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    8株白僵菌菌株的抗逆性研究

    2014-08-12 04:09:25滕忠才劉廷輝張立紅董建臻李瑞軍
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年6期
    關(guān)鍵詞:白僵菌小菜蛾抗逆性

    滕忠才+劉廷輝+張立紅+董建臻+李瑞軍+李保國(guó)

    摘要:對(duì)8個(gè)白僵菌(Beauveria bassiana)菌株的抗旱力、耐高溫能力、抗紫外線能力和耐低溫能力等生物學(xué)性狀進(jìn)行了測(cè)定,綜合各菌株的生物學(xué)特性和對(duì)小菜蛾幼蟲(chóng)的毒力指標(biāo),最終得出優(yōu)良菌株是BD-B026。

    關(guān)鍵詞:小菜蛾;白僵菌;抗逆性;抗旱力;耐高溫能力;抗紫外線能力;耐低溫能力

    中圖分類號(hào): S482.3+9文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2014)06-0122-03

    收稿日期:2013-12-29

    基金項(xiàng)目:河北省科技支撐計(jì)劃(編號(hào):12220302D);河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系小麥創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目。

    作者簡(jiǎn)介:滕忠才(1970—),男,河北獻(xiàn)縣人,碩士,講師,主要從事農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)綜合防治研究。E-mail:teng-zhongcai@163.com。

    通信作者:李瑞軍(1967—),男,河北昌黎人,博士,副教授,主要從事害蟲(chóng)生物防治及農(nóng)業(yè)生態(tài)安全研究。Tel:(0312)7528172;E-mail:liruijun99@sina.com。白僵菌作為一種重要的殺蟲(chóng)真菌,在國(guó)外已被開(kāi)發(fā)成為多種劑型并登記注冊(cè)[1-3]。隨著近十多年來(lái)絲孢類生防真菌制劑技術(shù)的不斷發(fā)展,長(zhǎng)期困擾菌劑本身的生產(chǎn)、加工及應(yīng)用的很多技術(shù)難題都被有效解決[3-5],使得越來(lái)越多的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)制劑用于農(nóng)林害蟲(chóng)的防治[4]。雖然能夠寄生多種昆蟲(chóng),但不同菌株對(duì)寄主有一定的?;?,致病力也有一定的差異[5],其致病力主要取決于菌株、害蟲(chóng)蟲(chóng)態(tài)以及環(huán)境條件等因素[6]。球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是白僵菌屬中的一種,主要發(fā)生于包括鞘翅目和半翅目等絕大多數(shù)昆蟲(chóng)[7],其有效成分是具有細(xì)胞生命特征的侵染體(分生孢子或菌絲體)。白僵菌菌株抗逆性的強(qiáng)弱在很大程度上決定著菌劑本身的生態(tài)適應(yīng)性和田間應(yīng)用效果。即使同一菌株在不同的寄主上也表現(xiàn)出不同的毒力,不同菌種或同一菌種的不同菌株在抗逆性方面往往存在較大的差異[8],因而,篩選高毒力且抗逆性強(qiáng)的菌種菌株是提高生防菌劑技術(shù)含量和適用性的重要途徑之一。

    1材料與方法

    1.1材料

    供試菌株:對(duì)小菜蛾高毒力的白僵菌菌株BD-B007、BD-B008、BD-B001、BD-B021、BD-B010、BD-B029、BD-B017、 BD-B026,均為筆者所在實(shí)驗(yàn)室自主分離。供試試蟲(chóng):筆者所在實(shí)驗(yàn)室人工飼養(yǎng)的小菜蛾2~3齡幼蟲(chóng)。培養(yǎng)基:SDAY固體培養(yǎng)基(葡萄糖4%,蛋白陳1%,酵母粉1%,瓊脂2%);SDAY液體培養(yǎng)基(葡萄糖4%,蛋白陳1%,酵母粉1%)。營(yíng)養(yǎng)液:2%的葡萄糖和5%的蛋白胨。

    1.2高毒力白僵菌菌株抗旱力的篩選

    1.2.1高毒力白僵菌菌株抗旱力的測(cè)定取芽生孢子懸液,以SDAY液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加入10%的PEG200(聚乙二醇,分子量6 000),在(25±1) ℃下培養(yǎng),測(cè)其萌發(fā)中時(shí)GT50′;以未加PEG200的菌液為對(duì)照,測(cè)定其萌發(fā)中時(shí)GT50。以GT50′與GT50之差作為孢子耐干旱能力的大小,每次測(cè)定各菌株設(shè)3個(gè)重復(fù)(萌發(fā)液試管3支)。

