小球藻快速增殖技術(shù)研究

張旭+鐘鴻干+孫楊+裴明海+王輝

摘 要：小球藻（ChLoreLLa pyrenoidosa）作為漁業(yè)生產(chǎn)常用藻，因其強(qiáng)大的光合作用和易于消化的特性，在魚(yú)、蝦、蟹、貝的養(yǎng)殖過(guò)程中起著很好的肥水和調(diào)水的作用。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，在飛機(jī)草（Eupatorium odoratum）浸提液作用下，小球藻的增殖速度明顯高于未做添加組?？蓾M足小球藻大量、快速增殖的生產(chǎn)需求。

關(guān)鍵詞：小球藻；飛機(jī)草；快速增殖

小球藻為綠藻門小球藻屬單細(xì)胞綠藻，廣泛分布于自然界，以淡水水域種類多，生物量大。小球藻的光合作用是其他植物的10倍以上，在魚(yú)蝦蟹貝的養(yǎng)殖過(guò)程中起著很好的肥水和調(diào)水的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，在飛機(jī)草浸提液的作用下，小球藻的增殖效果十分顯著，可滿足小球藻大量、快速增殖的生產(chǎn)需求。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用MA培養(yǎng)基試劑均為分析純。Bicine 購(gòu)于Sigma （St. Louis，MO，USA）。小球藻由海南大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)科研究生聯(lián)合培養(yǎng)基地——中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所海南瓊海研究中心提供，培養(yǎng)基選用MA培養(yǎng)基，pH 8.60±0.02，配方如表1。恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度（25±1） ℃，光照5 000 lx。飛機(jī)草粉末是由自然環(huán)境下隨處可見(jiàn)的野生飛機(jī)草 （莖和葉） 采摘后自然干燥，粉碎機(jī)粉碎后制得。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 飛機(jī)草活性物質(zhì)的浸提 準(zhǔn)確稱取飛機(jī)草粉末 20.0 g，CaO 3.0 g于500 mL燒杯中混勻，加蒸餾水200 mL浸沒(méi)攪勻，用錫紙封口于室溫下浸提24 h后，經(jīng)0.45 μm中速定性濾紙過(guò)濾，濾液即為飛機(jī)草浸提液，備用。

1.2.2 飛機(jī)草浸提液對(duì)小球藻的增殖影響 于12支10 mL培養(yǎng)管中加入5 mL MA培養(yǎng)基，121 ℃滅菌，冷卻后接入對(duì)數(shù)期藻液 1 mL，按梯度100 μL、200 μL、400 μL接入飛機(jī)草浸提液，對(duì)照組無(wú)添加。各條件組均做3聯(lián)處理，于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天搖勻一次。測(cè)定并記錄 1 mL對(duì)數(shù)期藻液的葉綠素 a 濃度。培養(yǎng)3 d后，再次測(cè)量各培養(yǎng)組的葉綠素 a 濃度。

1.3 數(shù)據(jù)的處理

1.3.1 顯微計(jì)數(shù) 取對(duì)數(shù)期小球藻0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL和4 mL，3 聯(lián)處理，稀釋相應(yīng)倍數(shù)后各取100 μL 滴于浮游植物計(jì)數(shù)框后蓋好蓋玻片，進(jìn)行顯微鏡檢。根據(jù)顯微鏡檢視野法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算公式如下：

1.3.2 統(tǒng)計(jì)分析 所得數(shù)據(jù)用Microsoft ExceL 2003和SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，顯著差異水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

通過(guò)3 d培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，添加100 μL、200 μL和400 μL飛機(jī)草浸提液后的培養(yǎng)組，小球藻的細(xì)胞個(gè)數(shù)均明顯高于對(duì)照組，可見(jiàn)，飛機(jī)草含有促進(jìn)小球藻增殖的活性物質(zhì)，對(duì)小球藻的增殖具有促進(jìn)作用。在實(shí)驗(yàn)用劑量范圍內(nèi)，添加200 μL飛機(jī)草浸提液的培養(yǎng)組在培養(yǎng)了3 d后細(xì)胞個(gè)數(shù)最多，如圖1。

