云南地道藥材滇重樓的研究進(jìn)展

趙東興等

摘 要 滇重樓是我國(guó)西南地區(qū)的地道藥材。綜述近年來滇重樓的研究現(xiàn)狀，主要包括化學(xué)成分和藥理研究、栽培技術(shù)、新品種選育和開發(fā)利用方面的工作；同時(shí)，對(duì)滇重樓的研究進(jìn)行展望，為滇重樓的研究提供參考。

關(guān)鍵詞 滇重樓 ；研究現(xiàn)狀 ；展望

分類號(hào) S567.5+3

Abstract Paris polyphylla var. yunnanensis is traditionally used as a precious medicine. In the present paper， recent advances in its chemical constitutes， pharmacological effect， cultivation techniques， breed on new variety and utilization were summarized， and some research of this important plant were also prospected. The paper would help in researching of this plant.

Keywords Paris polyphylla var. yunnanensis ； genuine medicinal plant ； research situation ； prospects

重樓（Paris polyphylla）是一味傳統(tǒng)的珍貴中藥材，以“蚤休”之名始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，謂：“蚤休味苦微寒，主驚癇，搖頭弄舌，熱氣在腹中，癲疾，癰瘡，陰蝕，下三蟲，去蛇毒，一名蚩休，生山谷?！?民族藥學(xué)典籍《滇南本草》中以重樓作為其正式藥名，是我國(guó)傳統(tǒng)藥用植物[1]。

滇重樓[Paris polyphylla var. yunnanensis（Fr.） Hand. Mass.]為延齡草科（Trilliaceae）重樓屬（Paris）植物，是一種多年生草本植物，主要分布于我國(guó)云南、四川、貴州等地[2]，其生境的年平均氣溫為12.6℃左右，雨量充沛，年平均降雨量826～900 mm，氣候涼爽，土壤酸性，腐殖層豐富[3]。滇重樓中含有豐富的植物甾醇、甾體皂苷、黃酮等藥用成分，是名貴中藥云南白藥、宮血寧、季德勝蛇、熱毒清等的主要組成成分?！吨袊?guó)藥典》將其規(guī)定為中藥重樓的基源植物（Origin plants），臨床上用于止血、抗腫瘤、腮腺炎、扁桃腺炎、喉頭炎及上呼吸道感染，為國(guó)家基本藥物[4]。

目前，滇重樓的消耗主要依靠野生重樓，而滇重樓的自然繁殖率很低，周期長(zhǎng)，且隨著價(jià)格的上漲導(dǎo)致采挖速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了自然生長(zhǎng)速度，使滇重樓資源已面臨稀缺狀態(tài)，急需大規(guī)模的人工馴化栽培。本文對(duì)近年滇重樓化學(xué)成分、藥理研究、栽培技術(shù)、新品種選育和開發(fā)利用現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，并對(duì)滇重樓的研究進(jìn)行展望。

1 化學(xué)成分研究

重樓屬植物藥用價(jià)值突出。20世紀(jì)80年代以來，眾多學(xué)者對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行大量研究，現(xiàn)己從該屬植物中分離鑒定了50余種化合物，主要有C27甾體皂苷、C2l孕甾烷苷、脂肪酸酯、甾醇及其苷、黃酮苷、β-蛻皮激素及多糖，其中主要成分為甾體皂苷，約占總化合物的80%。

