HPLC法測定柏艾膠囊中槲皮素的含量

陳月霞 王俊 洪麗萍 蔡亞蘭 曹冬梅 朱佳麗

柏艾膠囊是一種純中藥制劑, 由側柏葉、荷葉、艾葉等多味中藥組成。能夠滋陰涼血、泄火平肝。柏艾膠囊中主藥為側柏葉,其中側柏葉中含有的槲皮苷, 具有涼血止血, 泄火平肝的作用, 同為側柏葉中有效成分的槲皮素同樣具有此功效。但本公司柏艾膠囊的質量標準中只對槲皮苷的含量進行了測定, 未對槲皮素的含量進行測定, 也未見相關文獻報道。為了有效評價藥物質量, 本試驗采用高效液相色譜法對柏艾膠囊中槲皮素進行含量測定, 方法快速簡便, 可以為柏艾膠囊的質量控制提供借鑒。

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀；昆山市超聲儀器有限公司KQ-500B型超聲波清洗器；瑞士梅特勒XS205型電子分析天平。

槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院, 批號：100081-200907), 甲醇為色譜純, 其他試劑均為分析純, 水為超純水。

本實驗所用柏艾膠囊與柏艾膠囊陰性樣品均來自揚子江藥業(yè)集團有限公司, 柏艾膠囊批號：13090341、13102341、13102541；柏艾膠囊陰性對照樣品批號：YXDZ-13112011。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 柱溫30℃, 流動相為甲醇-0.2 mol/L磷酸溶液(50:50), 流速1.0 ml/min, 檢測波長256 nm。進樣量為10 μl,此條件下, 槲皮素與其他色譜峰能達到基線分離, 陰性對照無干擾, 理論板數按槲皮素計算不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備 稱取槲皮素對照品適量, 用甲醇溶解并稀釋至刻度制成每1 ml中含槲皮素16 μg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品約0.1 g, 精密稱定, 置具塞錐形瓶中, 精密加入甲醇20 ml, 密塞, 稱定重量, 超聲處理30 min, 取出, 放冷, 再稱定重量, 用甲醇補足減失的重量, 搖勻, 用微孔濾膜(0.45 μm)濾過, 取續(xù)濾液, 即得。

2.4 陰性對照樣品溶液的制備 精密量取裝量差異項下的柏艾膠囊陰性對照樣品約0.1 g, 按“2.3”項下的方法制備陰性對照樣品溶液。

2.5 干擾試驗 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照樣品溶液, 按上述色譜條件測定, 記錄色譜圖。結果顯示, 陰性對照樣品對槲皮素的測定無干擾。

2.6 線性關系考察 精密量取2.2項下的對照品溶液(17.136 μg/ml)1、5、8、1、12、15 μl注入液相色譜儀 , 按“2.1”項下條件測定槲皮素峰面積。以對照品進樣量(μl)為橫坐標(X), 槲皮素峰面積為縱坐標(Y), 求得回歸方程為Y=4.8354X+5.0914,r2=0.9996。

結果表明槲皮素在0.017136～0.25704 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.7 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10 μl, 按“2.1”項下條件, 連續(xù)進樣6次, 結果槲峰面積的RSD為0.1%。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液, 在配制后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 h分別進樣測定。按上述色譜條件測定槲皮素峰面積, 計算相對標準偏差, RSD為0.38%(n=14), 表明供試品溶液在13 h內穩(wěn)定性良好。

2.9 重復性試驗 取柏艾膠囊(批號：13102341)6份, 按“2.3”項下方法制備供試品溶液, 分別進樣測定, 結果槲皮素的平均含量為0.031 mg/mg, 相對標準偏差RSD為0.8%(n=6)。

2.10 加樣回收率試驗 精密量取已知槲皮素平均含量為0.0356 mg/mg的樣品6份, 分別精密加入0.4284 mg/ml的槲皮素對照品溶液10 ml, 按“2.3”項下方法制備供試品溶液, 再按“2.1”項下方法分別測定, 計算得平均回收率為99.89%, RSD為0.8%。

2.11 樣品含量測定 取3個批次的樣品各兩份, 按2.3項下方法制成供試品溶液, 依法平行測定兩次。按外標法計算槲皮素的含量, 樣本1、2、3含量的精密度分別為0.4%、1.1%、0.6%。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 取槲皮素對照品用紫外分光光度計進行全波長掃描, 結果發(fā)現(xiàn)在256 nm處有最大吸收, 且遠離溶劑的吸收峰, 故選擇256 nm作為檢測波長。

3.2 提取溶劑的選擇 參考《中國藥典》(2010年版)一部［1］及相關文獻［2］, 對不同濃度的甲醇作為提取溶劑進行驗證分析, 結果發(fā)現(xiàn), 采用純甲醇提取時, 槲皮素的提取率最高, 故選定純甲醇作為提取溶劑。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).2010年版.北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:200-201.

［2］ 汪繼峰, 孫巖, 楊玉華.高效液相色譜法測定復方平喘膠囊中槲皮素的含量.甘肅中醫(yī)學院學報, 2012.29(4):61～64.