RP-HPLC法測(cè)定不同樹齡紫油厚樸中和厚樸酚及厚樸酚的含量

李紅英，楊永康，殷紅清，秦大吉，萬海英，帥超群

(1.湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心鄂西綜合試驗(yàn)站，湖北 恩施 445000;2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

RP-HPLC法測(cè)定不同樹齡紫油厚樸中和厚樸酚及厚樸酚的含量

李紅英1,2，楊永康1,2，殷紅清1，秦大吉1，萬海英1，帥超群2

(1.湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心鄂西綜合試驗(yàn)站，湖北 恩施 445000;2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

建立了RP-HPLC法測(cè)定紫油厚樸藥材中和厚樸酚及厚樸酚的含量.采用依利特 ODS2 C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇∶水=75∶25(V/V)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)294 nm，流速1.0 mL/min，柱溫25℃.結(jié)果得到厚樸酚的平均回收率為98.10%，RSD為0.42%，和厚樸酚的平均回收率為99.86%，RSD為0.86%.該方法重復(fù)性好、精密度高、線性關(guān)系良好，快速、準(zhǔn)確；為紫油厚樸藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)、品種選育及含量控制提供了科學(xué)依據(jù).

厚樸；HPLC；厚樸酚；和厚樸酚

中藥材厚樸是木蘭科木蘭屬喬木厚樸(MagnoliaofficinalisRehd. et Wils.)或凹葉厚樸(MagnoliaofficinalisRehd. et Wils. var.bilobaRehd. et Wils.)的干燥干皮、根皮及枝皮,性溫味苦辛，具有食積氣滯、腹脹便秘、濕阻中焦、脘痞吐瀉、痰壅氣逆、胸滿喘咳等作用[1].厚樸中的主要有效成分是厚樸酚與和厚樸酚[2-4]，具有抗菌抗炎、抗氧化、抗癲癇、抗心率失常和抗血小板的作用，和厚樸酚還具有抗腫瘤作用[5].因此，紫油厚樸作為一種珍貴的傳統(tǒng)中藥材，是處在平均海拔1 200 m的恩施地區(qū)特色作物之一[6-8]，對(duì)其主要成分的含量控制及品質(zhì)評(píng)價(jià)具有舉足輕重的作用.同時(shí),可為紫油厚樸的品種選育提供科學(xué)的依據(jù).

1 材料

1.1 儀器

美國(guó)戴安Ultimate 3000高效液相色譜儀(Ultimate 3000泵，Ultimate 3000紫外檢測(cè)器，四元低壓混合系統(tǒng)，Ultimate 3000自動(dòng)進(jìn)樣器，ChromeLeon工作站，Ultimate 3000色譜柱恒溫箱)，KQ-250D型超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，賽多利斯BT125D電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司).

1.2 試劑

厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，分析甲醇、色譜甲醇，雙重蒸餾水.

1.3 樣品來源

紫油厚樸(MagnoliaeOfficinalis)干皮樣品，來源于湖北省恩施市新塘鄉(xiāng)湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所植物園，于2013年7月樹皮采剝期剝皮，曬干即可.

圖1 和厚樸酚、厚樸酚對(duì)照品

圖2 厚樸樣品

表1 添加回收率實(shí)驗(yàn)

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

HPLC以甲醇∶水=75∶25(V/V)為流動(dòng)相；色譜柱為依利特 ODS2 C18(4.6*200 mm,5 μm);檢測(cè)波長(zhǎng)為294 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為25℃.

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取和厚樸酚、厚樸酚對(duì)照品適量，用甲醇分別配置成含和厚樸酚、厚樸酚200 μg/mL、150 μg/mL的對(duì)照品溶液.和厚樸酚與厚樸酚對(duì)照品色譜圖如圖1所示.

2.3 供試品的制備

精確稱取紫油厚樸藥材粉末(粉碎過4號(hào)篩)0.2 g，置具塞錐形瓶中，精密稱量，分別精密加入甲醇20 mL,超聲波提取30 min，過濾，定容于25 mL容量瓶中，搖勻，作為供試品.部分試驗(yàn)厚樸樣品色譜圖如圖2所示.

2.4 線性關(guān)系的考察

取對(duì)照品溶液,按照2.1的色譜條件, 分別進(jìn)樣2.0、5.0、10.0、20.0、40. 0 μL，以峰面積(A)對(duì)濃度(C)回歸分析，得和厚樸酚、厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程分別為：A1=3.16x-0.23,相關(guān)系數(shù)r=0.999 99；A2=3.45x+0.21,相關(guān)系數(shù)r=0.999 99.結(jié)果表明,和厚樸酚、厚樸酚在此條件下呈良好的線性關(guān)系.