滇重樓作為中藥重樓的基源植物，學(xué)者對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行了大量的研究。周立剛等人[5]首次從云南重樓根莖中分離得到了兩個(gè)低聚糖HS（heptasaccaride）和OS（octasaccharide），并發(fā)現(xiàn)兩者低濃度時(shí)有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的功能，可以促進(jìn)重樓根的形成，而且對(duì)珠子參（Panaxjaponicus var. major）的生長(zhǎng)和皂苷的形成也有促進(jìn)作用。趙玉[6]從滇重樓中分離得到了24個(gè)甾體皂苷單體化合物，其中6個(gè)新化合物，3個(gè)為首次從滇重樓該種植物中分離得到的甾體皂苷。王羽[7-8]從滇重樓的醋酸乙酯層中分離鑒定了7個(gè)化合物，并首次從滇重樓根莖中分離得到糖偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1→4）-[a-L-吡喃鼠李糖基（1→2）]-β-D-葡萄苷，其對(duì)小鼠肺腺癌細(xì)胞LA795有一定的抑制作用。研究表明滇重樓的主要活性成分為甾體皂苷[9]，苷元主要為異螺甾烷醇類的薯蕷皂苷元和偏諾皂苷元，而且不同采收期和不同生長(zhǎng)年限的滇重樓中薯蕷皂苷元的含量不同[10-11]，其中薯蕷皂苷元在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期含量最低，授粉期含量最高，果熟期與衰老期含量次之；該成分在3、4年生滇重樓中含量較低，5、6年生滇重樓中含量明顯升高，6年生含量略低于5年生含量，7年生滇重樓中含量驟升，且升幅最大。

此外，微量元素也是中藥的有效成分，研究表明，滇重樓中還含有豐富的脂肪酸和微量元素Ca、Mg、Fe等[12-14]。

2 藥理研究

2.1 抗腫瘤研究

劉翊等[15]對(duì)滇重樓乙酸乙酯和正丁醇的萃取物進(jìn)行分離純化，得到7個(gè)甾體皂苷類化合物，發(fā)現(xiàn)7個(gè)單體化合物對(duì)小鼠肺腺癌細(xì)胞蘊(yùn)LA795的生長(zhǎng)均表現(xiàn)出抑制作用，且末端鼠李糖連接在葡萄糖的2位時(shí)，細(xì)胞毒活性明顯強(qiáng)于連在4位上。此外，在糖鏈數(shù)目相同的情況下，含有鼠李糖較多的皂苷細(xì)胞毒活性更強(qiáng)一些。王羽[7]從滇重樓提取物中分離得到2個(gè)新化合物：Parispolyside F（1）和Parispolyisde G（2），藥理研究發(fā)現(xiàn)這兩種新化合物對(duì)LA795有較好的抑制作用。顏璐璐等[16]采用滇重樓皂苷對(duì)小鼠肺腺癌細(xì)胞株LA795、人結(jié)腸癌細(xì)胞株CaCo-2、人肺癌細(xì)胞株A549、人肝癌細(xì)胞株BEL7402、HepG2、人宮頸癌細(xì)胞株Hela、人急性髓性白血病細(xì)胞株等10種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒研究，結(jié)果顯示，滇重樓皂苷體對(duì)10種不同類型的腫瘤細(xì)胞均有較為明顯的抑制增殖效應(yīng)，其中對(duì)LA795、CaCo-2、A549、Hela細(xì)胞抑制效果最為顯著。Zhang Y等[17]從滇重樓中提取出兩種新的呋喃甾醇皂苷、一種新的螺旋甾烷醇皂苷及18種已知皂苷，并對(duì)其對(duì)人早幼粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞HL-60細(xì)胞毒性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)苷元的螺旋甾原烷結(jié)構(gòu)及連接在C-3位的糖鏈末端的1-2個(gè)a-L-吡喃鼠李糖對(duì)其高細(xì)胞毒活性有重要作用，而苷元的C-12或C-17位的羥基置換會(huì)降低苷元的細(xì)胞毒活性。endprint

另外，從滇重樓莖葉中提取的的滇重樓莖葉皂甙Ⅱ（DRGⅡ）可誘導(dǎo)白血病細(xì)胞K562、HL60凋亡[18]；莖葉總皂甙可以抑制髓系白血病袓細(xì)胞、淋巴細(xì)胞白血病祖細(xì)胞的增殖[19]。

