.

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6 楊素芹，劉文惠，張繼敏，等.高效液相色譜-紫外檢測法測定腎康超微膠囊中黃芪甲苷的含量.河北醫(yī)藥，2011，33：3645-3646.

7 田永利，許志宇，葛林，等.總黃酮類化合物含量測定方法和藥理作用研究進(jìn)展.河北醫(yī)藥，2010，32：2094-2096.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.08.052

453000 河南省新鄉(xiāng)市，中國人民解放軍第371中心醫(yī)院

張正臣，453000 中國人民解放軍第371中心醫(yī)院；

E-mail：xxzzc2010@126.com

R 965.2

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1002-7386(2014)08-1236-02

2013-10-21)