3 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在MA培養(yǎng)基中添加飛機(jī)草浸提液培養(yǎng)小球藻，小球藻的增殖速度明顯快于未做添加的對(duì)照組?？梢?jiàn)，飛機(jī)草浸提液中含有刺激小球藻快速增殖分裂的活性物質(zhì)。

在實(shí)驗(yàn)用飛機(jī)草浸提液劑量范圍下，小球藻的增殖效果均明顯高于對(duì)照組，其中200 μL劑量下的增殖效果明顯強(qiáng)于100 μL和400 μL組?？梢?jiàn)，飛機(jī)草浸提液中刺激小球藻增殖分裂的活性物質(zhì)與使用劑量之間并不是簡(jiǎn)單的劑量越大刺激越強(qiáng)的關(guān)系。該活性物質(zhì)的刺激作用與使用劑量、藻體濃度之間存在一定的函數(shù)關(guān)系。

實(shí)驗(yàn)所用飛機(jī)草浸提液劑量范圍內(nèi)，小球藻細(xì)胞個(gè)數(shù)與浸提液劑量的最強(qiáng)配比是58.5萬(wàn)個(gè)/mL對(duì)應(yīng)200 μL飛機(jī)草浸提液。

參考文獻(xiàn)：

[1] Ding WX， Shen HM， Ong CN. Microcystic cyanobact eria extract induces cytoskeL eton disruption and intraceLLuLar gLutathione aLterat ion in hepatocytes [J]. Environ HeaLth Persp.2000， 108： 605-609

摘 要：小球藻（ChLoreLLa pyrenoidosa）作為漁業(yè)生產(chǎn)常用藻，因其強(qiáng)大的光合作用和易于消化的特性，在魚(yú)、蝦、蟹、貝的養(yǎng)殖過(guò)程中起著很好的肥水和調(diào)水的作用。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，在飛機(jī)草（Eupatorium odoratum）浸提液作用下，小球藻的增殖速度明顯高于未做添加組?？蓾M足小球藻大量、快速增殖的生產(chǎn)需求。

關(guān)鍵詞：小球藻；飛機(jī)草；快速增殖

小球藻為綠藻門小球藻屬單細(xì)胞綠藻，廣泛分布于自然界，以淡水水域種類多，生物量大。小球藻的光合作用是其他植物的10倍以上，在魚(yú)蝦蟹貝的養(yǎng)殖過(guò)程中起著很好的肥水和調(diào)水的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，在飛機(jī)草浸提液的作用下，小球藻的增殖效果十分顯著，可滿足小球藻大量、快速增殖的生產(chǎn)需求。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用MA培養(yǎng)基試劑均為分析純。Bicine 購(gòu)于Sigma （St. Louis，MO，USA）。小球藻由海南大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)科研究生聯(lián)合培養(yǎng)基地——中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所海南瓊海研究中心提供，培養(yǎng)基選用MA培養(yǎng)基，pH 8.60±0.02，配方如表1。恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度（25±1） ℃，光照5 000 lx。飛機(jī)草粉末是由自然環(huán)境下隨處可見(jiàn)的野生飛機(jī)草 （莖和葉） 采摘后自然干燥，粉碎機(jī)粉碎后制得。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 飛機(jī)草活性物質(zhì)的浸提 準(zhǔn)確稱取飛機(jī)草粉末 20.0 g，CaO 3.0 g于500 mL燒杯中混勻，加蒸餾水200 mL浸沒(méi)攪勻，用錫紙封口于室溫下浸提24 h后，經(jīng)0.45 μm中速定性濾紙過(guò)濾，濾液即為飛機(jī)草浸提液，備用。

1.2.2 飛機(jī)草浸提液對(duì)小球藻的增殖影響 于12支10 mL培養(yǎng)管中加入5 mL MA培養(yǎng)基，121 ℃滅菌，冷卻后接入對(duì)數(shù)期藻液 1 mL，按梯度100 μL、200 μL、400 μL接入飛機(jī)草浸提液，對(duì)照組無(wú)添加。各條件組均做3聯(lián)處理，于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天搖勻一次。測(cè)定并記錄 1 mL對(duì)數(shù)期藻液的葉綠素 a 濃度。培養(yǎng)3 d后，再次測(cè)量各培養(yǎng)組的葉綠素 a 濃度。

