雞球蟲耐藥性的研究進(jìn)展及其應(yīng)對(duì)措施

朱鳳居

（重慶市長壽區(qū)渡舟街道畜牧獸醫(yī)站，重慶 長壽 401228）

1 雞球蟲病的危害

雞球蟲病因雞吞噬帶有感染性球蟲卵囊的土壤、飼料或飲水后而感染，其主要癥狀為：破壞雞腸上皮細(xì)胞引起腸道出血，降低雞采食量，消瘦、便血，甚至死亡。雞球蟲對(duì)雛雞的危害特別嚴(yán)重，特別是5～20日齡的雛雞發(fā)病率高，死亡率高達(dá)80%。即使病愈，雛雞的生長發(fā)育也會(huì)受到阻礙，感染后的成年雞，其產(chǎn)蛋和增重都會(huì)受到影響。雞球蟲病造成的養(yǎng)雞業(yè)經(jīng)濟(jì)損失巨大。2007年，Lillehoj估計(jì)全世界因該病造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)70億美元。2008年，Mc－Dougald等報(bào)道，全世界僅藥物預(yù)防球蟲病費(fèi)用一項(xiàng)就已超過30億美元。在我國，幾乎所有雛雞飼料中都添加有抗球蟲藥，僅每年用于防治雞球蟲病的藥費(fèi)就高達(dá)20～30億元人民幣。

2 球蟲耐藥性的產(chǎn)生機(jī)理

2.1 離子載體類抗球蟲藥的耐藥機(jī)理 離子載體類抗生素能非特異性地結(jié)合球蟲體內(nèi)陽離子，自身作為轉(zhuǎn)運(yùn)載體將所結(jié)合的離子轉(zhuǎn)運(yùn)出去，破壞細(xì)胞膜內(nèi)外的電化學(xué)梯度，使大量電解質(zhì)進(jìn)入球蟲體內(nèi)，最終導(dǎo)致蟲體脹裂。有報(bào)道認(rèn)為，球蟲對(duì)這類藥物耐藥性的產(chǎn)生可能是由于球蟲細(xì)胞膜通透性發(fā)生了變化所致，當(dāng)球蟲細(xì)胞膜通透性降低時(shí)，耐藥性就會(huì)產(chǎn)生。

2.2 作用于線粒體的抗球蟲藥的耐藥機(jī)理 線粒體氧化磷酸化是釋放代謝能的主要環(huán)節(jié)。呼吸鏈和ATP合成酶復(fù)合體是氧化磷酸化的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。Fry等（1984）研究表明，抗球蟲藥物喹啉酮通過阻斷蟲體線粒體內(nèi)膜的電子傳遞，從而抑制ATP生成。

2.3 作用于內(nèi)膜系統(tǒng)的抗球蟲藥的耐藥機(jī)理 三嗪酮是一種新型廣譜抗球蟲藥，通過抑制蛋白質(zhì)合成來影響低氧濃度時(shí)的電子運(yùn)輸，抵御球蟲對(duì)宿主細(xì)胞的侵襲。研究表明，三嗪酮在不影響宿主細(xì)胞的濃度下可使球蟲各發(fā)育階段的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等膜質(zhì)結(jié)構(gòu)腫脹而發(fā)生嚴(yán)重的空泡變性，且其活性周期較長。Chapman（1984）認(rèn)為，這類藥物耐藥性的產(chǎn)生是球蟲群體在抗球蟲藥物壓力作用下發(fā)生突變引起的。

3 雞球蟲耐藥性的主要特點(diǎn)

3.1 球蟲能耐受藥物的極高濃度 就某種藥物而言，球蟲一旦產(chǎn)生耐藥性，便可耐受使用濃度的4～8倍甚至更高濃度，而實(shí)際生產(chǎn)上，這足以對(duì)雞群本身造成毒害作用。這意味著養(yǎng)雞生產(chǎn)者一味地增加抗球蟲藥物的使用濃度，是毫無意義的。Augustine等（1987）報(bào)道，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，對(duì)莫能菌素敏感的蟲株攝取的藥量顯著高于已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性的蟲株，因此體外抑制耐藥蟲株所需莫能菌素的劑量比敏感蟲株要高出30倍左右。