2.2 抗菌、抗病毒研究

王強(qiáng)等[20]用試管法測(cè)得滇重樓溶液最小抑菌濃度（MIC，mg/mL），對(duì)宋內(nèi)氏痢疾桿菌為25.00，粘質(zhì)沙雷氏菌為50.00，大腸桿菌為25.00，金黃色葡萄球菌（耐藥）50.00，金黃色葡萄球菌（敏感）25.00。李靜等[21]對(duì)滇重樓內(nèi)生菌進(jìn)行分離并對(duì)其抗菌活性進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)滇重樓內(nèi)生菌菌液對(duì)大腸桿菌和溶血葡萄球菌抑菌活性具有較好的抗菌活性；大約60%滇重樓內(nèi)生菌對(duì)金黃色葡萄球菌、傷寒沙門菌、普通變形桿菌、痢疾桿菌、大腸桿菌及白色念珠菌生長(zhǎng)有抑制作用，其中LRBll抑菌效果較明顯[22]。李艷紅[23]研究了滇重樓對(duì)口腔病原菌的生長(zhǎng)影響，結(jié)果表明，滇重樓對(duì)致齲菌和牙髓根尖周炎、牙周病的常見病原菌的生長(zhǎng)均有抑制作用， MIC值均為20 mg/mL。另外，滇重樓的乙醇提取物對(duì)痤瘡的主要致病相關(guān)菌（痤瘡丙酸桿菌、表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌）有較好的抑制作用，而且在已知的能抑制痤瘡丙酸桿菌的中草藥中，滇重樓乙醇提取物的抑菌作用居于前列[24]。

3 滇重樓栽培技術(shù)研究

3.1 滇重樓種苗繁育

3.1.1 滇重樓種子繁殖

滇重樓種子產(chǎn)量較大，通過種子繁殖是短期內(nèi)獲得大量種苗的有效方法。但滇重樓種子有較長(zhǎng)的休眠期，在自然條件下，需要兩冬一夏才能萌發(fā)，15個(gè)月的出苗率僅為46.2%，大量的種子在漫長(zhǎng)的休眠期喪失了生命力[25]。孟繁蘊(yùn)等[26-27]將滇重樓種子的二次發(fā)育歸屬為形態(tài)-生理后熟休眠類型，認(rèn)為溫度和萌發(fā)抑制物等都是影響其休眠的關(guān)鍵因素。滇重樓果實(shí)成熟時(shí)，里面種子的種胚生長(zhǎng)停留在球形期[28-29]，種子從采集當(dāng)年的9～12月到第二年冬季之前完成形態(tài)成熟及各器官的發(fā)育，大田表現(xiàn)為種子只發(fā)根不出苗，且種子成熟與生長(zhǎng)環(huán)境無關(guān)[30]，發(fā)育完全的胚芽需經(jīng)過第二年冬季低溫打破胚軸的休眠到第三年春季才出苗，且出苗率很低。陳翠等[31]研究表明，重樓種子胚根的最適萌發(fā)溫度在18～20℃，高溫或低溫都會(huì)不同程度的抑制重樓種子萌發(fā)和胚根生長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)通過變溫處理、光照等手段可以縮短種子的休眠期[32]，滇重樓種子在結(jié)果4℃低溫層積4～5個(gè)月、紅外光照射30 min、二次變溫（4℃～40℃～20℃）處理、混合液（19 mmol/L KNO3+800 mg/LGA3）保濕7天后，能使種子的休眠期縮短；另?yè)?jù)報(bào)道[33]經(jīng)過15～25℃的變溫培養(yǎng)能促進(jìn)種子萌發(fā)，種子萌發(fā)率高達(dá)55.3%，部分種胚能突破種皮生長(zhǎng)發(fā)育成子葉；750～1500 lx弱光照培養(yǎng)適宜種子萌發(fā)，種萌發(fā)率達(dá)58.3%以上。另有文獻(xiàn)表明，通過超聲處理能增強(qiáng)種子的活力，加快種子萌發(fā)速度[34]。

此外，種皮及低溫對(duì)滇重樓種子萌發(fā)及胚根生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，在滇重樓種子育苗過程中，要選擇成熟果實(shí)的種子，去除種皮和利用赤霉素赤霉素處理均可提高滇重樓種子發(fā)根率和發(fā)根速度[35]。