    1.2.2干旱脅迫下高毒力白僵菌菌株生長(zhǎng)量的測(cè)定取芽生孢子懸液,以SDAY液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加入5%、10%、20%、30%、40%的PEG200,以未加PEG200處理為對(duì)照,(25±1) ℃下培養(yǎng)12 h,于8 000 r/min離心10 min,棄上清液。孢子用滅菌水洗滌2次,同上離心,用0.05% Tween-80 分別配制成含孢子1×106個(gè)/mL的懸液,然后用直徑7 mm的濾紙圓片浸沒(méi)于孢子懸液中,再取出置于直徑 9 cm 的SDAY平板中央,然后置于(25±1) ℃的培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng) 7 d,每處理重復(fù)3次,逐日測(cè)量各平板上的菌落直徑。

    1.3高毒力白僵菌菌株抗紫外線能力的篩選

    將各菌株的芽生孢子懸浮液(40~120個(gè)/μL)在室內(nèi)紫外燈(30 W)下60 cm處照射0、0.5、1、2、4、6 min,吸取上述各處理的孢子懸浮液1 μL,均勻涂布于SDAY平板上,將平板置于 (25±1) ℃ 溫箱中培養(yǎng),每個(gè)處理3次重復(fù)。培養(yǎng) 5 d 后計(jì)數(shù)各處理平板中菌落數(shù),以未經(jīng)處理的為對(duì)照,計(jì)算各菌株各處理的菌落死亡率,表示分生孢子的死亡率。

    1.4高毒力白僵菌菌株耐高溫能力的篩選

    1.4.1短時(shí)高溫處理對(duì)分生孢子的影響將芽生孢子懸浮液分裝至試管,置于水浴鍋恒溫處理,處理溫度設(shè)置:35、40、50、60、70 ℃,處理時(shí)間設(shè)置:10、20、30、40、50、60 min,以不加溫處理為對(duì)照,3次重復(fù)。然后將處理的分生孢子分別:(a)轉(zhuǎn)移至營(yíng)養(yǎng)液,于26 ℃搖床恒溫培養(yǎng)18~24 h,顯微鏡下觀察5~10個(gè)視野,約500個(gè)孢子,計(jì)萌發(fā)率;(b)涂布于SDAY平板,25 ℃培養(yǎng)3 d,計(jì)成菌落數(shù)。

    1.4.2持續(xù)高溫培養(yǎng)對(duì)分生孢子的影響將芽生孢子懸浮液轉(zhuǎn)移至營(yíng)養(yǎng)液,分裝至試管,置于水浴鍋35、40、50、60、70 ℃ 恒溫培養(yǎng)3~4 d,以25 ℃培養(yǎng)為對(duì)照,3次重復(fù)。涂布于SDAY平板,計(jì)成菌落數(shù)。

    1.5高毒力白僵菌菌株耐低溫能力的篩選

    1.5.1高毒力白僵菌菌株低溫下萌發(fā)率的測(cè)定取芽生孢子懸浮液,轉(zhuǎn)移至營(yíng)養(yǎng)液,分裝至試管,在(15±1) ℃下培養(yǎng),測(cè)定其萌發(fā)率。

    1.5.2各菌株低溫下生長(zhǎng)量的測(cè)定取芽生孢子懸液 10 μL,滴于SDAY平板中央,每菌株設(shè)3個(gè)重復(fù),置 (25±1) ℃ 培養(yǎng)7 d,逐日測(cè)量菌落直徑。

    2結(jié)果與分析

    2.1高毒力白僵菌菌株抗旱力的篩選

    2.1.1高毒力菌株抗旱力的測(cè)定由表1可知,經(jīng)不同濃度PEG200處理后,對(duì)不同菌株孢子萌發(fā)產(chǎn)生的影響不同。其中BD-B026菌株的抗旱力最高,對(duì)其孢子萌發(fā)的影響最??;BD-B017菌株次之,對(duì)BD-B007菌株影響最大。

