防治煙草靶斑病的復(fù)配藥劑配篩選及田問藥效試驗(yàn)

劉斯泓 紀(jì)明山

摘要：對(duì)從遼寧省鐵嶺市煙葉產(chǎn)區(qū)分離出來的煙草靶斑病菌進(jìn)行室內(nèi)病菌離體試驗(yàn)，采用生長速率法從10種待選原藥中選出2種較優(yōu)試劑進(jìn)行復(fù)配試驗(yàn)，并對(duì)復(fù)配藥劑進(jìn)行水分散粒劑劑型配方篩選，進(jìn)而確定最優(yōu)配比。結(jié)果表明，在10種待選原藥中，惡霉靈、腐霉利的EC50值分別為0.1266、0.1338 mg/L，防治效果明顯優(yōu)于其他原藥；腐霉利和惡霉靈按照4 ∶6比例復(fù)配后增效效果最明顯，增效比為4.364 1；對(duì)復(fù)配配方進(jìn)行篩選優(yōu)化，得出最優(yōu)配方：潤濕劑為十二烷基硫酸鈉（3%）、十二烷基苯磺酸鈉（3%），分散劑為聚乙二醇（3%）、木質(zhì)素磺酸鈉（3%），崩解劑為硫酸銨（5%），載體為硅藻土（補(bǔ)足至100%）；田間藥效防治試驗(yàn)表明，50%腐霉利·惡霉靈800倍液防治效果最好，相對(duì)防效達(dá)到60.03%，可相對(duì)控制該病情的進(jìn)一步發(fā)展。

關(guān)鍵詞：煙草靶斑病；藥劑篩選；復(fù)配；水分散粒劑；藥效

中圖分類號(hào)： S482.2+99；S435.72文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）06-0140-03

收稿日期：2013-10-15

作者簡介：劉斯泓（1989—），女，遼寧鐵嶺人，碩士研究生，從事農(nóng)藥毒理學(xué)研究。E-mail：liusihong1989@126.com。

通信作者：紀(jì)明山，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事生物農(nóng)藥及農(nóng)藥毒理學(xué)研究。E-mail：jimingshan@163.com。煙草靶斑病是我國近年來新出現(xiàn)的一種煙草葉部病害，該病已持續(xù)幾年在遼寧省鐵嶺市煙區(qū)發(fā)生，并有逐年加重趨勢。該病害以侵染葉片為主，也可危害煙株莖部，在苗期到大田成熟期均可發(fā)生，且有擴(kuò)散迅速、連片發(fā)生的特點(diǎn)，危害較為嚴(yán)重，能夠使煙葉質(zhì)量和產(chǎn)量均大幅度降低。煙草靶斑病菌不僅能夠侵染煙草，還可對(duì)番茄、茄子、甜菜等作物造成危害，已成為當(dāng)前阻礙煙草等作物生產(chǎn)的重大問題之一。復(fù)配殺菌劑在作物病害防治中占有舉足輕重的地位，復(fù)配殺菌劑的合理應(yīng)用，不僅可以達(dá)到比單一殺菌劑更有效的防治效果，還可以減少病害造成的產(chǎn)量損失。本研究通過對(duì)防治煙草靶斑病的殺菌劑進(jìn)行藥劑篩選及復(fù)配，并對(duì)其進(jìn)行水分散粒劑的配方篩選，得出防治煙草靶斑病菌的復(fù)配藥劑，以期對(duì)煙草種植及煙葉生產(chǎn)提供指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1供試材料

煙草靶斑病病菌由沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草研究所提供。

1.2藥劑

原藥：惡霉靈、腐霉利、多菌靈、三唑酮、百菌清、烯唑醇、甲基硫菌靈、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、代森錳鋅。潤濕劑：十二烷基硫酸鈉（山東省濟(jì)南飛銘化工有限公司）、十二烷基苯磺酸鈉（天津市巴斯夫化工有限公司）、2-萘磺酸甲醛聚合物鈉鹽（河南省安陽市雙環(huán)助劑有限責(zé)任公司）。分散劑：聚乙烯醇（上海光鏵科技有限公司）、聚乙二醇（天津市西爾斯化工有限公司）、木質(zhì)素磺酸鈉（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）。崩解劑：硫酸銨（深圳市華昌化工有限公司）、硫酸鈉（江蘇省無錫市晶科化工有限公司）、氯化鈣（河北省唐山潔友精細(xì)生化有限公司）。載體：硅藻土（廣東省廣州思鉑化工有限公司）、高嶺土（上海創(chuàng)宇化工有限公司）、白炭黑（江蘇省南通綠葉化工助劑有限公司）。