3.2 球蟲具有交叉耐藥性 當(dāng)球蟲對(duì)某種抗球蟲藥物產(chǎn)生耐藥性后，對(duì)于從來未接觸過的結(jié)構(gòu)近似或作用性質(zhì)相同的抗球蟲藥物也可產(chǎn)生耐藥性，稱之為交叉耐藥，根據(jù)程度的不同，又有完全交叉耐藥和部分交叉耐藥之分。對(duì)于化學(xué)合成的抗球蟲藥，由于有特殊的作用機(jī)制，因而不易產(chǎn)生交叉耐藥性。馬立農(nóng)等（2003）已經(jīng)證實(shí)，具有不同作用性質(zhì)的化學(xué)藥物百球清和地克珠利之間沒有交叉耐藥性。Bedrinik等（1989）報(bào)道,對(duì)某一種單價(jià)離子載體抗球蟲藥物產(chǎn)生耐藥性的蟲株，對(duì)同類的其他抗球蟲藥物也具有一定程度的耐藥性。

3.3 球蟲具有多重耐藥性 多重耐藥性是指球蟲對(duì)一種抗球蟲藥物產(chǎn)生耐藥性的同時(shí)，對(duì)其他結(jié)構(gòu)不同、作用靶點(diǎn)不同的抗球蟲藥物也具有耐藥性。耐受不同藥物的蟲株間還可通過遺傳重組，同時(shí)或先后對(duì)化學(xué)性質(zhì)和作用機(jī)理不同的藥物產(chǎn)生耐藥性。Williams（1998）對(duì)堆型艾美耳球蟲的耐藥蟲株進(jìn)行了表型分析，認(rèn)為克球粉和喹啉類藥物之間確實(shí)不存在耐藥基因的轉(zhuǎn)移，其雙重耐藥性的產(chǎn)生可能是由于球蟲群體中存在對(duì)兩種藥物有耐藥性的突變體。

3.4 對(duì)藥物耐受性有差異 同一蟲株對(duì)不同種抗球蟲藥物的耐藥性程度不同，同一種抗球蟲藥物對(duì)不同球蟲的藥效也具有顯著差異。顧有方等（2004）對(duì)E.tenella鳳陽株、宣城株、揚(yáng)州株、蒙城株和南京株的藥效試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，宣城株和南京株對(duì)馬杜霉素、氯羥吡啶、氯苯胍和地克珠利均有不同程度的耐藥。

3.5 具有遺傳性和相對(duì)穩(wěn)定性 耐藥性的產(chǎn)生是球蟲群體中突變個(gè)體多次重復(fù)選擇的結(jié)果，球蟲在其生活周期的后期進(jìn)行有性生殖，形成卵囊，耐藥性也世代相傳，因此認(rèn)為，耐藥性是通過耐藥基因而遺傳的。有實(shí)驗(yàn)先只使裂殖子獲得耐藥性，然后發(fā)現(xiàn)裂殖子會(huì)將這種耐藥性傳遞給世代交替的卵囊，最后將獲得耐藥性的蟲株分離后保存在實(shí)驗(yàn)室，發(fā)現(xiàn)這種耐藥性可長期保持。

4 改變球蟲耐藥性的應(yīng)對(duì)措施

4.1 無藥物壓力下提高球蟲對(duì)藥物的敏感性 實(shí)踐證明，通過不斷的改變藥物，造成某些藥物停用，形成無藥物壓力，會(huì)使一些耐藥株的藥物敏感性有所提高。上世紀(jì)90年代以前，北京、海口、上海地區(qū)在養(yǎng)雞生產(chǎn)中廣泛使用氯苯胍作為主要的抗球蟲藥物，隨著莫能菌素投入使用，基本停止使用氯苯胍，然而在1994年，寧長申等人發(fā)現(xiàn)這三個(gè)地區(qū)的抗藥E.tenella蟲株重新對(duì)氯苯胍產(chǎn)生了敏感性。另一方面，對(duì)某一特定種群而言，敏感蟲群的進(jìn)入也可使耐藥蟲群所占的比例減少，從而呈現(xiàn)出整體敏感性提高。