    2.1.2干旱脅迫下高毒力菌株生長(zhǎng)量的測(cè)定由表2可知,不同菌株經(jīng)不同濃度PEG200處理后,對(duì)孢子產(chǎn)生的影響隨PEG200處理濃度的增大而增加。當(dāng)處理濃度為20%時(shí),各

    菌株與未經(jīng)PEG200處理間差異較明顯。當(dāng)處理濃度為40%時(shí),各菌株之間存在顯著性差異。其中40%PEG200對(duì) BD-B029 的抑制率最高,BD-B021次之,BD-B026最小。表2不同菌株生長(zhǎng)抑制率

    菌株生長(zhǎng)抑制率0%PEG200(CK)5%PEG20010%PEG20020%PEG20030%PEG20040%PEG200BD-B0260.00aA0.00aA0.01abA0.02abA0.03abA0.08bABD-B0100.00aA-0.02aA0.03abA0.01abA0.03abA0.10bABD-B0080.00aA0.00aA0.03aA0.05aA0.12aA0.13aABD-B0010.00aA0.00aA0.02aA0.04aAB0.12bBC0.14bCBD-B0170.00aA0.01abA0.04bcA0.07bcAB0.10cAB0.14dBBD-B0210.00aA0.00aA0.01bcAB0.10cABC0.15cdBC0.17dCBD-B0070.00aA-0.02aA0.00aA0.03aA0.09abAB0.18bBBD-B0290.00aA0.03aA0.05aA0.07aA0.17bAB0.21bB注:同行不同小寫(xiě)、大寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)。

    2.2高毒力白僵菌菌株抗紫外線能力的篩選

    不同菌株孢子經(jīng)紫外光照射后,均對(duì)孢子產(chǎn)生影響,隨紫外照射時(shí)間的增加而增大,且與未經(jīng)照射孢子的萌發(fā)率之間均存在顯著性差異。各菌株孢子間致死中時(shí)差異較明顯(表3)。經(jīng)紫外線照射后,其中BD-B008菌株孢子活率最低,對(duì)孢子的影響最大;BD-B007菌株次之,對(duì)BD-B17菌株影響最小。

    2.3高毒力白僵菌菌株耐高溫能力的篩選

    2.3.1短時(shí)高溫處理對(duì)分生孢子的影響溫度通常關(guān)系到白僵菌孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的速度,以及致病率的高低。尤其是高溫,35 ℃是白僵菌營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的極限溫度[9]。因此,孢子耐熱性能是篩選優(yōu)良菌株的重要指標(biāo)之一,耐熱性好表明菌株在野外抵抗高溫的能力強(qiáng)。8個(gè)供試菌株經(jīng)高溫水浴處理后,18~24 h后孢子萌發(fā)結(jié)果見(jiàn)表4和表5。

    菌株致死中時(shí)(min)回歸方程BD-B0171.67±0.02 y=1.186 9+3.117 8xBD-B0101.04±0.03y=2.470 0+2.482 9xBD-B0260.77±0.04y=3.461 2+1.736 8xBD-B0290.64±0.04y=3.790 0+1.503 2xBD-B0010.63±0.05y=4.085 6+1.146 8xBD-B0210.58±0.03y=3.033 7+2.577 3xBD-B0070.47±0.03y=3.612 1+2.059 9xBD-B0080.06±0.08y=5.170 4+0.936 6x

    2.3.1.135 ℃熱脅迫對(duì)分生孢子的影響35 ℃處理后與對(duì)照有差異,得到的成菌落數(shù)均比觀察到的發(fā)芽率略低,但熱處理時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)發(fā)芽率和成菌落數(shù)的影響趨勢(shì)基本相同(表4)。表4不同菌株分生孢子經(jīng)35 ℃恒溫水浴不同時(shí)間脅迫處理后的死亡率

    菌株死亡率0 min10 min20 min30 min40 min50 min60 minBD-B0260.00aA0.03abAB0.06abcABC0.10abcdABC0.13bcdABC0.16cdBC0.19dCBD-B0170.00aA0.03abA0.11abcAB0.18bcAB0.21bcAB0.22cAB0.29cBBD-B0290.00aA0.08abA0.20abA0.23abA0.28abA0.31bA0.32bABD-B0080.00aA0.11abAB0.16abcAB0.21abcAB0.27bcAB0.33cB0.37cBBD-B0100.00aA0.02aA0.17bB0.23cC0.37dD0.46eE0.55fFBD-B0070.00aA0.10bB0.18cB0.31dC0.46eD0.52eD0.62 fEBD-B0010.00aA0.44abAB0.49abcAB0.52abcAB0.55bcAB0.59cB0.65cBBD-B0210.00aA0.32bB0.38cB0.52cB0.66dC0.69eD0.86fE注同表3。