1.3室內(nèi)病菌離體試驗(yàn)

1.3.1單一藥劑篩選采用生長抑制法篩選單一藥劑。取每種待測原藥粉劑1 g，分別配成濃度為1 g/L的單一藥劑，分別稀釋成600、700、800、900、1 000倍液，形成濃度分別為1.67、1.43、1.25、1.11、1.00 mg/L的藥液，制成含藥平板，每個(gè)處理3次重復(fù)[1]。以加入等體積無菌水的PDA平板為對(duì)照，取直徑為5 mm的菌絲塊，處理過的培養(yǎng)皿置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2～3 d后取出用十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算各處理平均值，進(jìn)而計(jì)算出菌絲生長抑制率、毒力回歸方程、抑制中濃度（EC50值）及決定系數(shù)r2[2]。

菌絲生長抑制率=（對(duì)照菌落直徑-5 mm）-（處理菌落直徑-5 mm）對(duì)照菌落直徑-5 mm×100%

1.3.2復(fù)配藥劑篩選 將單劑篩選中選出的2種效果最佳的原藥進(jìn)行復(fù)配試驗(yàn)，分別按照1 ∶9、2 ∶8、3 ∶7、4 ∶6、5 ∶5、6 ∶4、7 ∶3、8 ∶2、9 ∶1比例開展上述試驗(yàn)，計(jì)算增效系數(shù)（SR），進(jìn)而確定最佳復(fù)配配比[3]。

EC50（理論）=（A+B）/[A/EC50（A）+B/EC50（B）]

SR=EC50（理論）/EC50（實(shí)際）

式中：A、B分別代表復(fù)配藥劑中2種有效成分。當(dāng)SR<0.5 時(shí)，表示拮抗作用；當(dāng)0.5≤SR≤1.5 時(shí)，表示相加作用；當(dāng) SR>1.5 時(shí)，表示增效作用[4]。

1.4配方篩選及各項(xiàng)指標(biāo)分析方法

1.4.1配方篩選方法采用擠壓造粒法制成水分散粒劑，按照潤濕劑、分散劑、載體、崩解劑的順序，通過組合篩選法依次篩選出復(fù)配藥劑的最佳助劑。初始試驗(yàn)選用硅藻土為載體，以懸浮率為第一指標(biāo)，最后通過正交試驗(yàn)確定復(fù)配藥劑的助劑配比。

1.4.2潤濕性的測定采用刻度量筒法。稱取1 g樣品快速倒入盛有25 ℃、500 mL標(biāo)準(zhǔn)硬水的500 mL量筒中，立刻計(jì)時(shí)，記錄99%樣品沉入筒底的時(shí)間，小于1 min為合格。

1.4.3分散性的測定采用量筒混合法。稱取2 g樣品加入盛有98 mL水的100 mL量筒中，來回顛倒10次，每次2 s，靜置1 h后目測其分散性。再顛倒10次，使其完全再分散，靜置1 d后顛倒量筒，記錄使沉積物再分散而顛倒的次數(shù)，低于10次為合格。

1.4.4崩解性的測定以樣品顆粒在水中全部崩解的時(shí)間進(jìn)行評(píng)價(jià)。將0.5 g樣品顆粒加入盛有25 ℃、90 mL蒸餾水的100 mL具塞量筒中，塞緊筒口，夾住量筒中部，以8 r/min速度繞中心旋轉(zhuǎn)，直到樣品在水中全部崩解，一般要求崩解時(shí)間小于3 min[5]。

1.4.5懸浮率的測定按照GB/T 14825《農(nóng)藥懸浮率測定方法》測定。

1.5田間藥效防治試驗(yàn)

田間藥效防治試驗(yàn)在鐵嶺市昌圖縣雙廟子鎮(zhèn)煙葉種植產(chǎn)區(qū)進(jìn)行，設(shè)置50%腐霉利·惡霉靈水分散粒劑600、800、1 000 倍液，腐霉利800倍液，惡霉靈800倍液及清水對(duì)照，共計(jì)6個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)。株距50 cm，每壟20株煙株，壟寬1.2 m，共選擇5株，每小區(qū)面積60 m2。施藥前進(jìn)行病情調(diào)查，并于首次和第2次施藥7 d后調(diào)查病情，計(jì)算病情指數(shù)，根據(jù)病情指數(shù)增長率計(jì)算相對(duì)防效[6]。煙草靶斑病病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：無病斑；1級(jí)：病斑占整個(gè)葉片面積的1%以下；3級(jí)：病斑占整個(gè)葉片面積的10%以下；5級(jí)：病斑占整個(gè)葉片面積的30%以下；7級(jí)：病斑占整個(gè)葉片面積的50%以下；9級(jí)：病斑占整個(gè)葉片面積的50%及以上[7]。

