β-tubulinⅢ和Stathmin聯(lián)合檢測在評價多西他賽治療晚期肺鱗癌療效中的應(yīng)用

王秀麗, 段惠潔, 張國慶, 劉春玲

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院 肺內(nèi)科, 新疆 烏魯木齊, 830000)

肺癌是中國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤[1]。肺腺癌、肺鱗癌是肺癌中最主要的兩種病理類型。近年來，肺腺癌的診斷預(yù)測指標不斷涌現(xiàn)，如表皮生長因子受體(EGFR)，棘皮動物微管相關(guān)蛋白樣4-間變性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因等。而肺鱗癌的診治卻發(fā)展緩慢，療效預(yù)測指標較少、治療藥物有限,因此迫切需要找到一些對肺鱗癌療效預(yù)測準確性較高的指標，從而指導(dǎo)臨床用藥。多西他賽是治療肺鱗癌的常用藥，以微管為作用靶點。研究發(fā)現(xiàn)微管相關(guān)蛋白Stathmin和Ⅲ型β微管蛋白(β-tubulinⅢ)對微管類化療藥物有較好地療效預(yù)測作用[2-5], 本研究擬以β-tubulinⅢ和Stathmin為候選指標，通過前瞻性研究的方法找出預(yù)測多西他賽治療肺鱗癌療效的優(yōu)選標志物或標志物組合。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2007年10月—2012年8月新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科收治的肺鱗癌的患者95例，入組標準: ① 經(jīng)纖維支氣管鏡或穿刺活檢或手術(shù)切除病理組織學明確診斷為肺鱗癌，且為初治者; ② 按國際TNM分期為ⅢB～Ⅳ期; ③ 至少有1個單徑可測量的病灶; ④ 年齡18～75歲，身體狀況ECOG評分0～1分，預(yù)計生存期≥3個月; ⑤ 無主要器官的功能障礙; ⑥ 入選患者均簽署知情同意書。排除標準: ① 正在接受其他抗腫瘤治療者; ② 妊娠、哺乳期或未育患者; ③ 原發(fā)性腦瘤或中樞神經(jīng)轉(zhuǎn)移瘤病情未控者; ④ 其他惡性腫瘤病史者; ⑤ 化膿性及慢性感染性傷口遷延不愈者; ⑥ 患有不易控制的精神病者; ⑦ 化療禁忌證者。其中男69例，女26例；年齡36～77歲，中位年齡66歲。年齡<60歲28例，≥60歲67例；不吸煙或少吸煙34例，大量吸煙61例; ECOG評分0分43例, 1分52例; ⅢB期45例，Ⅳ期50例。

1.2 方法

1.2.1 治療方案：收集入組患者的病理標本及臨床資料，完善治療前檢查，明確分期，行多西他賽聯(lián)合順鉑方案化療：多西他賽75 mg/m2, 靜脈滴注d1, 順鉑30 mg/m2, 靜脈點滴d1～3，每21 d為1個化療周期?；?個周期后進行療效評價。對于疾病進展者依據(jù)NCCN指南更換治療方案，并進入隨訪，對于有效者，可繼續(xù)該方案治療，最多可達6個周期，以最佳療效作為最終療效評價?；熃Y(jié)束后定期復(fù)查、隨訪直至病變進展或死亡。

1.2.2 檢測方法：免疫組化SP法檢測β-tubulinⅢ與Stathmin蛋白表達，β-tubulinⅢ與Stathmin一抗均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。收集入組患者的組織學標本，制備4～5 μm厚的切片，按免疫組化試劑盒說明書檢測β-tubulinⅢ、Stathmin的表達。用已知Stathmin、β-tubulinⅢ蛋白表達陽性的切片作陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3 觀察指標

根據(jù)實體瘤的評價標準(RECIST)進行總體最佳療效評價[6], 包括完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩(wěn)定(SD)、疾病進展(PD)。主要觀察指標為客觀有效率(ORR)；次要觀察指標是疾病進展時間(TTP)和總生存期(OS)?？陀^有效率(ORR)：定義為CR+PR病例所占所有病例百分比。TTP: 指患者第一次給藥至任何有記錄的病變進展之日或任何原因引起的死亡之日的時間。OS: 患者開始治療至患者死亡或末次隨訪時間。

1.4 染色結(jié)果判定

染色結(jié)果由病理科醫(yī)生進行診斷和病理分級。每張切片在10×40倍鏡下，隨機選取5個視野，按腫瘤細胞著色強度和陽性細胞率分別進行計分。0分為陰性(-)，1～2分為陽性(+)，3～6分為中度陽性(2+)，7～9分為強陽性(3+)。分析結(jié)果時, ≤2分為陰性即低表達, >2分為陽性，即高表達。