3.1.2 根莖切塊繁殖

根莖切塊繁殖分為帶頂芽切塊和不帶頂芽切塊兩種方法，主要以帶頂芽切塊繁殖為主，生產(chǎn)上往往把滇重樓的根狀莖橫切成2～3 cm的小段直接作為種莖栽培，切塊繁殖3年后即可采收根莖入藥，縮短滇重樓生物生長(zhǎng)周期，增產(chǎn)效果明顯，切割傷口用草木灰處理，可以有效防止切塊表面干燥，加速愈合[36]；生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑能促進(jìn)滇重樓根狀莖第二橫切段芽的發(fā)生，其中ABT不僅能促進(jìn)不同切段不定根的產(chǎn)生，而且對(duì)潛伏芽的萌動(dòng)有顯著促進(jìn)作用，出苗率為98%，還能提高不帶頂芽切塊繁殖繁殖系數(shù)[37]。李紹平等[38]比較了帶頂芽切塊繁殖和不帶頂芽切塊繁殖的生長(zhǎng)情況和增產(chǎn)效果，發(fā)現(xiàn)帶頂芽切段能于種植的第2年成苗，并開花、結(jié)實(shí)，其地上莖一般為單軸，出苗率可達(dá)100%；不帶頂芽的切段于種植的第3年4月份才萌發(fā)出土形成苗，出苗率達(dá)92%左右。經(jīng)3年種植后，頂芽切段根莖鮮重達(dá)42.3 g，年平均增重12.03 g；無頂芽切段根莖鮮重達(dá)8.20 g，年平均增重2.73 g；種子繁殖根莖鮮重僅2.20 g，年平均增重僅為0.73 g。

根莖切塊繁殖是目前最為成功的繁殖方式，但帶來的問題是根莖是其藥用部位，根莖切塊生產(chǎn)種苗耗種量大，推高了生產(chǎn)成本[38]，同時(shí)存在種苗退化，切面大易感染病害等問題。

3.1.3 組織培養(yǎng)繁殖

組織培養(yǎng)是目前人們最為關(guān)注的解決重樓無性快速繁殖的途徑之一，但利用組織培養(yǎng)來繁殖滇重樓的難度很大，文獻(xiàn)報(bào)道中只有芽段可成功誘導(dǎo)培養(yǎng)出植株，根莖、子房雖可誘導(dǎo)出愈傷組織，但愈傷組織的增殖受到限制，其他重樓外植體（根、葉片等）的組培技術(shù)尚沒有成功的報(bào)道。

楊麗云[39]通過將云南重樓的芽切塊接種到培養(yǎng)基MS+6-BA 2 mg/L（單位下同）+NAA 0.1上，40 d后形成質(zhì)地較堅(jiān)硬的愈傷組織，愈傷組織接種到愈傷組織和分化培養(yǎng)基MS+6-BA 2+NAA 0.5+KT 0.5 MS+6-BA 2+NAA 0.5+KT 0.5上，約450 d可長(zhǎng)成幼苗，愈傷組織的增殖周期為210～240 d ，每個(gè)周期可繁殖不定芽1～2 倍，將分化的芽接種到生根培養(yǎng)基1/2 MS+NAA 0.5+IAA 0.5上培養(yǎng)60 d左右，生根率為76.3%。熊海浪[32]選取胚根長(zhǎng)至2 cm以上的種子，在22℃、每天光照12 h （1 000 lx）的條件下，將去除胚乳的幼芽接種在0.5 mg 6-BA和0.5 mg IAA的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d后即可長(zhǎng)成具有單葉的完整植株。

3.2 滇重樓栽培技術(shù)研究

隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，市場(chǎng)對(duì)滇重樓的需求每年以20%的幅度遞增，因此，進(jìn)行滇重樓的人工高產(chǎn)、高效規(guī)范化栽培已迫在眉睫。人工栽培滇重樓的主要步驟包括選擇適合的種植地、搭建遮陰蓬、土地處理與整理、苗的繁育與移栽、栽后管理（施肥、澆水、病蟲害防治、采收）等[40-42]。endprint