    菌株半致死時(shí)間

    (LT50)(min)回歸方程BD-B026126.88±0.05y=2.543 5+1.167 9xBD-B01793.85±0.04y=2.516 5+1.259 1xBD-B02953.49±0.02y=0.456 4+2.629 0xBD-B01052.57±0.03y=2.272 1+1.585 3xBD-B00837.34±0.03y=1.986 3+1.916 9xBD-B00736.48±0.03y=2.070 3+1.875 5xBD-B00123.39±0.03y=2.507 6+1.820 6xBD-B02115.77±0.05y=3.491 2+1.259 7x

    2.3.1.240 ℃熱脅迫對(duì)分生孢子的影響孢子的萌發(fā)在此溫度下非常敏感,敏感程度依次為:BD-B026、 BD-B17、BD-B029、BD-B010、BD-008、BD-B007、 BD-B001、 BD-B021(表5)。BD-B021在處理10 min時(shí),發(fā)芽率下降了32%。BD-B010和BD-B001對(duì)短時(shí)熱處理有一定的忍耐力,當(dāng)處理10 min時(shí),發(fā)芽率與對(duì)照無(wú)顯著差異,BD-B026 與其他菌株比較耐受能力較強(qiáng),但處理時(shí)間為30 min時(shí),發(fā)芽率也下降至21%以下。另外,成菌落數(shù)均比觀察到的發(fā)芽率略低,但熱處理時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)發(fā)芽率和成菌落數(shù)的影響趨勢(shì)基本相同。

    50 ℃、60 ℃和70 ℃處理對(duì)孢子萌發(fā)有很大抑制作用,各處理時(shí)段的發(fā)芽率均為0。

    2.3.2持續(xù)高溫處理對(duì)分生孢子的影響試驗(yàn)結(jié)果表明各菌株在各溫度培養(yǎng)3~ 4 d均未形成菌落。

    2.4高毒力白僵菌菌株耐低溫能力的篩選

    2.4.1高毒力菌株耐低溫能力的測(cè)定結(jié)果不同菌株經(jīng)低溫處理,由于各菌株對(duì)低溫的耐性不同,菌株之間存在十分明顯的差異性。經(jīng)低溫處理48 h,BD-B008菌株孢子的萌發(fā)率最高,對(duì)孢子的影響最小,孢子萌發(fā)一半所需要的時(shí)間最短,對(duì)BD-B029菌株影響最大,孢子萌發(fā)一半所需時(shí)間最長(zhǎng)。

    菌株萌發(fā)中時(shí)(min)回歸方程BD-B00834.47±0.02y=0.012 7+3.243 9xBD-B01036.15±0.02y=0.347 2+2.986 1xBD-B00737.78±0.02y=-0.139 1+43.258 2xBD-B01738.71±0.02y=0.217 8+3.011 7xBD-B00139.41±0.02y=0.456 3+2.847 7xBD-B02139.89±0.02y=-0.017 7+3.134 4xBD-B02639.01±0.02y=-0.068 7+3.185 5xBD-B02949.40±0.02y=10.461 6+2.679 5x

    2.4.2各菌株低溫下生長(zhǎng)量的測(cè)定結(jié)果菌株?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)快慢是反映菌株優(yōu)良性狀的指標(biāo)之一。8個(gè)白僵菌菌株在SDAY 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)有明顯的差異(表7) 。7 d時(shí)菌落生長(zhǎng)直徑從11~1.4 cm不等,其中菌株BD-B008和BD-B001生長(zhǎng)最快,BD-B021生長(zhǎng)最慢。表7不同菌株低溫下的菌落直徑