4.2 改變用藥方式提高藥物對(duì)球蟲的敏感性 根據(jù)藥物的作用峰期合理用藥，這包括預(yù)防和治療兩個(gè)方面。在選擇預(yù)防用藥方案時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥物的作用峰期合理配藥，如采用輪換用藥、聯(lián)合用藥和穿梭用藥等方案，可使蟲株恢復(fù)對(duì)藥物的敏感性。在采用輪換用藥和穿梭用藥方案時(shí)，必須根據(jù)藥物的作用方式和特點(diǎn)確定這些藥物的使用順序，應(yīng)避免使用作用方式相同的2種藥物。Long（1985）曾分別做過兩藥穿梭和三藥穿梭，發(fā)現(xiàn)穿梭用藥有延緩球蟲耐藥性產(chǎn)生的作用。謝明權(quán)等（1998）聯(lián)合使用幾種單用時(shí)抗球蟲效果很差的化學(xué)合成藥，結(jié)果取得了良好的抗球蟲效果。聶奎等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，使用地克珠利5mg/kg+氨丙啉240 mg/kg+左旋咪唑1.5 mg/kg的雛雞存活率為100%，相對(duì)增重率為97.5%，抗球蟲指數(shù)（ACI）值為181.9，抗球蟲效果明顯。

4.3 使用中獸藥 臨床上常用的防治雞球蟲病的中草藥有五大類：驅(qū)蟲類藥，如常山、仙鶴草、苦楝皮、百部、冰片等；清熱燥濕類藥，如黃芩、黃連、黃柏、白頭翁、秦皮、苦參、龍膽草、茵陳等；清熱解毒類藥，如青蒿、馬齒莧、柴胡、蒲公英、穿心蓮、金銀花、大青葉等；補(bǔ)氣益血類藥，如黨參、黃芪、當(dāng)歸、熟地、白術(shù)、白芍、甘草、大棗等；活血止血類藥，如丹參、桃仁、地榆炭、仙鶴草、旱蓮草、白及等。聶奎等人分別對(duì)具有補(bǔ)益作用、涼血作用、清熱燥濕作用和固澀作用的中藥進(jìn)行多次抗雛雞球蟲感染試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這些中藥對(duì)雛雞的保護(hù)率均可達(dá)90%，抗球蟲指數(shù)（ACI）達(dá)到160～180。劉詩柱等（2011）自擬中藥方劑（常山、仙鶴草、青蒿、柴胡、穿心蓮、白芍、金銀花、地榆炭、白茅根、甘草）治療雞球蟲病，結(jié)果雞相對(duì)增重率在84.6%～94.5%，ACI值達(dá)171.2、164.7。中藥抗球蟲劑有許多優(yōu)點(diǎn)，不論是單味還是復(fù)方，都具有多功能的組合效應(yīng)?，F(xiàn)在許多大型集約化養(yǎng)殖場已越來越重視使用天然中草藥來防病治病，這樣不僅可以降低和消除長期使用化學(xué)藥物造成的藥物殘留，避免蟲體產(chǎn)生抗藥性，而且能提高肉蛋產(chǎn)品的質(zhì)量，更好地滿足人們對(duì)綠色食品與日俱增的需求。

4.4 使用營養(yǎng)添加劑 國內(nèi)外許多學(xué)者正嘗試著從飼料添加劑入手來防治球蟲病，以解決雞球蟲耐藥性的問題。Kettunen（2001）認(rèn)為，甜菜堿能保護(hù)腸絨毛抵抗球蟲的感染或損害；Giannenas（2003）報(bào)道了牛至油有較好的抗柔嫩艾美耳球蟲的作用。Dalloul等（2003）報(bào)道乳桿菌能減少球蟲卵囊的產(chǎn)生量，降低盲腸病變平均記分，減少發(fā)病率、死亡率，且ACI值達(dá)到173。另外，日糧中添加魚油、亞麻籽、椰子油、寡糖、甜菜堿可有效抑制球蟲的發(fā)育，降低感染雞的病變損傷，減少死亡率。

4.5 研制抗球蟲新藥 不斷探索和篩選高效、低毒、廣譜、低殘留的抗球蟲藥，是現(xiàn)代學(xué)者們研究和開發(fā)新藥的目標(biāo)。Allcocco等（2001）研究了雙間硝基苯二硫的作用機(jī)制，指出可研制新藥作用于球蟲的甘露醇循環(huán)來控制球蟲病。另外，球蟲的生物學(xué)特征以及蟲體內(nèi)酶功能的研究也為防治球蟲病找到了新方法。Williams（1999）認(rèn)為，艾美耳屬球蟲的三種酶可能成為化學(xué)治療的靶點(diǎn)，尤其是羥丁酸脫氫酶的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了脂肪酸具有抗球蟲活性。

總之，從球蟲耐藥性產(chǎn)生機(jī)理、形成途徑以及抗球蟲藥物作用原理等入手研究，將是控制雞球蟲病、保護(hù)或恢復(fù)抗球蟲藥物效力的根本策略。

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