研究表明，在1 700～3 100 m海拔范圍內(nèi)，云南重樓的產(chǎn)量與海拔高度沒有相關(guān)關(guān)系，但與土壤的類型、肥力和耕作水平有關(guān)系，在經(jīng)常翻用、有機(jī)質(zhì)含量或速效肥力較高的壤土中生長(zhǎng)可獲得較高的產(chǎn)量[43]；若種植在闊葉林下，則需選擇潮濕且肥沃疏松的砂壤土和壤土、遮蔭度為60%～70%[44]。另外，人工種植滇重樓時(shí)，種苗大小和種植密度都會(huì)影響滇重樓的生長(zhǎng)速度和產(chǎn)量，種苗根狀莖越大，腐爛死亡的可能性變小，出苗率和存活率越高[45]；種植密度越小，栽培3年后存活率越高，地下部分根狀莖生長(zhǎng)速度快，但因用種降低，產(chǎn)量不會(huì)隨著密度的減少而增加。綜合考慮塊莖的增重速度，產(chǎn)量和種植成本，種苗的根莖以10 g左右為宜，最適宜的種植密度株行距為 10 cm×20 cm[46]。

滇重樓作為一種重要的藥用植物，在進(jìn)行高產(chǎn)栽培的同時(shí)，必須保證其有效成分的含量。陳翠的研究表明[43]，土壤類型和肥力會(huì)影響滇重樓的產(chǎn)量，但對(duì)其品質(zhì)無影響；王印等[47-48]認(rèn)為，土壤pH和土壤中主要養(yǎng)分對(duì)滇重樓有效成分含量有較大的影響，其中根莖總皂甙含量隨土壤pH升高而增加；土壤全K和速效K有利于滇重樓根莖總皂甙和多糖的合成與積累，即土壤全K和速效K含量與根莖中總皂甙含量呈極顯著正相關(guān)，與根莖中多糖含量呈顯著正相關(guān)。楊永紅[49]的研究也證明在一定范圍內(nèi)土壤有機(jī)質(zhì)、速效磷、速效鉀含量和pH值越高，偏諾類皂苷Ⅶ、偏諾類皂苷H、薯蕷類皂苷Ⅰ和薯蕷類皂苷Ⅱ含量就越高。另?yè)?jù)報(bào)道，在滇重樓栽培中，施用微量元素Ca、Mg、Mo、Zn也會(huì)影響根莖中有效成分的含量[50-53]。

4 優(yōu)良品種選育研究

對(duì)滇重樓品種選育研究報(bào)道較少，僅見楊麗英課題組[54-55]通過對(duì)收集的野生滇重樓群體品種的一致性、特異性、穩(wěn)定性和適應(yīng)性進(jìn)行測(cè)試，分別歷時(shí)8年單株混合選擇和6年群體混合選擇，選育出有效成分含量高、產(chǎn)量高、抗病性強(qiáng)的優(yōu)良品種—“滇重樓1號(hào)”和“滇重樓2號(hào)”，并通過云南省新品種登記。其中“滇重樓1號(hào)” 莖桿為紫色，單莖，其根莖重樓皂苷I和重樓皂苷II總量達(dá)（1.8±0.13）%，6年生以上產(chǎn)量達(dá)2 700～3 300 kg/hm2（干品），抗病性強(qiáng)，尤其抗葉斑??；“滇重樓2號(hào)”莖桿為淡紫色，多莖，莖數(shù)為“滇重樓1號(hào)”的5倍多，利于無性擴(kuò)繁，根莖有效成分重樓皂苷I和II總量為（1.43±0.23）%，高于藥典達(dá)78.8%，6年生產(chǎn)量高達(dá)4 500～6 000 kg/hm2（干品），是“滇重樓1號(hào)”產(chǎn)量的2倍，對(duì)葉斑病有良好抗性。