1.3 數(shù)據(jù)的處理

1.3.1 顯微計(jì)數(shù) 取對(duì)數(shù)期小球藻0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL和4 mL，3 聯(lián)處理，稀釋相應(yīng)倍數(shù)后各取100 μL 滴于浮游植物計(jì)數(shù)框后蓋好蓋玻片，進(jìn)行顯微鏡檢。根據(jù)顯微鏡檢視野法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算公式如下：

1.3.2 統(tǒng)計(jì)分析 所得數(shù)據(jù)用Microsoft ExceL 2003和SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，顯著差異水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

通過(guò)3 d培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，添加100 μL、200 μL和400 μL飛機(jī)草浸提液后的培養(yǎng)組，小球藻的細(xì)胞個(gè)數(shù)均明顯高于對(duì)照組，可見(jiàn)，飛機(jī)草含有促進(jìn)小球藻增殖的活性物質(zhì)，對(duì)小球藻的增殖具有促進(jìn)作用。在實(shí)驗(yàn)用劑量范圍內(nèi)，添加200 μL飛機(jī)草浸提液的培養(yǎng)組在培養(yǎng)了3 d后細(xì)胞個(gè)數(shù)最多，如圖1。

3 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在MA培養(yǎng)基中添加飛機(jī)草浸提液培養(yǎng)小球藻，小球藻的增殖速度明顯快于未做添加的對(duì)照組。可見(jiàn)，飛機(jī)草浸提液中含有刺激小球藻快速增殖分裂的活性物質(zhì)。

在實(shí)驗(yàn)用飛機(jī)草浸提液劑量范圍下，小球藻的增殖效果均明顯高于對(duì)照組，其中200 μL劑量下的增殖效果明顯強(qiáng)于100 μL和400 μL組?？梢?jiàn)，飛機(jī)草浸提液中刺激小球藻增殖分裂的活性物質(zhì)與使用劑量之間并不是簡(jiǎn)單的劑量越大刺激越強(qiáng)的關(guān)系。該活性物質(zhì)的刺激作用與使用劑量、藻體濃度之間存在一定的函數(shù)關(guān)系。

實(shí)驗(yàn)所用飛機(jī)草浸提液劑量范圍內(nèi)，小球藻細(xì)胞個(gè)數(shù)與浸提液劑量的最強(qiáng)配比是58.5萬(wàn)個(gè)/mL對(duì)應(yīng)200 μL飛機(jī)草浸提液。

參考文獻(xiàn)：

[1] Ding WX， Shen HM， Ong CN. Microcystic cyanobact eria extract induces cytoskeL eton disruption and intraceLLuLar gLutathione aLterat ion in hepatocytes [J]. Environ HeaLth Persp.2000， 108： 605-609

摘 要：小球藻（ChLoreLLa pyrenoidosa）作為漁業(yè)生產(chǎn)常用藻，因其強(qiáng)大的光合作用和易于消化的特性，在魚(yú)、蝦、蟹、貝的養(yǎng)殖過(guò)程中起著很好的肥水和調(diào)水的作用。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，在飛機(jī)草（Eupatorium odoratum）浸提液作用下，小球藻的增殖速度明顯高于未做添加組。可滿足小球藻大量、快速增殖的生產(chǎn)需求。

