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    血必凈注射液對(duì)自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎患者Th1/Th2亞群的影響

    2014-08-15 01:26:04毛燕群陳凱紅
    實(shí)用藥物與臨床 2014年2期
    關(guān)鍵詞:腹膜炎細(xì)菌性細(xì)胞因子

    毛燕群,陳凱紅,孫 彤,裴 豪

    0 引言

    自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎(Spontaneous bacterial peritonitis,SBP)又稱原發(fā)性腹膜炎,是指腹腔內(nèi)無(wú)臟器穿孔而發(fā)生的急性細(xì)菌感染,多因致病菌經(jīng)血液或淋巴傳播而致,SBP的發(fā)生主要與肝硬化患者機(jī)體免疫力下降、門脈高壓、腸壁淤血水腫、腸壁屏障破壞、腸道菌群易位等原因有關(guān)。SBP的發(fā)生與肝功能的損傷程度密切相關(guān)[1],其反過(guò)來(lái)又可進(jìn)一步加重原有病情,并誘發(fā)肝性腦病、上消化道出血及肝腎綜合征,甚至多臟器功能衰竭等嚴(yán)重并發(fā)癥而危及生命。因此,SBP的治療在晚期肝病的治療中至關(guān)重要。本研究探討了SBP的治療中應(yīng)用血必凈注射液聯(lián)合抗菌藥物治療,相對(duì)于單獨(dú)應(yīng)用抗菌藥物治療,對(duì)自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎患者治療前、后血清Th1/Th2平衡的變化,以觀察血必凈注射液對(duì)Th1/Th2平衡的影響。

    1 對(duì)象與方法

    1.1 對(duì)象 選取2010年3月至2012年9月在我院傳染科住院的乙型肝炎后肝硬化合并自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎患者60例,隨機(jī)分為2組。血必凈組35例,男25例,女10例,年齡27~66歲,平均(47.11±11.35)歲。對(duì)照組25例,男18例,女7例,年齡29~65歲,平均(46.92±10.16)歲。SBP的診斷符合2004年美國(guó)肝病研究學(xué)會(huì)肝硬化腹水指南對(duì)SBP的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。血必凈組腹水培養(yǎng)陽(yáng)性5例,其中,大腸埃希氏菌4例,肺炎克雷伯菌1例。對(duì)照組腹水培養(yǎng)陽(yáng)性4例,均為大腸埃希氏菌。

    1.2 方法

    1.2.1 治療方法 對(duì)照組應(yīng)用頭孢吡肟(深圳立健藥業(yè)有限公司)靜脈注射,2 g/次,2次/d,輔以其他保肝、降酶、退黃、利尿等治療。血必凈組在對(duì)照組治療的基礎(chǔ)上加用血必凈注射液(天津紅日藥業(yè)股份有限)靜脈滴注,50 mL/次,2次/d。排除入組前已經(jīng)具有重型肝炎的患者,兩組均未應(yīng)用其他免疫增強(qiáng)劑。

    1.2.2 試劑和儀器 CY5(吲哚-5-菁)標(biāo)記的抗CD4單抗、異硫氰酸熒光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)標(biāo)記的抗CD3單抗、巰基化藻紅蛋白(Phycoerthrin PE)標(biāo)記的抗CD30單抗、鼠抗人IgG1-PE、鼠抗人IgG1-FITC和鼠抗人lgG1-Cy5均為美國(guó)EB公司提供,淋巴細(xì)胞分離液(美國(guó)Sigma公司),RPMI-1640培養(yǎng)液、胎牛血清(美國(guó)Gibco公司),T細(xì)胞分離富聚柱(美國(guó)BD公司),流式細(xì)胞儀為美國(guó)BECKMAN COULTER公司的EPICS XL型。

    1.2.3 外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood monoeuclear cell,PBMC)的分離 所有受試者均于治療前、治療第4天及治療第8天時(shí)采取患者外周靜脈血4 mL,肝素抗凝,用淋巴細(xì)胞分離液分離得單個(gè)核細(xì)胞,無(wú)菌玻璃培養(yǎng)皿37 ℃培養(yǎng)30 min,去除黏附于玻璃培養(yǎng)皿的PBMC,以獲取懸浮的淋巴細(xì)胞。用溶血?jiǎng)?0.85%氯化銨)溶解細(xì)胞,經(jīng)T細(xì)胞分離富聚柱得純化的T細(xì)胞,用20%的小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度約2×106/mL。流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)其純度>98%,臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)其活性>97%。

    1.2.4 Thl、Th2亞群的測(cè)定 取2支試管,各加入100 μL PBMC懸液。2管分別加入抗CD3-FITC、抗CD4-Cy5、抗CD30-PE(CD4+管);鼠抗人lgG1-Cy5、鼠抗人IgG1-PE、鼠抗人IgG1-FITC(陰性對(duì)照管)。各種標(biāo)記抗體均為15 μL,混勻,4 ℃避光30 min,磷酸鹽緩沖液洗滌2次,各管加入0.5 mL緩沖液,上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。以CD3+、CD4+、CD3O-T細(xì)胞代表Thl細(xì)胞,以CD3+、CD4+、 CD3O+T細(xì)胞代表Th2細(xì)胞。

    1.2.5 血清HBV標(biāo)志物檢測(cè) 采用時(shí)間分辨熒光定量分析法,試劑盒購(gòu)自上??迫A公司。

    2 結(jié)果

    兩組治療前后血清Th1、Th2的變化見表1。

    表1 治療前后兩組血清Th1/Th2的變化

    注:與上一個(gè)治療時(shí)間段比較,#P<0.05,##P<0.01;與對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01