5 開發(fā)利用現(xiàn)狀

滇重樓中含有豐富的植物甾醇、甾體皂苷、黃酮等藥用成分，是名貴中藥云南白藥、宮血寧、季德勝蛇、熱毒清等的主要組成成分[4]，臨床上用于止血、抗腫瘤、腮腺炎、扁桃腺炎、喉頭炎及上呼吸道感染，但這些研究都是圍繞著滇重樓傳統(tǒng)用藥部位根莖展開，由于其根莖生長(zhǎng)速度極其緩慢，使其資源更為緊缺。如果能對(duì)滇重樓地上部分進(jìn)行開發(fā)利用，將增加滇重樓藥用資源的提供，并能提高藥農(nóng)的經(jīng)濟(jì)收入。

研究發(fā)現(xiàn)滇重樓的地上部分含有具有止血活性的成分[56]，還含有不同于根莖的成分[57]。卜偉等[58]發(fā)現(xiàn)，莖葉、果實(shí)、根莖的總皂苷鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)，只是莖葉和果實(shí)的總皂苷的止血和抗炎作用均弱于根莖。曾為民[59]的研究表明，地上莖葉其總皂苷含量與地下根莖相當(dāng)，其總皂苷主要成分是重樓皂苷Ⅱ和重樓皂苷Ⅶ，且總皂苷含量達(dá)到2010版藥典規(guī)定[60]的要求；尤其果皮中重樓皂苷的含量較高。另外，從滇重樓莖葉中提取的的滇重樓莖葉皂甙Ⅱ（DRGⅡ）可誘導(dǎo)白血病細(xì)胞K562、HL60凋亡[18]；莖葉總皂甙可以抑制髓系白血病袓細(xì)胞、淋巴細(xì)胞白血病祖細(xì)胞的增殖[19]。

由于滇重樓莖葉總皂苷含量達(dá)到了藥典中規(guī)定的“滇重樓”入藥要求，其藥用價(jià)值與地下根莖相當(dāng)，云南省現(xiàn)有種植面積約330 hm2，每年可采集地上莖葉超過300 t，若對(duì)莖葉進(jìn)行開發(fā)利用，可顯著提高種植效益，促進(jìn)產(chǎn)業(yè)發(fā)展[59]。

6 展望

（1）滇重樓作為許多中藥的重要原料，隨著市場(chǎng)價(jià)格的迅速增長(zhǎng)，人們?cè)谝巴馑烈獾芈訆Z性采挖，加之生態(tài)環(huán)境的人為破壞，急需大規(guī)模的人工引種栽培，打破種子的休眠期，加強(qiáng)組織培養(yǎng)技術(shù)研究，縮短滇重樓的栽培周期；加大對(duì)新品種選育研究，選育出產(chǎn)量高、有效成分含量高、抗病強(qiáng)的優(yōu)良品種。

（2）滇重樓中含有豐富的藥用成分，但臨床上多數(shù)是以復(fù)方入藥，而符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的藥物較少。因此要加強(qiáng)對(duì)化學(xué)成分研究和對(duì)有效成分的深入藥理研究，采用現(xiàn)代分子藥理學(xué)及分子生物學(xué)的知識(shí)和方法，提取篩選其有效成分；依據(jù)復(fù)方的組方拆方理論，研制效果確切、不良反應(yīng)小，能廣泛應(yīng)用于臨床的新藥。

（3）目前滇重樓的入藥部位僅為根莖，但野生滇重樓的生長(zhǎng)期為10年，人工栽培也需要6～8年，使其資源更為緊缺，而莖葉生長(zhǎng)快，資源豐富，總皂苷含量也能達(dá)到藥典的要求，還含有根莖中沒有的特殊成分。因此，應(yīng)改變傳統(tǒng)用藥習(xí)慣，對(duì)莖葉進(jìn)行開發(fā)利用，可顯著提高種植效益，緩解資源壓力。

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