熒光定量PCR 法與酶聯(lián)免疫吸附法在乙型肝炎病毒檢測及療效評價(jià)中的應(yīng)用價(jià)值探究

陳春妍

相關(guān)研究［1］表示， 全世界無癥狀乙型肝炎病毒攜帶者數(shù)量超過2 個(gè)億， 我國占其中的一半左右， 這其中存在肝損傷的乙型肝炎患者在3000 萬左右。乙型肝炎肝損傷是經(jīng)乙型肝炎病毒感染導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)的多種特殊免疫反應(yīng)， 使得肝細(xì)胞出現(xiàn)病理性免疫損傷。目前， 臨床上通常會根據(jù)乙型肝炎血清標(biāo)志物對乙型肝炎病毒感染進(jìn)行判斷， 但酶聯(lián)免疫吸附法作為一種定性的檢測方法難以定量分析乙型肝炎病毒在人體內(nèi)的含量， 難以對患者乙型肝炎病毒感染復(fù)制情況進(jìn)行有效判斷， 因此， 需要探索一種高效的檢測方式。本文一共選擇2017 年12 月～2018 年6 月在本院治療的60 例乙型肝炎病毒患者進(jìn)行研究， 探討了在乙型肝炎病毒檢測中應(yīng)用熒光定量PCR 法和酶聯(lián)免疫吸附法的價(jià)值， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料

選 擇2017 年12 月～2018 年6 月 在 本 院治療的60 例乙型肝炎病毒患者作為研究對象， 根據(jù)檢測方法不同分為對照組與觀察組， 各30 例。對照組患者中， 男16 例， 女14 例；年齡18～60 歲， 平均年齡(38.15±15.96)歲。觀察組患者中， 男17 例， 女13 例；年齡17～60 歲， 平均年齡(37.15±15.26)歲。兩組患者性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)， 具有可比性。

1. 2 方法

對照組應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行乙型肝炎病毒檢測， 選擇北京萬泰酶聯(lián)免疫吸附法配套試劑；由臨檢質(zhì)控中心提供質(zhì)控品。取所有受檢者的肘靜脈血， 在室溫下放置30 min 后， 采用3000 r/min 的速度對其行5 min 離心處理， 將血清分離后， 對乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物分別采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測。

觀察組應(yīng)用熒光定量PCR 法進(jìn)行乙型肝炎病毒檢測。DNA 提?。和瑯尤∷惺軝z者的肘靜脈血， 在室溫下放置30 min 后， 采用12000 r/min 的速度對其行10 min 離心處理，將血清分離后， 離心后再取出血清5 ml， 加入50 ml 的DNA提取液混勻， 并置入到100℃環(huán)境中10 min 后， 再行離心處理；最后將處理后的標(biāo)本放置在-20℃環(huán)境中存儲。PCR 擴(kuò)增：提取上述樣品2 μl 上清液， 并將其加入到PCR 反應(yīng)管中， 以8000 r/min 的速度離心1 min， 并置入到儀器樣品槽中；在93℃中放置2 min、55℃中放置45 s、65℃中放置1 min， 共循環(huán)10 次；再93℃中30 s、55℃中45 s， 共循環(huán)30 次［2］。

1. 3 觀察指標(biāo)

對比兩組各項(xiàng)乙型肝炎病毒檢測指標(biāo)陽性率， 指 標(biāo) 包 括HBcAb、HBeAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg。嚴(yán)格按照試劑說明書和《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第4 版)》進(jìn)行操作。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示， 采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組患者HBcAb、HBeAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg檢測陽性率分別為76.7%、86.7%、83.3%、80.0%、83.3%， 均明顯高于對照組的50.0%、63.3%、56.7%、53.3%、60.0%， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組各項(xiàng)乙型肝炎病毒檢測指標(biāo)陽性情況比較［n(%)］

3 討論

乙型肝炎的主要發(fā)病人群為小兒及青壯年， 疾病容易反復(fù)發(fā)作， 且治愈難度較大， 對家庭甚至整個(gè)社會都有非常明顯的危害。而乙型肝炎病毒屬于正嗜肝DNA 病毒屬， 機(jī)體受到乙型肝炎病毒感染后不僅會損傷肝細(xì)胞， 而且會引起免疫功能紊亂， 繼而進(jìn)一步導(dǎo)致肝細(xì)胞受損［3］。乙型肝炎病毒感染屬于一個(gè)全球性問題， 我國具有較高乙型肝炎感染率，每年有許多患者死于原發(fā)性肝細(xì)胞癌、肝硬化或者肝衰竭。現(xiàn)階段， 臨床上通常會采用乙型肝炎病毒免疫標(biāo)志物對乙型肝炎感染進(jìn)行診斷， 以此來對乙型肝炎病毒的免疫反應(yīng)強(qiáng)度進(jìn)行有效反映。酶聯(lián)免疫吸附法屬于一種傳統(tǒng)的檢測方式，操作簡單， 在大批乙型肝炎病毒感染樣本檢測中適用， 可以將其作為依據(jù)， 用來判定患者是否感染乙型肝炎病毒以及感染的具體階段［4，5］。但是采用該檢測方式進(jìn)行測定的過程中，也有諸多局限性存在， 檢測準(zhǔn)確性會受到反應(yīng)溫度、試劑盒質(zhì)量、外源性物質(zhì)以及內(nèi)源性物質(zhì)等諸多因素的影響， 難以準(zhǔn)確反映患者體內(nèi)是否確實(shí)存在病毒感染。

而熒光定量PCR 法檢測是當(dāng)前臨床較為常用的一種基因檢驗(yàn)技術(shù)， 此種技術(shù)主要是將熒光標(biāo)記探針加入到反應(yīng)體系當(dāng)中， 并在檢驗(yàn)時(shí)用Taq 酶發(fā)揮其外切核酸酶的活性進(jìn)而釋放熒光信號， 同時(shí)， 在其擴(kuò)增的過程中， 模板每進(jìn)行一次復(fù)制便釋放一個(gè)熒光信號， 并根據(jù)釋放的熒光信號強(qiáng)弱來定量模板［6］。熒光定量PCR 法檢測對于提高胸腹水、尿液等樣品中的分枝桿菌檢出率具有較高的應(yīng)用價(jià)值；熒光定量PCR 法檢測屬于封閉性操作， 能夠大大減少樣品污染情況， 進(jìn)而提升檢驗(yàn)的質(zhì)量；熒光定量PCR 法檢測技術(shù)能夠通過熒光信號來定量擴(kuò)增產(chǎn)物。此次研究中顯示， 觀察組患者HBcAb、HBeAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg 檢測陽性率分別為76.7%、86.7%、83.3%、80.0%、83.3%， 均明顯高于對照組的50.0%、63.3%、56.7%、53.3%、60.0%， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

綜上所述， 在乙型肝炎病毒檢測中應(yīng)用熒光定量PCR 法和酶聯(lián)免疫吸附法時(shí)， 熒光定量PCR 法檢測的效果較好， 若用于乙型肝炎病毒感染者傳染性大小的判斷和抗病毒藥物臨床療效的評價(jià)， 可獲得較好的效果。