大腸癌中CD44V6和β-catenin蛋白的表達(dá)及相關(guān)性研究

姚海燕 張志利

·論著·

大腸癌中CD44V6和β-catenin蛋白的表達(dá)及相關(guān)性研究

姚海燕 張志利

目的探討CD44V6、β-catenin蛋白與大腸癌臨床病理的關(guān)系及其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用。方法通過普通病理學(xué)及免疫組織化學(xué)過氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素(S-P)法檢測大腸癌組織73例、正常大腸黏膜組織(對照組)27例中CD44V6、β-catenin蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果CD44V6和β-catenin在正常大腸黏膜中陽性率與大腸癌組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CD44V6和β-catenin在大腸癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.373，P<0.05)。結(jié)論CD44V6和β-catenin的過表達(dá)在大腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用；二者具有正協(xié)同作用，聯(lián)合檢測CD44V6和β-catenin蛋白可作為大腸癌進(jìn)展的生物學(xué)指標(biāo)。

大腸癌；CD44V6；β連環(huán)素；免疫組織化學(xué)

大腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤,細(xì)胞黏附分子(cellular adhesion molecules，CAM)是細(xì)胞膜上的一類跨膜糖蛋白，是介導(dǎo)細(xì)胞之間以及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)連接的重要的大分子。CD44V6及β-連環(huán)素(β-catenin，β-cat)均屬于黏附分子家族的成員。本研究收集大腸癌病例73例，正常大腸黏膜27例的石蠟包埋組織及其詳細(xì)的臨床資料，通過免疫組織化學(xué)方法檢測CD44V6和β-catenin在其表達(dá)情況，以研究CD44V6及β-catenin與大腸癌患者的性別、年齡、部位及TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，探討CD44V6、β-catenin蛋白與大腸癌臨床病理的關(guān)系及其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年7月至2010年10月手術(shù)切除原發(fā)性大腸癌標(biāo)本。男56例，女17例；年齡32～78歲，中位年齡55歲；結(jié)腸癌35例，直腸癌38例；全部患者術(shù)前均未經(jīng)過放化療。另選取正常大腸黏膜組織27例作為對照。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

1.2.1 主要試劑：CD44V6鼠抗人單克隆抗體(稀釋度：1∶100)(福州邁新公司)β-catenin鼠抗人單克隆抗體(工作液) SP kit試劑盒 DAB kit顯色 PBS 磷酸鹽緩沖 H2O2 過氧化氫 DAB 二氨基聯(lián)苯 APES 防脫片膠。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法：每一標(biāo)本的蠟塊切片均切2片，每張切片厚度為4～5 μm。分別檢測CD44V6、β-catenin蛋白在正常組織、大腸癌組織的表達(dá)情況。免疫組化采用SP法同步檢測CD44V6、β-catenin蛋白的表達(dá)情況。均設(shè)陽性對照并以PBS溶液代替一抗做空白對照，以排除假陽性結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)、Fisher精確概率法、Spearman相關(guān)檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD44V6在正常大腸黏膜組和大腸癌組中的表達(dá) CD44V6在正常大腸黏膜中陽性率與大腸癌組織中比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 CD44V6在正常大腸黏膜組和大腸癌組中的表達(dá) 例

2.2 β-catenin在正常大腸黏膜組織和大腸癌組織中的免疫組化結(jié)果 見表2。

表2 β-catenin在正常大腸黏膜組和大腸癌組中的表達(dá) 例

2.3 大腸癌組織中CD44V6和β-catenin的表達(dá)之間的相關(guān)性 在60例β-catenin表達(dá)陽性的患者中，54例CD44V6也表達(dá)陽性；而在13例β-catenin表達(dá)陰性的患者中，僅7例CD44V6表達(dá)陽性， CD44V6和β-catenin在大腸癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.373，P<0.05)。見表3。

3 討論

惡性腫瘤的發(fā)生機(jī)制、發(fā)展過程是多因素和多步驟參與的，而且是多基因突變的復(fù)雜過程。CD44V6發(fā)揮其作用主要是通過與細(xì)胞外某些變種基質(zhì)成分相結(jié)合，一方面參與了腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附過程，另一方面可能是體細(xì)胞內(nèi)某些信號的傳導(dǎo)機(jī)制被激活，促使腫瘤細(xì)胞生成蛋白水解酶，加快細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散。另外，CD44V6陽性細(xì)胞更容易與毛細(xì)血管微小靜脈中內(nèi)皮細(xì)胞相結(jié)合，使腫瘤更容易侵入淋巴系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)，同時降解產(chǎn)物還能啟動血管的發(fā)生機(jī)制，這些都可促使CD44V6陽性腫瘤細(xì)胞能夠獲得較強(qiáng)的浸潤轉(zhuǎn)移能力[1]。近年來，越來越多的國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為，CD44V6的過表達(dá)與多種人體惡性腫瘤，如食管癌、胃癌、乳腺癌等的發(fā)生機(jī)制、發(fā)展過程、侵襲及轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)[2]，CD44V6可以作為惡性腫瘤早期診斷、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的判斷指標(biāo)。本組實(shí)驗(yàn)資料顯示，CD44V6在大腸癌組織和大腸正常組織中都有表達(dá)，但是CD44V6在大腸癌組織中的表達(dá)陽性率顯著高于大腸正常組織，且兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，這說明，CD44V6在大腸癌組織中表達(dá)增強(qiáng)，提示CD44V6參與了大腸癌的發(fā)生發(fā)展過程。