病情指數(shù)=∑（各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)病級(jí)值）調(diào)查總?cè)~片數(shù)×最高級(jí)值×100

病情指數(shù)增長率=施藥后病情指數(shù)-施藥前病情指數(shù)施藥前病情指數(shù)×100%

相對(duì)防效=對(duì)照病情指數(shù)增長率-處理病情指數(shù)增長率對(duì)照病情指數(shù)增長率×100%

2結(jié)果與分析

2.1藥劑篩選結(jié)果

2.1.1單一藥劑篩選由表1可見，惡霉靈的EC50值為0126 6 mg/L，在10種供試藥劑中其EC50值最小，說明其對(duì)煙草靶斑病菌的抑制效果最好；腐霉利的EC50值也很小，為0133 8 mg/L；苯醚甲環(huán)唑、代森錳鋅的EC50值相對(duì)較大，說明這2種藥劑抑菌效果較差。由此可見，惡霉靈、腐霉利對(duì)煙草靶斑病菌具有較好的防治效果，可用于復(fù)配藥劑。

表110種殺菌劑對(duì)煙草靶斑病菌的毒力測定

原藥毒力回歸方程EC50值

（mg/L）決定系數(shù)

（r2）惡霉靈y=1.749 2x+6.569 80.126 60.905 1腐霉利y=1.824 3x+6.593 80.133 80.742 2多菌靈y=1.800 1x+5.517 60.515 80.975 7三唑酮 y=2.677 4x+5.563 80.615 80.960 1百菌清y=1.597 5x+5.316 00.634 10.945 5烯唑醇 y=1.578 8x+5.172 70.777 20.884 9甲基硫菌靈y=1.526 2x+5.103 10.855 90.935 9咪鮮胺y=4.174 9x+4.853 81.084 00.874 4苯醚甲環(huán)唑y=2.141 3x+4.752 01.305 60.942 8代森錳鋅y=2.080 5x+4.604 51.549 20.763 6

2.1.2復(fù)配藥劑篩選試驗(yàn)選擇腐霉利和惡霉靈進(jìn)行復(fù)配，測定其對(duì)煙草靶斑病菌的抑制效果，計(jì)算增效系數(shù)。由表2可見，當(dāng)腐霉利與惡霉靈按照1 ∶9、2 ∶8、8 ∶2、9 ∶1比例復(fù)配后，均顯示相加作用；以其他比例復(fù)配時(shí)，均顯示增效作用；當(dāng)腐霉利和惡霉靈按照4 ∶6比例復(fù)配時(shí)，增效系數(shù)最大，為4.364 1，明顯高于其他處理，由此確定腐霉利 ∶惡霉靈為 4 ∶6 為最佳配比。表2腐霉利和惡霉靈復(fù)配對(duì)煙草靶斑病菌的聯(lián)合毒力測定

腐霉利和惡霉靈配比毒力回歸方程決定系數(shù)

（r2）EC50值（mg/L）實(shí)測值理論值增效系數(shù)

（SR）10 ∶0y=1.749 2x+6.569 80.905 10.126 6 0 ∶10y=1.824 3x+6.593 80.742 20.133 8 1 ∶9y=1.546 9x+5.645 40.854 70.133 2 0.133 0 0.998 52 ∶8y=1.633 6x+5.286 40.856 20.107 0 0.132 3 1.236 43 ∶7y=2.584 4x+4.877 50.932 50.066 6 0.131 6 1.974 44 ∶6y=2.874 5x+5.122 10.968 40.030 0 0.130 8 4.364 15 ∶5y=2.551 2x+4.685 40.912 70.053 8 0.130 1 2.417 86 ∶4y=2.845 6x+5.655 60.817 20.051 3 0.129 4 2.522 87 ∶3y=1.988 8x+5.122 80.971 30.077 9 0.128 7 1.652 78 ∶2y=2.743 3x+5.736 10.855 20.130 6 0.128 0 0.979 89 ∶1y=2.155 8x+4.975 90.935 50.100 5 0.127 3 1.266 4

