鴨流感和里默氏桿菌混合感染的診治

謝麗華 秦毅斌

（1.梧州市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西梧州 543002；2.廣西獸醫(yī)研究所，廣西南寧 530001）

當(dāng)前我國鴨病危害日益突出，尤其以鴨病毒性肝炎（DVH）、鴨流感（AI）、鴨傳染性漿膜炎（ISD）、大腸桿菌?。–olibacillosis）等傳染病最為嚴(yán)重[1]。其中鴨流感是由A型流感病毒引起的可侵害各品種、各日齡鴨的一種傳染病，以神經(jīng)癥狀和心臟白條狀壞死為特征[2]。鴨傳染性漿膜炎是由鴨疫巴氏桿菌引起的侵害雛鴨的一種慢性或急性敗血性傳染病，病理特點(diǎn)為纖維素性心包炎、氣囊炎、肝周炎以及腦膜炎等[3]。鴨流感和鴨傳染性漿膜炎既可以單一出現(xiàn)，又可以分別與其他病原混合感染[4～5]，但鴨流感和鴨傳染性漿膜炎共同感染的報道很少，二者混合感染的防治資料非常欠缺。2013年11月～2014年2月廣西東部某些地區(qū)養(yǎng)鴨場出現(xiàn)一種很難治療的“新病綜合征”，主要侵害腦和心臟。筆者根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、癥狀病變和實(shí)驗(yàn)室檢測，發(fā)現(xiàn)該病的2個致病因子禽流感病毒和鴨疫里默氏桿菌在毒力、耐藥性方面與往日流行毒株差異很大，即針對性提出一套綜合治療方案使病情得到有效控制，現(xiàn)介紹如下。

1 基本情況

1.1 流行特點(diǎn)

具有明顯的季節(jié)性和地域性，在陰冷潮濕的冬春季節(jié)發(fā)病，流行區(qū)域?yàn)榈屯菟?、水庫、緩流江邊的養(yǎng)鴨場。傳染源為病鴨、隱性帶毒鴨以及受到污染的水質(zhì)、飼料、槽具等。鴨為易感動物，鴨場周圍僅個別雞有輕微呼吸道癥狀。

1.2 發(fā)病情況

發(fā)病日齡不受限制，5日齡雛鴨～45日齡大鴨均出現(xiàn)癥狀。不同鴨場的發(fā)病率在20%～100%之間，雛鴨病死率高達(dá)80%，具有高度的致死性和強(qiáng)傳染性。潛伏期3～7 d，發(fā)病急，個別鴨出現(xiàn)癥狀后迅速波及全群。

1.3 臨床癥狀

全身癥狀為病鴨精神萎靡、羽毛蓬亂，多數(shù)閉眼蹲伏，少食或拒食，體溫升高。拉白色、淡黃色或綠色稀糞并污染肛門。個別鴨頭腫，流淚，眼圈濕紅，咳嗽、甩鼻，鼻孔有粘液性分泌物。該病具有明顯的神經(jīng)癥狀，20%左右的病鴨出現(xiàn)扭頸、振顫歪斜，在水中無目的游走或轉(zhuǎn)圈。

1.4 解剖病變

所有病鴨出現(xiàn)腦充血、出血，纖維素性心包炎，心包與心臟粘連，無法剝離。個別鴨心臟有白條狀壞死、質(zhì)脆。其他臟器無特殊病變，氣管、支氣管、肺臟、腸道均沒有出血病變，沒有肝周炎和氣囊炎。雛鴨大多數(shù)無明顯變化即死亡。

1.5 免疫用藥

有些鴨場在發(fā)病前曾使用病毒性肝炎活疫苗、禽流感H5N1滅活疫苗、鴨疫里默氏桿菌-大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗、鴨瘟疫苗、禽霍亂疫苗免疫仍然不能提供保護(hù)，利用金剛烷胺、撲熱息痛、慶大霉素、阿莫西林、環(huán)丙沙星、氟哌酸、復(fù)方新諾明治療效果

不佳。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 RT-PCR病毒基因檢測

隨機(jī)挑選3個不同區(qū)域的養(yǎng)鴨場采集病死鴨心臟、肺臟、肝臟、脾、胰腺、腦、血液、喉氣管和泄殖腔棉拭子，使用禽流感病毒、新城疫病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒以及I型鴨病毒性肝炎、禽呼腸孤病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒檢測，結(jié)果是所有發(fā)病場禽流感病毒陽性，新城疫病毒、I型病毒性肝炎、呼腸孤病毒均為陰性。

2.2 流感病毒分離和致病力測定

采用雞胚尿囊腔接種法分離到3株鴨源禽流感病毒（AIV）。致病性試驗(yàn)表明，3株流感病毒對雞表現(xiàn)為較低的致病力，被感染雞未現(xiàn)死亡（0/8）；對鴨表現(xiàn)為中低致病力，鴨致死率為12.5%（1/8）～37.5%（3/8）。