關(guān)鍵詞：小球藻；飛機(jī)草；快速增殖

小球藻為綠藻門小球藻屬單細(xì)胞綠藻，廣泛分布于自然界，以淡水水域種類多，生物量大。小球藻的光合作用是其他植物的10倍以上，在魚(yú)蝦蟹貝的養(yǎng)殖過(guò)程中起著很好的肥水和調(diào)水的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，在飛機(jī)草浸提液的作用下，小球藻的增殖效果十分顯著，可滿足小球藻大量、快速增殖的生產(chǎn)需求。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用MA培養(yǎng)基試劑均為分析純。Bicine 購(gòu)于Sigma （St. Louis，MO，USA）。小球藻由海南大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)科研究生聯(lián)合培養(yǎng)基地——中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所海南瓊海研究中心提供，培養(yǎng)基選用MA培養(yǎng)基，pH 8.60±0.02，配方如表1。恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度（25±1） ℃，光照5 000 lx。飛機(jī)草粉末是由自然環(huán)境下隨處可見(jiàn)的野生飛機(jī)草 （莖和葉） 采摘后自然干燥，粉碎機(jī)粉碎后制得。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 飛機(jī)草活性物質(zhì)的浸提 準(zhǔn)確稱取飛機(jī)草粉末 20.0 g，CaO 3.0 g于500 mL燒杯中混勻，加蒸餾水200 mL浸沒(méi)攪勻，用錫紙封口于室溫下浸提24 h后，經(jīng)0.45 μm中速定性濾紙過(guò)濾，濾液即為飛機(jī)草浸提液，備用。

1.2.2 飛機(jī)草浸提液對(duì)小球藻的增殖影響 于12支10 mL培養(yǎng)管中加入5 mL MA培養(yǎng)基，121 ℃滅菌，冷卻后接入對(duì)數(shù)期藻液 1 mL，按梯度100 μL、200 μL、400 μL接入飛機(jī)草浸提液，對(duì)照組無(wú)添加。各條件組均做3聯(lián)處理，于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天搖勻一次。測(cè)定并記錄 1 mL對(duì)數(shù)期藻液的葉綠素 a 濃度。培養(yǎng)3 d后，再次測(cè)量各培養(yǎng)組的葉綠素 a 濃度。

1.3 數(shù)據(jù)的處理

1.3.1 顯微計(jì)數(shù) 取對(duì)數(shù)期小球藻0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL和4 mL，3 聯(lián)處理，稀釋相應(yīng)倍數(shù)后各取100 μL 滴于浮游植物計(jì)數(shù)框后蓋好蓋玻片，進(jìn)行顯微鏡檢。根據(jù)顯微鏡檢視野法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算公式如下：

1.3.2 統(tǒng)計(jì)分析 所得數(shù)據(jù)用Microsoft ExceL 2003和SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，顯著差異水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

通過(guò)3 d培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，添加100 μL、200 μL和400 μL飛機(jī)草浸提液后的培養(yǎng)組，小球藻的細(xì)胞個(gè)數(shù)均明顯高于對(duì)照組，可見(jiàn)，飛機(jī)草含有促進(jìn)小球藻增殖的活性物質(zhì)，對(duì)小球藻的增殖具有促進(jìn)作用。在實(shí)驗(yàn)用劑量范圍內(nèi)，添加200 μL飛機(jī)草浸提液的培養(yǎng)組在培養(yǎng)了3 d后細(xì)胞個(gè)數(shù)最多，如圖1。

3 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在MA培養(yǎng)基中添加飛機(jī)草浸提液培養(yǎng)小球藻，小球藻的增殖速度明顯快于未做添加的對(duì)照組?？梢?jiàn)，飛機(jī)草浸提液中含有刺激小球藻快速增殖分裂的活性物質(zhì)。

在實(shí)驗(yàn)用飛機(jī)草浸提液劑量范圍下，小球藻的增殖效果均明顯高于對(duì)照組，其中200 μL劑量下的增殖效果明顯強(qiáng)于100 μL和400 μL組?？梢?jiàn)，飛機(jī)草浸提液中刺激小球藻增殖分裂的活性物質(zhì)與使用劑量之間并不是簡(jiǎn)單的劑量越大刺激越強(qiáng)的關(guān)系。該活性物質(zhì)的刺激作用與使用劑量、藻體濃度之間存在一定的函數(shù)關(guān)系。

實(shí)驗(yàn)所用飛機(jī)草浸提液劑量范圍內(nèi)，小球藻細(xì)胞個(gè)數(shù)與浸提液劑量的最強(qiáng)配比是58.5萬(wàn)個(gè)/mL對(duì)應(yīng)200 μL飛機(jī)草浸提液。

參考文獻(xiàn)：

[1] Ding WX， Shen HM， Ong CN. Microcystic cyanobact eria extract induces cytoskeL eton disruption and intraceLLuLar gLutathione aLterat ion in hepatocytes [J]. Environ HeaLth Persp.2000， 108： 605-609