2.2水分散粒劑配方篩選結(jié)果

2.2.1潤濕劑篩選將待選潤濕劑十二烷基硫酸鈉（K12）、十二烷基苯磺酸鈉（DBS）、2-萘磺酸甲醛聚合物鈉鹽（NNO）按5%潤濕劑+50%復(fù)配原藥+載體（補(bǔ)足至100%），分別制成水分散粒劑，進(jìn)行潤濕性測定，記錄潤濕時(shí)間，篩選出最佳潤濕劑。由表3可見，在同樣用量下，將K12、DBS按照1 ∶1比例混合時(shí)，潤濕時(shí)間最短，為10 s，潤濕效果最好，因此將其作為最佳潤濕劑。

潤濕劑篩選結(jié)果

潤濕劑用量（%）潤濕時(shí)間（s）潤濕性能K12514合格DBS542合格NNO537合格K12+DBS（1 ∶1）510合格K12+NNO（1 ∶1）528合格

2.2.2分散劑篩選待選分散劑聚乙烯醇（PVA）、聚乙二醇（PEG）、木質(zhì)素磺酸鈉（CMN）按5%分散劑+5%最佳潤濕劑+50%復(fù)配原藥+載體（補(bǔ)足至100%），分別制成水分散粒劑，進(jìn)行分散性測定，記錄潤濕時(shí)間、分散性，計(jì)算懸浮率，篩選出最佳分散劑。由表4可見，在同樣用量下，PEG、CMN按照 1 ∶1 比例混合時(shí)，懸浮率最大，為85.86%，懸浮性能最好，潤濕性和分散性也相對(duì)較好。因此選用PEG、CMN（比例為1 ∶1）作為最佳分散劑。

分散劑篩選結(jié)果

分散劑用量

（%）潤濕時(shí)間

（s）分散性

（次）分散

性能懸浮率

（%）PVA5114合格63.19PEG5135合格79.93CMN574合格72.14PEG+PVA（1 ∶1）5145合格72.56PEG+CMN（1 ∶1）574合格85.86

2.2.3載體篩選待選載體硅藻土、高嶺土、白炭黑，按5%最佳潤濕劑+5%最佳分散劑+50%復(fù)配原藥+載體（補(bǔ)足至100%），分別制成水分散粒劑，進(jìn)行載體篩選，記錄潤濕時(shí)間，計(jì)算懸浮率，篩選出最佳載體。由表5可見，在相同用量的3種載體處理下，硅藻土處理的懸浮率為86.26%，明顯高于高嶺土、白炭黑處理，且該處理潤濕時(shí)間最短，分散性能最好。因此選用硅藻土為最佳載體。

載體篩選結(jié)果

載體用量

（%）潤濕時(shí)間

（s）分散性

（次）分散性能懸浮率

（%）硅藻土4075合格86.26高嶺土4096合格69.55白炭黑40107合格70.32

2.2.4崩解劑篩選待選崩解劑硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈣，按5%崩解劑+5%最佳潤濕劑+5%最佳分散劑+50%復(fù)配原藥+最佳載體（補(bǔ)足至100%），分別制成水分散粒劑，進(jìn)行崩解劑篩選，記錄崩解時(shí)間，篩選出最佳崩解劑。由表6可見，在同樣用量下，崩解時(shí)間順序?yàn)榱蛩徜@處理<硫酸鈉處理<氯化鈣處理，崩解性能均合格。因此選用硫酸銨為最佳崩解劑。

2.3配方優(yōu)化

在以上篩選試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將篩選出的助劑按正交設(shè)計(jì)

崩解劑篩選結(jié)果

崩解劑用量

（%）崩解時(shí)間

（s）崩解性能硫酸銨523合格硫酸鈉530合格氯化鈣535合格

方法設(shè)定不同用量組合，加工成水分散粒劑，分別測定崩解時(shí)間、分散性能、懸浮率。由表7可見，潤濕劑用量對(duì)各性能指標(biāo)影響不大；分散劑用量對(duì)懸浮率有較大影響，隨著分散劑用量增加，懸浮率隨之增加；崩解劑用量對(duì)崩解性能影響較大，崩解時(shí)間隨崩解劑用量增加而縮短；當(dāng)潤濕劑用量6%、分散劑用量6%、崩解劑用量5%時(shí)，崩解時(shí)間最短，為18 s，懸浮率最高，為86.64%，分散性能合格。

不同配方的崩解時(shí)間、分散性能和懸浮率測定

編號(hào)潤濕劑

（%）分散劑

（%）崩解劑

（%）崩解時(shí)間

（s）分散性

（次）分散性能懸浮率

（%）14442511不合格63.032455229合格72.563466197合格80.0645452311不合格69.985556207合格75.036564264合格80.367646199合格75.228654246合格77.559665185合格86.64