    由表1可見,治療前兩組患者Th1、Th2及Th1/Th2比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩組患者Th1、Th2細(xì)胞均于治療4 d后升至峰值,之后下降。治療后4、8 d,兩組患者Th1細(xì)胞水平均有所提高(P<0.05);兩組Th1細(xì)胞水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后4 d,兩組患者Th2細(xì)胞水平均有所提高(P<0.05);治療后8 d均降低,與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后4 d、8 d,兩組患者Th2細(xì)胞水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后,兩組患者Th1/Th2比值均持續(xù)升高(P<0.01);治療后4 d、8 d,兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

    3 討論

    根據(jù)分泌細(xì)胞因子和介導(dǎo)免疫功能的不同,輔助性T細(xì)胞主要分為Thl和Th2兩大類。Th1細(xì)胞又稱為促炎性T細(xì)胞,可特異分泌干擾素γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子β(TNF-β)等細(xì)胞因子;能激活巨噬細(xì)胞,引起細(xì)胞毒作用,介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答;可促進(jìn)遲發(fā)性超敏反應(yīng),在器官移植排斥反應(yīng)和自身免疫病的誘導(dǎo)過(guò)程中起重要作用;但反應(yīng)過(guò)度也會(huì)引起組織損傷。Th2細(xì)胞又稱為抗炎性T細(xì)胞,可特異性分泌IL-4、IL-6、IL-10等Th2類細(xì)胞因子,主要輔助B細(xì)胞分化成為抗體產(chǎn)生細(xì)胞,與體液免疫相關(guān),在過(guò)敏反應(yīng)中起主導(dǎo)作用,介導(dǎo)體液免疫。Th1細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子可抑制Th2細(xì)胞的增殖分化,并促進(jìn)Th1細(xì)胞的自身分化成熟。反之,Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子抑制Th1細(xì)胞的增殖分化,促進(jìn)Th2細(xì)胞的自身分化成熟。在正常情況下,二者處于平衡狀態(tài),維持機(jī)體正常免疫功能。研究表明,Th1/Th2之間的平衡與多數(shù)真菌、細(xì)菌、病毒等所致的感染性疾病病情變化關(guān)系密切。在動(dòng)物試驗(yàn)中,患腹膜炎的試驗(yàn)大鼠隨著腹膜炎的嚴(yán)重程度,其產(chǎn)生IFN-γ和IL-12的能力減弱,Th1/Th2的細(xì)胞因子的平衡狀態(tài)被打破,Th2表型占主導(dǎo)地位[3]。

    血必凈注射液由紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸5味中藥組成,具有活血化瘀、扶正祛邪、清熱解毒、菌毒并治等功效。其主要有效成分包括赤芍、丹參素、紅花黃色素A、酚酸、黃酮苷和苯乙基苷類、阿魏酸、芍藥苷、原二茶醛等[4-5]。有報(bào)道,血必凈注射液具有拮抗內(nèi)毒素、抑制多種炎癥介質(zhì)、改善微循環(huán)及凝血功能障礙等作用,可以明顯改善外周血中性粒細(xì)胞的趨化、吞噬、氧化呼吸爆發(fā)功能;同時(shí),強(qiáng)效拮抗內(nèi)毒素誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)源性炎性介質(zhì)失控性釋放,加強(qiáng)單核細(xì)胞人類白細(xì)胞Ⅱ類抗原(HLA、DR)表達(dá),調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能,促進(jìn)免疫功能恢復(fù)[6-7]。本研究結(jié)果顯示,兩組患者于腹膜炎癥開始時(shí),其Th1、Th2 及Th1/Th2均處于一個(gè)較低的水平。其后,由于炎癥因子、細(xì)菌毒素及免疫系統(tǒng)之間的復(fù)雜影響,兩組患者Th1、Th2 及Th1/Th2均有明顯上升,Th1應(yīng)答和Th2應(yīng)答均開始活躍。血必凈組Th1細(xì)胞在治療第4天的峰值和治療第8天的水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05),表明血必凈組Th1應(yīng)答明顯強(qiáng)于對(duì)照組。同時(shí)兩組患者Th2細(xì)胞水平在治療第4天和治療第8天時(shí)比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),提示兩組患者Th2應(yīng)答處于一個(gè)相似的水平。在Th1/Th2比值上,兩組雖均有明顯的持續(xù)性上升(P<0.01),但在治療第4天和治療第8天,血必凈組均明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。兩組患者經(jīng)治療后,其Th1/Th2平衡明顯向Th1優(yōu)勢(shì)漂移,而血必凈組的Th1漂移更加明顯。以上研究結(jié)果提示,血必凈注射液可以明顯促進(jìn)乙型肝炎后肝硬化合并原發(fā)性腹膜炎患者的Th1應(yīng)答,結(jié)果即為腹腔炎癥可以被更加迅速、有效地控制。這些免疫反應(yīng)與血必凈注射液的抑制炎性介質(zhì)、改善感染時(shí)的特異性免疫功能狀態(tài)有關(guān),而其改善微循環(huán)、拮抗內(nèi)毒素以及抗細(xì)胞凋亡、改善組織器官血液循環(huán)、增加組織氧代謝的作用[8-9]亦可以保護(hù)腹膜炎患者脆弱的肝、腎功能,避免感染導(dǎo)致的肝功能損傷迅速加重,減少重型肝炎的產(chǎn)生及肝腎綜合征的發(fā)生,從而進(jìn)一步減少病死率。

    綜上所述,血必凈注射液可以改善促炎/抗炎反應(yīng)平衡,促進(jìn)炎癥吸收,同時(shí)更好地保護(hù)患者肝、腎功能,降低患者的病死率。因此,在自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎患者的治療中,配合應(yīng)用血必凈注射液具有一定的臨床意義。

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