    菌株菌落直徑(cm)1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 dBD-B0080.00aA0.56aA0.70aA0.88aA1.05aA1.18aA1.40aABD-B0010.00aA0.55aA0.70abA0.90abA1.00abAB1.20aA1.38abABBD-B0170.00aA0.60aA0.70abcA0.75abcAB0.83bcABC1.20aA1.33bcABCBD-B0070.00aA0.53aA0.65abcA0.73abcAB0.85cdBC0.95aA1.23bcdABCBD-B0260.00aA0.53aA0.75abcA0.78bcAB0.85cdBC1.05aA1.22bcdABCBD-B0290.00aA0.50aA0.60abcA0.70cAB0.80cdBC1.10aA1.20bcdABCBD-B0100.00aA0.53aA0.67bcA0.81cAB0.93cdC1.10aA1.15cdBCBD-B0210.00aA0.53aA0.62cA0.76cB0.85dC0.95aA1.10dC

    2.5綜合評(píng)判白僵菌菌株的生物學(xué)性狀指標(biāo)

    綜合評(píng)判8個(gè)白僵菌菌株的抗旱能力、耐熱能力、抗紫外線能力和耐低溫能力等生物學(xué)指標(biāo)(表8)。從表8可知,對(duì)生物學(xué)性狀指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)后,BD-B017、BD-B010和BD-B026分別位列前3位,綜合對(duì)小菜蛾的毒力考慮菌株BD-B026為首選開(kāi)發(fā)菌株。表8不同菌株生物學(xué)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)

    菌株抗旱能力抗旱生長(zhǎng)

    抑制率耐熱能力抗紫外能力紫外生長(zhǎng)

    抑制率耐低溫能力抗旱生長(zhǎng)量綜合排序BD-B017242124318BD-B026181357530BD-B010474242730BD-B007826713431BD-B029313478632BD-B008765861134BD-B021538636839BD-B001657585238

    3結(jié)論與討論

    研究結(jié)果表明,不同菌株間抗逆性存在顯著差異,同一菌株對(duì)不同條件的抗逆性也不相同。表明白僵菌孢子的穩(wěn)定性除與溫度、光照和濕度有關(guān),還與孢子自身有關(guān),所以今后在進(jìn)行抗性育種和環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí),必須考慮這些因素,從而可以有效地預(yù)測(cè)孢子在環(huán)境中的宿存時(shí)間和數(shù)量,為防治策略的制定提供參考依據(jù)。綜合考慮各項(xiàng)指標(biāo),BD-B017、BD-B010 和BD-B026有較大的生產(chǎn)應(yīng)用潛力,這3個(gè)菌株的抗旱力、抗寒力、耐熱力、抗紫外線能力等生物學(xué)特性,綜合

    排序位居前列,但菌株BD-B017對(duì)小菜蛾幼蟲(chóng)的毒力相對(duì)較低,最終得出防治小菜蛾幼蟲(chóng)優(yōu)良菌株是BD-B026菌株。

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    [7]蒲蟄龍. 昆蟲(chóng)病理學(xué)[M]. 廣州:廣東科學(xué)技術(shù)出版社,1994:348-356.

    [8]徐慶豐. 白僵菌的防蟲(chóng)作用及其在應(yīng)用上的一些問(wèn)題[J]. 昆蟲(chóng)知識(shí),1964,8 (6):296 - 299.

    [9]張立欽,詹偉君,馬良進(jìn),等. 來(lái)自松墨天牛的白僵菌菌株的生長(zhǎng)條件及毒力模型[M]//楊懷文. 邁入21世紀(jì)的中國(guó)生物防治. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2005:191-197.李翠軍,馮典興,劉廣純. 角喙栓蚤蠅減數(shù)分裂行為觀察[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(6):125-128.

    50 ℃、60 ℃和70 ℃處理對(duì)孢子萌發(fā)有很大抑制作用,各處理時(shí)段的發(fā)芽率均為0。

    2.3.2持續(xù)高溫處理對(duì)分生孢子的影響試驗(yàn)結(jié)果表明各菌株在各溫度培養(yǎng)3~ 4 d均未形成菌落。

    2.4高毒力白僵菌菌株耐低溫能力的篩選

    2.4.1高毒力菌株耐低溫能力的測(cè)定結(jié)果不同菌株經(jīng)低溫處理,由于各菌株對(duì)低溫的耐性不同,菌株之間存在十分明顯的差異性。經(jīng)低溫處理48 h,BD-B008菌株孢子的萌發(fā)率最高,對(duì)孢子的影響最小,孢子萌發(fā)一半所需要的時(shí)間最短,對(duì)BD-B029菌株影響最大,孢子萌發(fā)一半所需時(shí)間最長(zhǎng)。