本研究篩選出的最佳試劑配方：潤濕劑為K12（3%）、DBS（3%），分散劑為PEG（3%）、CMN（3%），崩解劑為硫酸銨（5%），載體為硅藻土（補(bǔ)足至100%）。

2.4田間藥效試驗(yàn)結(jié)果

2次施藥后，50%（腐霉利+惡霉靈）水分散粒劑復(fù)配藥劑的相對(duì)防效均高于腐霉利和惡霉靈單劑，說明復(fù)配藥劑的藥效優(yōu)于單一藥劑。對(duì)于復(fù)配藥劑而言，稀釋600、800、1 000倍液對(duì)煙草靶斑病的相對(duì)防效分別為5661%、60.03%、58.25%，因此50%（腐霉利+惡霉靈）水分散粒劑稀釋800倍相對(duì)防效最高，可在一定程度上控制病情的發(fā)展。表8不同處理對(duì)煙草靶斑病的防治效果

處理稀釋

倍數(shù)施藥前

病情指數(shù)第1次施藥后7 d第2次施藥后7 d病情指數(shù)病情指數(shù)

增長率（%）相對(duì)防效

（%）病情指數(shù)病情指數(shù)

增長率（%）相對(duì)防效

（%）50%（腐霉利+惡霉60023.4424.665.2041.7226.3111.2856.61靈）水分散粒劑復(fù)配80023.0524.164.8246.0825.6511.2860.03100024.0225.646.7424.4826.8511.7858.25腐霉利單劑80019.8621.16.2430.0923.2116.8740.22惡霉靈單劑80020.9822.376.6325.8124.5517.0239.69清水—23.8525.988.9330.5828.22

3結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，10種藥劑對(duì)煙草靶斑病菌均有不同程度的抑制作用，惡霉靈、腐霉利抑菌效果最顯著，EC50值分別為0126 6、0.133 8 mg/L，可作為復(fù)配藥劑；腐霉利與惡霉靈按照4 ∶6比例復(fù)配后，增效效果最明顯，增效系數(shù)為 4.364 1，且明顯高于其他比例復(fù)配藥劑和腐霉利、惡霉靈的單一藥劑，將其確定為最佳配比；分別篩選出最佳潤濕劑、分

散劑、載體、崩解劑，并進(jìn)行配方優(yōu)化，得出最佳試劑配方：潤濕劑為十二烷基硫酸鈉（3%）、十二烷基苯磺酸鈉（3%），分散劑為聚乙二醇（3%）、木質(zhì)素磺酸鈉（3%），崩解劑為硫酸銨（5%），載體為硅藻土（補(bǔ)足至100%）；將制得水分散粒劑用于田間藥效試驗(yàn)，結(jié)果表明50%（腐霉利+惡霉靈）水分散粒劑800倍液相對(duì)防效最高，為60.03%，對(duì)煙草靶斑病的發(fā)生具有一定控制作用。本研究結(jié)果對(duì)煙草靶斑病的防控具有一定指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]伏穎，吳元華，穆凌霄，等. 煙草靶斑病室內(nèi)藥劑篩選[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（3）：153-155.

[2]賈輝，呂和平，沈慧敏，等. 不同殺菌劑對(duì)立枯絲核菌的室內(nèi)毒力測定[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，42（6）：99-101.

[3]陳立，徐漢虹，李云宇，等. 農(nóng)藥復(fù)配最佳增效配方篩選方法的探討[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2000，27（4）：349-354.

[4]石明旺，孫永葉，賀榮國，等. 殺菌劑及其復(fù)配對(duì)番茄灰霉病菌的毒力測定[J]. 河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2007，35（3）：54-56.

[5]謝毅，郭凡，康占海，等. 農(nóng)藥水分散粒劑的研究進(jìn)展[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理，2005，26（12）：26-29.

[6]宮貞啟，王宏年，曾憲峰，等. 苯醚·咪鮮胺35%水乳劑防治黃瓜靶斑病的田間藥效試驗(yàn)[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理，2013，34（6）：55-57.

[7]李應(yīng)金，陳惠明，李強(qiáng)，等. 防治煙草病毒病田間對(duì)比藥效試驗(yàn)[J]. 農(nóng)藥，2003，42（9）：32-33.齊江衛(wèi)，王培丹，張珂，等. 苜蓿銀紋夜蛾病毒殺蟲劑對(duì)甘藍(lán)甜菜夜蛾的田間防效[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（6）：143-144.