2.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定

無菌采集病死鴨腦和心血，取樣接種巧克力瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃燭缸培養(yǎng)24 h，可見到圓形、稍突起、表面光滑、透明，直徑約0.8～2.0 mm的奶油狀菌落。挑取可疑單個菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察呈陰性的短小桿菌，不運(yùn)動，無芽孢，單個或成雙存在，偶爾有長絲狀。瑞氏染色見兩極著色，成單成雙，偶爾成鏈排列的菌體，革蘭氏和瑞氏染色均符合鴨疫里默氏桿菌形態(tài)特征。挑取上述單個菌落，或取病死鴨腦和心血接種于麥康凱平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h均無細(xì)菌生長，排除大腸桿菌。

2.4 動物回歸試驗(yàn)

挑取經(jīng)純化后的鴨疫里默氏桿菌接種到肉湯培養(yǎng)基，37 ℃振蕩培養(yǎng)24 h，經(jīng)計數(shù)活菌含量約為2.5×109cfu/ml。取0.5 ml肌肉接種8只雛鴨，48 h后雛鴨全部死亡，解剖可見心包積液和心包炎。

2.5 藥敏試驗(yàn)

對分離到的3株鴨疫里默氏桿菌用Kirby-Baure法即紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，按CLSI-2006標(biāo)準(zhǔn)判定藥敏試驗(yàn)結(jié)果。試驗(yàn)顯示，3株鴨疫里默氏桿菌均對氟苯尼考、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢噻呋鈉、先鋒霉素V等5種抗生素高度敏感，對青霉素、阿莫西林、強(qiáng)力霉素、慶大霉素、卡那霉素、土霉素、四環(huán)素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氟哌酸、復(fù)方新諾明均有不同程度的耐藥性。

3 治療方案

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病變及實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，診斷為流感病毒與鴨漿膜炎混合感染。根據(jù)病毒毒力、細(xì)菌耐藥性指導(dǎo)用藥，采用抗病毒、抗細(xì)菌、提免疫、重消毒和淘汰的方法進(jìn)行綜合控制。（1）對鴨場進(jìn)行全面清洗，使用對流感和鴨疫里默氏桿菌作用強(qiáng)的百毒殺消毒。（2）果斷淘汰已出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、瀕死無治療價值的病鴨，所有病死鴨深埋無害化處理。（3）全群使用高效純中藥抗流感制劑、敏感藥物氟苯尼考、氨基電解多維混合拌料飼喂或飲水。（4）個別病情較重的鴨只，挑選出來分點(diǎn)肌肉注射禽流感多價高免卵黃抗體和頭孢噻呋鈉。使用以上方案5～7 d后，約70%的病鴨得到好轉(zhuǎn)，基本控制了疫情深度發(fā)展。

4 分析討論

鴨流感與鴨疫里默氏桿菌混合感染病例主要發(fā)生在靠近水源的鴨場，原因是廣西東部地區(qū)江河、池塘、水庫豐富，魚鴨立體養(yǎng)殖發(fā)展迅速，加上野鳥、候鳥遷徙棲息，大量禽鳥排泄物污染低洼、緩流的水質(zhì)，水體及養(yǎng)殖環(huán)境中富集殘留多種有害病原微生物。據(jù)報道，廣西各地外環(huán)境中各種亞型禽流感病毒總陽性率在19.05%～38.16%，污水的陽性率最高[6-7]。鴨疫里默氏桿菌是一種條件性、多宿主致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境和多種動物體內(nèi)，部分菌株在鴨體內(nèi)傳1～3代后可獲得毒力[8-9]。因此，必須要加強(qiáng)水體、養(yǎng)殖環(huán)境的全面消毒，構(gòu)建嚴(yán)格的生物安全措施才能防范疫病發(fā)生。

變異、毒力是禽流感病毒病原學(xué)研究中的重點(diǎn)，禽流感病毒（AIV）基因組含有8個RNA片段，可編碼11種病毒蛋白。囊膜上具有15～16種血凝素（HA）和9～10種神經(jīng)氨酸酶（NA），相互構(gòu)成若干不同血清亞型，亞型之間沒有交叉保護(hù)作用[10-11]。水禽作為AIV的原始貯存庫和傳染源，是AIV生態(tài)循環(huán)中重要一環(huán)，水禽分離物幾乎包括所有流感病毒血清亞型，其中以H3、H4、H5、H6、H9亞型較為常見，原先多為隱性感染和帶毒，如今發(fā)現(xiàn)AIV對水禽特別是導(dǎo)致鴨高死亡率[12-13]。本研究分離到的3株鴨源AIV對鴨有中低毒力，對雞無致死性，說明它們與H5、H7等高致病性毒株有所區(qū)別，是否是新的亞型值得進(jìn)一步鑒定。

不用地區(qū)的鴨疫里默氏桿菌菌株耐藥性有明顯不同[14]，本研究中廣西東部的3個菌株具有很廣的耐藥譜，對青霉素類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、喹諾酮類、磺胺類敏感性很低，僅對氟苯尼考和新生代頭孢類抗生素高度敏感。從致病性上來說，以往菌株常常侵害雛鴨，而且心包炎、肝周炎、氣囊炎常常同時出現(xiàn)，而本次分離的菌株在禽流感病毒協(xié)同作用下主要攻擊病鴨腦和心臟，大小鴨均發(fā)病，傳播非常迅速，表明共感染因子可以使當(dāng)前流行的鴨疫里默氏桿菌耐藥性、傳播力、組織嗜性發(fā)生新的改變，加劇疫病的復(fù)雜化。

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