表3 大腸癌組織中CD44V6和β-catenin的表達(dá)的相關(guān)性 例

β-catenin是連環(huán)素家族的成員之一，β-catenin介入信號傳遞與腫瘤發(fā)生機(jī)制可能是：(1)β-catenin突變后與相關(guān)蛋白結(jié)合下降導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)游離β-catenin水平升高；(2)β-catenin突變使GSK-3β磷酸化位點(diǎn)失活，β-catenin不被降解；(3)β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子Tcf/Lef結(jié)合，激活并使靶基因轉(zhuǎn)錄促進(jìn)腫瘤發(fā)生。細(xì)胞內(nèi)游離狀態(tài)的β-catenin以及與E-cadherin、APC等相關(guān)蛋白結(jié)合狀態(tài)的β-catenin共同夠成一個“胞內(nèi)β-catenin庫”，可以互相達(dá)到某種平衡，一旦失衡，則可以導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生[3]。本研究結(jié)果顯示，27例正常大腸黏膜組織中有7例β-catenin陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為25.9%，73例大腸癌組織中有60例β-catenin陽性表達(dá)，陽性信號主要定位于胞漿，陽性表達(dá)率為82.8%，β-catenin在大腸癌黏膜組織中的陽性表達(dá)高于正常大腸黏膜，兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=28.222，P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明大腸癌組織中存在β-catenin胞漿異常表達(dá)增多，提示β-catenin在大腸癌組織中表達(dá)增加的同時伴有結(jié)構(gòu)和功能紊亂，參與了大腸癌的發(fā)生過程。

惡性腫瘤的形成機(jī)制和轉(zhuǎn)移過程是一個多基因、多因子共同作用的復(fù)雜結(jié)果。目前，許多學(xué)者提出了多基因協(xié)同作用學(xué)說，認(rèn)為在腫瘤發(fā)生機(jī)制、發(fā)展過程及轉(zhuǎn)移過程中，至少有兩個或兩個以上不同功能的突變癌基因各自發(fā)揮作用，互相配合，共同促使細(xì)胞癌變及轉(zhuǎn)移。CD44V6與β-catenin同屬黏附分子家族，參與了細(xì)胞與細(xì)胞之間和細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附，推測它們可能在介導(dǎo)腫瘤的浸潤過程和轉(zhuǎn)移過程中起協(xié)同作用。本研究結(jié)果顯示，在大腸癌組織中，CD44V6和β-catenin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.373，P<0.05)。結(jié)果提示，隨著CD44V6的表達(dá)增加，β-catenin 在大腸癌中也高異位表達(dá)，CD44V6和β-catenin在大腸癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮不同的相互協(xié)同作用。目前有關(guān)上述指標(biāo)因子相關(guān)性的研究比較少，結(jié)果也不盡相同，其間具體的相互作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究證實(shí)，筆者認(rèn)為，深層次探尋它們之間的相互作用機(jī)理，對于研究阻斷腫瘤發(fā)生機(jī)制、發(fā)展過程及侵襲轉(zhuǎn)移過程的方法將有重要深遠(yuǎn)意義。

1 Kim HR,Wheeler MA,Wilson CM,et al.Hyaluronan facilitates invasion of colon carcinoma cells in vitro via interaction with CD44.Cancer Research 2004,64：4569-4576.

2 Hal NL,Dongen GA,Stigtervan Walsum M,et al.Characterization of CD44V6isoforms in head-and-neck squamouscell carcinoma.Int J Cancer,1999,82:837-845.

3 Cong F，Zhang J，Pao W，et al.A protein knockdown strategy to study the function of beta-cateninin tumor genesis.BMC Mol Bio，2003，4:10.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.06.018

066000 河北省秦皇島市婦幼保健院(姚海燕)；河北省秦皇島市人民醫(yī)院(張志利)

R 735.34

A

1002-7386(2014)06-0854-03

2013-10-16)