2 結(jié) 果

2.1 臨床療效

95例患者中CR 0例, PR 31例, SD 37例, PD 27例; ORR為32.6%(31/95)。

2.2 不同臨床資料中Stathmin及β-tubulinⅢ蛋白的表達

β-tubulinⅢ和Stathmin均表達在腫瘤細胞的胞漿中，見圖1。

β-tubulinⅢ高表達50例, β-tubulinⅢ低表達組45例; Stathmin高表達53例, Stathmin低表達42例。β-tubulinⅢ和Stathmin陽性表達在不同年齡、性別、吸煙情況中分布無顯著差異(P>0.05), 但在不同TNM分期、ECOG評分中分布差異顯著(P<0.05或P<0.01), 在ECOG評分欠佳、分期較晚的病例中陽性表達率較高。見表1。

圖1 肺鱗癌組織中β-tubulinⅢ和Stathmin的表達水平

表1 Stathmin及β-tubulinⅢ蛋白的表達與臨床資料的關(guān)系

2.3 β-tubulinⅢ、Stathmin表達與多西他賽化療療效的關(guān)系

β-tubulinⅢ及Stathmin各自高表達組ORR均顯著低于各自低表達組(P<0.05)。β-tubulinⅢ、Stathmin均低表達組(雙低組)ORR為61.9%, β-tubulinⅢ、Stathmin均高表達組(雙高組)的ORR為20.7%, 雙低組ORR顯著高于雙高組(P<0.01), 并高于β-tubulinⅢ高表達組和Stathmin高表達組(P<0.01), 見表2。

2.4 β-tubulinⅢ、Stathmin表達與TTP、OS之間的關(guān)系

β-tubulinⅢ低表達組TTP和OS均優(yōu)于高表達組(P<0.01)。Stathmin低表達組TTP和OS也優(yōu)于高表達組(P<0.01)。雙低組患者的TTP和OS均顯著優(yōu)于β-tubulinⅢ低表達組、Stathmin低表達組和雙高組(P<0.01)。見表3。

表2 β-tubulinⅢ及Stathmin表達與化療療效的關(guān)系

表3 β-tubulinⅢ及Stathmin不同表達組間TTP及OS比較

3 討 論

肺鱗癌約占原發(fā)性肺癌的30%，沒有較好的靶向治療手段，細胞毒性藥物化療仍是晚期肺鱗癌的標準治療。多西他賽是一種半合成的紫杉烷類廣譜抗腫瘤藥物，是肺鱗癌的主要治療藥物之一，通過促進微管聚合并抑制微管解聚從而使腫瘤細胞的有絲分裂終止并凋亡[7]，從而達到抗腫瘤作用[8]。和其他化療藥物一樣，多西他賽的耐藥性是限制其臨床應(yīng)用的主要原因之一。在個體化治療模式逐漸推廣的今天，找到較好的療效預(yù)測指標，避免無效化療是改善肺鱗癌治療效果的可行方法。Stathmin蛋白是近年來發(fā)現(xiàn)的一種微管不穩(wěn)定蛋白，在細胞周期運行中調(diào)控微管的動態(tài)平衡。Stathmin在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達[9]。研究[10]發(fā)現(xiàn)，Stathmin高表達會影響紫杉類藥物和微管的結(jié)合，從而導(dǎo)致乳腺癌細胞對紫杉類藥物的反應(yīng)下降。微管蛋白β-tubulinⅢ是另一種與作用于微管的化療藥物敏感性關(guān)系最密切的標志物，在胃癌、乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤中的研究中，均提示β-tubulinⅢ是預(yù)測微管類化療藥物療效的潛在指標[4-5]。

本研究結(jié)果顯示，β-tubulinⅢ與Stathmin表達在患者的性別、年齡、吸煙史等臨床特征分布方面差異不明顯，而在ECOG評分欠佳、分期較晚、療效差的病例中陽性表達率較高，提示β-tubulinⅢ與Stathmin蛋白水平高表達是肺鱗癌治療的不良預(yù)后因素。結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，β-tubulinⅢ和Stathmin作為單獨預(yù)測指標來預(yù)測多西他賽的近期、遠期療效都有較好的預(yù)測價值，和文獻報道相符[11-12]。而β-tubulinⅢ和Stathmin蛋白均低表達的病例在ORR和長期生存方面均顯著優(yōu)于二者均高表達組及單獨低表達組，提示兩個指標聯(lián)合檢測對療效的預(yù)測更加準確和敏感。蒲驍麟等通過western-blot方法進行了β-tubulinⅢ和Stathmin檢測，分析了二者對長春瑞濱療效的預(yù)測作用[13-14]，和本研究結(jié)果一致，進一步驗證了β-tubulinⅢ和Stathmin聯(lián)合檢測在微管類藥物療效預(yù)測中的準確性[15]。

本研究證明了晚期肺鱗癌中β-tubulinⅢ與Stathmin蛋白表達水平對多西他賽的療效及預(yù)后有較好的預(yù)測價值，能夠為肺鱗癌的個體化治療提供一定的參考價值，且免疫組化方法簡便易行，適合臨床常規(guī)檢測。

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