    菌株萌發(fā)中時(shí)(min)回歸方程BD-B00834.47±0.02y=0.012 7+3.243 9xBD-B01036.15±0.02y=0.347 2+2.986 1xBD-B00737.78±0.02y=-0.139 1+43.258 2xBD-B01738.71±0.02y=0.217 8+3.011 7xBD-B00139.41±0.02y=0.456 3+2.847 7xBD-B02139.89±0.02y=-0.017 7+3.134 4xBD-B02639.01±0.02y=-0.068 7+3.185 5xBD-B02949.40±0.02y=10.461 6+2.679 5x

    2.4.2各菌株低溫下生長(zhǎng)量的測(cè)定結(jié)果菌株?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)快慢是反映菌株優(yōu)良性狀的指標(biāo)之一。8個(gè)白僵菌菌株在SDAY 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)有明顯的差異(表7) 。7 d時(shí)菌落生長(zhǎng)直徑從11~1.4 cm不等,其中菌株BD-B008和BD-B001生長(zhǎng)最快,BD-B021生長(zhǎng)最慢。表7不同菌株低溫下的菌落直徑

    菌株菌落直徑(cm)1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 dBD-B0080.00aA0.56aA0.70aA0.88aA1.05aA1.18aA1.40aABD-B0010.00aA0.55aA0.70abA0.90abA1.00abAB1.20aA1.38abABBD-B0170.00aA0.60aA0.70abcA0.75abcAB0.83bcABC1.20aA1.33bcABCBD-B0070.00aA0.53aA0.65abcA0.73abcAB0.85cdBC0.95aA1.23bcdABCBD-B0260.00aA0.53aA0.75abcA0.78bcAB0.85cdBC1.05aA1.22bcdABCBD-B0290.00aA0.50aA0.60abcA0.70cAB0.80cdBC1.10aA1.20bcdABCBD-B0100.00aA0.53aA0.67bcA0.81cAB0.93cdC1.10aA1.15cdBCBD-B0210.00aA0.53aA0.62cA0.76cB0.85dC0.95aA1.10dC

    2.5綜合評(píng)判白僵菌菌株的生物學(xué)性狀指標(biāo)

    綜合評(píng)判8個(gè)白僵菌菌株的抗旱能力、耐熱能力、抗紫外線能力和耐低溫能力等生物學(xué)指標(biāo)(表8)。從表8可知,對(duì)生物學(xué)性狀指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)后,BD-B017、BD-B010和BD-B026分別位列前3位,綜合對(duì)小菜蛾的毒力考慮菌株BD-B026為首選開(kāi)發(fā)菌株。表8不同菌株生物學(xué)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)

    菌株抗旱能力抗旱生長(zhǎng)

    抑制率耐熱能力抗紫外能力紫外生長(zhǎng)

    抑制率耐低溫能力抗旱生長(zhǎng)量綜合排序BD-B017242124318BD-B026181357530BD-B010474242730BD-B007826713431BD-B029313478632BD-B008765861134BD-B021538636839BD-B001657585238

    3結(jié)論與討論

    研究結(jié)果表明,不同菌株間抗逆性存在顯著差異,同一菌株對(duì)不同條件的抗逆性也不相同。表明白僵菌孢子的穩(wěn)定性除與溫度、光照和濕度有關(guān),還與孢子自身有關(guān),所以今后在進(jìn)行抗性育種和環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí),必須考慮這些因素,從而可以有效地預(yù)測(cè)孢子在環(huán)境中的宿存時(shí)間和數(shù)量,為防治策略的制定提供參考依據(jù)。綜合考慮各項(xiàng)指標(biāo),BD-B017、BD-B010 和BD-B026有較大的生產(chǎn)應(yīng)用潛力,這3個(gè)菌株的抗旱力、抗寒力、耐熱力、抗紫外線能力等生物學(xué)特性,綜合

    排序位居前列,但菌株BD-B017對(duì)小菜蛾幼蟲(chóng)的毒力相對(duì)較低,最終得出防治小菜蛾幼蟲(chóng)優(yōu)良菌株是BD-B026菌株。

    參考文獻(xiàn):

    [1]郭亞力,田學(xué)軍,羅思,等. 球孢白僵菌對(duì)斜紋夜蛾幼蟲(chóng)的致病性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(2):100-101.

    [2]李增智. 菌物在害蟲(chóng)、植病和雜草治理中的現(xiàn)狀和未來(lái)[J]. 中國(guó)生物防治,1999,15(1):35-40.