2.5 精密度試驗(yàn)

按照2.1的色譜條件連續(xù)進(jìn)同一供試品溶液5次，測(cè)和厚樸酚、厚樸酚峰面積的RSD分別為0.94%、1.61%.

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按每2 h測(cè)定一次，供試品中和厚樸酚、厚樸酚峰面積的RSD為0.74%、0.97%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取厚樸藥材5份，按照2.3的方法平行制備5份供試品.依該法測(cè)定，計(jì)算和厚樸酚、厚樸酚保留時(shí)間和峰面積的RSD分別為1.20%，1.97%和1.08%0.73%，表明該方法的重復(fù)性較好.

2.8 添加回收率試驗(yàn)

取已知含量的厚樸樣品約0.2 g，精密稱取3份，分別加入等量的對(duì)照品，按照2.3的方法進(jìn)行處理，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1.

2.9 紫油厚樸樣品的測(cè)定結(jié)果

按2.8方法操作制得的樣品溶液, 進(jìn)樣20 μL,在294 nm處檢測(cè).結(jié)果不同樹齡厚樸中和厚樸酚、厚樸酚的含量如下表2.

表2 恩施雙河不同樹齡紫油厚樸中和厚樸酚、厚樸酚的含量Tab.2 Enshi different old river, purple magnolia bark oil and honokiol, honokiol content

3 討論

通過對(duì)恩施雙河同一地區(qū)不同樹齡的紫油厚樸總酚含量測(cè)定結(jié)果看，5年生厚樸中總酚含量最低為2.918%，40年生總酚最高為13.195%.隨著樹齡的增長(zhǎng)厚樸總酚含量也不斷增高，紫油厚樸中和厚樸酚的含量明顯高于厚樸酚，而且相關(guān)研究也表明該地區(qū)也明顯高于其他地區(qū)的厚樸總酚的含量，說明恩施地區(qū)適合種植紫油厚樸.為紫油厚樸GDP種植提供可靠的依據(jù).另外，隨著樹齡的增長(zhǎng)，厚樸總酚是否也一直跟隨著增加，厚樸藥材最佳樹齡是多大，是下一步實(shí)驗(yàn)亟待解決的問題.

[1]劉可云，董志，朱毅，厚樸酚與和厚樸酚的藥理學(xué)研究現(xiàn)狀[J].中藥學(xué)，2006，28(5)：716-718.

[2]崔建芳.厚樸中厚樸酚與和厚樸酚的分析[J].藥物分析雜志，1989(8)：274.

[3]黃坤水.閩產(chǎn)凹葉厚樸抑菌活性及資源利用研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2006.

[4]李棣華.厚樸正交提取工藝的初步研究[J].天津中醫(yī)藥，2005(2)：68.

[5]郭文浩，曾霞.和厚樸酚在抗腫瘤研究中的進(jìn)展[J].華西醫(yī)學(xué)，2006,21(1)：179.

[6]楊紅兵,石磊,李明明,等.湖北恩施產(chǎn)厚樸葉中厚樸酚與和厚樸酚定量分析[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012(1):43-44.

[7]楊竹雅. 厚樸葉藥用價(jià)值研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué),2012.

[8]莊國(guó)慶,劉青,耿天龍，等.不同海拔高度厚樸的產(chǎn)量及厚樸酚與和厚樸酚含量分析[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù),2012(8)：2-15.

責(zé)任編輯：高山

TheRP-HPLCMethodforDeterminationofDifferentOldPurpleOilHonokiolandMagnololinMagnoliaBark

LI Hongying1,2,YANG Yongkang1,2,YIN Hongqing1,QIN Daji1,WAN Haiying1，SHUAI Chaoqun2

(1.West Comprehensive Experiment Station of Hubei Provincial Agriculture S&T Innovation Center，Enshi 445000,China;2.Enshi Qingjiang Bio-engineering Co.,Ltd.,Enshi 445000,China)

The HPLC is used to determine the content of purpleMagnoliaofficinalismedicinal herbs and Magnolol and honokiol,content. ODS2C18 (200 mm x 4.6 mm,5 μm)chromatographic column is a dopted,and methanol∶water=75∶25(V/V)is taken as mobile phase.Detection wavelength of 294 nm,velocity:1.0 ml/min,column temperature 25℃.The results of Magnolol, the average recovery was 98.10%,RSD=0.42%.Honokiol the average recovery was 99.86%,RSD=0.86%.The method has good repeatability, high precision,good linearity,rapidity and high accuracy.and provides a scientific basis for Magnolia officinalis medicinal materials quality evaluation,variety breeding and content control.

Magnoliaofficinalis;HPLC;magnolol;honokiol

2014-04-08.

湖北省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2013BE0048).

李紅英(1982- )，女，農(nóng)藝師，主要從事藥物分析、提取、檢測(cè)等研究.

O611.5

A

1008-8423(2014)02-0188-02