    [3]Feng M Q Poprawski T J,Khachatourians G G. Production of formulation and application of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana for insect control:current status[J]. Biocontrol Sci Technol,1994,4:3-34.

    [4]Wraight S P,Jackson M A,de Kock S L. Production,stabilization and formulation of fungal biological agents[M]//Butt T,Jackson C,Magan N. Fungi as biocontrol agents:progress,problems and potential. London:CAB International,2001:253-287.

    [5]Roberts D W,Leger R J. Metarhizium spp.,cosmopolitan insect-pathogenic fungi:mycological aspects[J]. Adv Appl Microbiol,2004,54:1-70.

    [6]蒲蟄龍. 害蟲(chóng)生物防治的原理和方法[M]. 北京:科學(xué)出版社,1978.

    [7]蒲蟄龍. 昆蟲(chóng)病理學(xué)[M]. 廣州:廣東科學(xué)技術(shù)出版社,1994:348-356.

    [8]徐慶豐. 白僵菌的防蟲(chóng)作用及其在應(yīng)用上的一些問(wèn)題[J]. 昆蟲(chóng)知識(shí),1964,8 (6):296 - 299.

    [9]張立欽,詹偉君,馬良進(jìn),等. 來(lái)自松墨天牛的白僵菌菌株的生長(zhǎng)條件及毒力模型[M]//楊懷文. 邁入21世紀(jì)的中國(guó)生物防治. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2005:191-197.李翠軍,馮典興,劉廣純. 角喙栓蚤蠅減數(shù)分裂行為觀察[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(6):125-128.

    50 ℃、60 ℃和70 ℃處理對(duì)孢子萌發(fā)有很大抑制作用,各處理時(shí)段的發(fā)芽率均為0。

    2.3.2持續(xù)高溫處理對(duì)分生孢子的影響試驗(yàn)結(jié)果表明各菌株在各溫度培養(yǎng)3~ 4 d均未形成菌落。

    2.4高毒力白僵菌菌株耐低溫能力的篩選

    2.4.1高毒力菌株耐低溫能力的測(cè)定結(jié)果不同菌株經(jīng)低溫處理,由于各菌株對(duì)低溫的耐性不同,菌株之間存在十分明顯的差異性。經(jīng)低溫處理48 h,BD-B008菌株孢子的萌發(fā)率最高,對(duì)孢子的影響最小,孢子萌發(fā)一半所需要的時(shí)間最短,對(duì)BD-B029菌株影響最大,孢子萌發(fā)一半所需時(shí)間最長(zhǎng)。

    菌株萌發(fā)中時(shí)(min)回歸方程BD-B00834.47±0.02y=0.012 7+3.243 9xBD-B01036.15±0.02y=0.347 2+2.986 1xBD-B00737.78±0.02y=-0.139 1+43.258 2xBD-B01738.71±0.02y=0.217 8+3.011 7xBD-B00139.41±0.02y=0.456 3+2.847 7xBD-B02139.89±0.02y=-0.017 7+3.134 4xBD-B02639.01±0.02y=-0.068 7+3.185 5xBD-B02949.40±0.02y=10.461 6+2.679 5x

    2.4.2各菌株低溫下生長(zhǎng)量的測(cè)定結(jié)果菌株?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)快慢是反映菌株優(yōu)良性狀的指標(biāo)之一。8個(gè)白僵菌菌株在SDAY 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)有明顯的差異(表7) 。7 d時(shí)菌落生長(zhǎng)直徑從11~1.4 cm不等,其中菌株BD-B008和BD-B001生長(zhǎng)最快,BD-B021生長(zhǎng)最慢。表7不同菌株低溫下的菌落直徑

    菌株菌落直徑(cm)1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 dBD-B0080.00aA0.56aA0.70aA0.88aA1.05aA1.18aA1.40aABD-B0010.00aA0.55aA0.70abA0.90abA1.00abAB1.20aA1.38abABBD-B0170.00aA0.60aA0.70abcA0.75abcAB0.83bcABC1.20aA1.33bcABCBD-B0070.00aA0.53aA0.65abcA0.73abcAB0.85cdBC0.95aA1.23bcdABCBD-B0260.00aA0.53aA0.75abcA0.78bcAB0.85cdBC1.05aA1.22bcdABCBD-B0290.00aA0.50aA0.60abcA0.70cAB0.80cdBC1.10aA1.20bcdABCBD-B0100.00aA0.53aA0.67bcA0.81cAB0.93cdC1.10aA1.15cdBCBD-B0210.00aA0.53aA0.62cA0.76cB0.85dC0.95aA1.10dC

    2.5綜合評(píng)判白僵菌菌株的生物學(xué)性狀指標(biāo)

    綜合評(píng)判8個(gè)白僵菌菌株的抗旱能力、耐熱能力、抗紫外線能力和耐低溫能力等生物學(xué)指標(biāo)(表8)。從表8可知,對(duì)生物學(xué)性狀指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)后,BD-B017、BD-B010和BD-B026分別位列前3位,綜合對(duì)小菜蛾的毒力考慮菌株BD-B026為首選開(kāi)發(fā)菌株。表8不同菌株生物學(xué)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)

    菌株抗旱能力抗旱生長(zhǎng)

    抑制率耐熱能力抗紫外能力紫外生長(zhǎng)

    抑制率耐低溫能力抗旱生長(zhǎng)量綜合排序BD-B017242124318BD-B026181357530BD-B010474242730BD-B007826713431BD-B029313478632BD-B008765861134BD-B021538636839BD-B001657585238

    3結(jié)論與討論

    研究結(jié)果表明,不同菌株間抗逆性存在顯著差異,同一菌株對(duì)不同條件的抗逆性也不相同。表明白僵菌孢子的穩(wěn)定性除與溫度、光照和濕度有關(guān),還與孢子自身有關(guān),所以今后在進(jìn)行抗性育種和環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí),必須考慮這些因素,從而可以有效地預(yù)測(cè)孢子在環(huán)境中的宿存時(shí)間和數(shù)量,為防治策略的制定提供參考依據(jù)。綜合考慮各項(xiàng)指標(biāo),BD-B017、BD-B010 和BD-B026有較大的生產(chǎn)應(yīng)用潛力,這3個(gè)菌株的抗旱力、抗寒力、耐熱力、抗紫外線能力等生物學(xué)特性,綜合

    排序位居前列,但菌株BD-B017對(duì)小菜蛾幼蟲(chóng)的毒力相對(duì)較低,最終得出防治小菜蛾幼蟲(chóng)優(yōu)良菌株是BD-B026菌株。

    參考文獻(xiàn):

    [1]郭亞力,田學(xué)軍,羅思,等. 球孢白僵菌對(duì)斜紋夜蛾幼蟲(chóng)的致病性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(2):100-101.

    [2]李增智. 菌物在害蟲(chóng)、植病和雜草治理中的現(xiàn)狀和未來(lái)[J]. 中國(guó)生物防治,1999,15(1):35-40.

    [3]Feng M Q Poprawski T J,Khachatourians G G. Production of formulation and application of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana for insect control:current status[J]. Biocontrol Sci Technol,1994,4:3-34.

    [4]Wraight S P,Jackson M A,de Kock S L. Production,stabilization and formulation of fungal biological agents[M]//Butt T,Jackson C,Magan N. Fungi as biocontrol agents:progress,problems and potential. London:CAB International,2001:253-287.

    [5]Roberts D W,Leger R J. Metarhizium spp.,cosmopolitan insect-pathogenic fungi:mycological aspects[J]. Adv Appl Microbiol,2004,54:1-70.

    [6]蒲蟄龍. 害蟲(chóng)生物防治的原理和方法[M]. 北京:科學(xué)出版社,1978.

    [7]蒲蟄龍. 昆蟲(chóng)病理學(xué)[M]. 廣州:廣東科學(xué)技術(shù)出版社,1994:348-356.

    [8]徐慶豐. 白僵菌的防蟲(chóng)作用及其在應(yīng)用上的一些問(wèn)題[J]. 昆蟲(chóng)知識(shí),1964,8 (6):296 - 299.

    [9]張立欽,詹偉君,馬良進(jìn),等. 來(lái)自松墨天牛的白僵菌菌株的生長(zhǎng)條件及毒力模型[M]//楊懷文. 邁入21世紀(jì)的中國(guó)生物防治. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2005:191-197.李翠軍,馮典興,劉廣純. 角喙栓蚤蠅減數(shù)分裂行為觀察[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(6):125-128.

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