馬錢(qián)子堿、馬錢(qián)子粉及九分散抗炎鎮(zhèn)痛的藥效學(xué)比較研究

鄭德俊，潘婭，李晶

(1.廣州市第一人民醫(yī)院，廣東 廣州 510600;2.華南理工大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，廣東 廣州 510640)

馬錢(qián)子(semen strychnine)是馬錢(qián)科植物馬錢(qián)(Strychnos nuxvomica L)的成熟種子［1］，具散結(jié)消腫、通絡(luò)止痛之功效［2］，是治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的有效藥物，其質(zhì)地堅(jiān)硬，臨床常粉碎后使用，其所含生物堿類(lèi)成分毒性大，常配伍其他藥物作為復(fù)方運(yùn)用。九分散是以馬錢(qián)子為君藥，配伍麻黃、乳香、沒(méi)藥組成的復(fù)方［3］，具活血散瘀、消腫止痛之功，用于治療風(fēng)濕痹癥［4］。類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以關(guān)節(jié)腫脹、疼痛難忍為臨床表現(xiàn)，臨床治療主要以抗炎、鎮(zhèn)痛為主，馬錢(qián)子、九分散中起鎮(zhèn)痛、抗炎作用的有效成分及毒性成分是其生物堿類(lèi)，包含馬錢(qián)子堿(Brucine)、士的寧堿［5－6］，其中馬錢(qián)子堿的毒性比士的寧堿小?，F(xiàn)有研究也表明，馬錢(qián)子堿有良好鎮(zhèn)痛、抗炎作用，但馬錢(qián)子堿與原藥、復(fù)方療效對(duì)比如何，提純之后的單體成分藥效是增強(qiáng)還是減弱，尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

本研究通過(guò)經(jīng)典抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)對(duì)單體成分(馬錢(qián)子堿)、單味藥(馬錢(qián)子粉)及其復(fù)方(九分散)進(jìn)行了藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)比較。在同劑量條件下，比較馬錢(qián)子堿與原藥及復(fù)方在鎮(zhèn)痛、抗炎作用上的優(yōu)劣，研究單體成分藥效作用的特點(diǎn)，兼顧安全性及有效性，為進(jìn)一步合理運(yùn)用、開(kāi)發(fā)治療RA鎮(zhèn)痛藥提供理論依據(jù)。

1 材料

馬錢(qián)子購(gòu)于廣州清平藥材市場(chǎng)，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室鑒定符合《中國(guó)藥典》相關(guān)規(guī)定，馬錢(qián)子粉由馬錢(qián)子直接粉碎成粗粉制成;馬錢(qián)子堿由馬錢(qián)子經(jīng)提取濃縮精制而成(自制，含量97.8%);九分散(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠(chǎng));其余試劑均為分析純。

昆明種小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào) SCXK(粵)2008－0020。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對(duì)熱板法［7］致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用 取雌性小鼠，放入(55±0.5)℃熱板水浴中，以舔后足作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)，預(yù)測(cè)小鼠痛閾值以大于5s、小于30s為合格小鼠，將痛閾合格的40只小鼠隨機(jī)分為四組。在室溫條件下，分別口服灌胃生理鹽水、馬錢(qián)子粉、馬錢(qián)子堿、九分散，生理鹽水組灌服等量生理鹽水，其他三組劑量以臨床劑量為標(biāo)準(zhǔn)，按照人與小鼠劑量換算，確定馬錢(qián)子堿劑量為0.48mg/kg，以含馬錢(qián)子堿量計(jì)算馬錢(qián)子粉、九分散劑量，分別為 20.38mg/kg、17.46mg/kg。四組連續(xù)給藥7天，每天1次，于末次給藥0.5h、1h分別測(cè)定每只小鼠痛閾值。如60s仍無(wú)舔足反應(yīng)，則以60s計(jì)。

2.2 對(duì)冰醋酸［8］致痛小鼠扭體反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用 取小鼠40只，雌雄各半，分組及給藥方法同2.1項(xiàng)下。連續(xù)給藥7天，于第7天腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/10g，同時(shí)用秒表計(jì)時(shí)，記錄各鼠出現(xiàn)第1次扭體反應(yīng)的時(shí)間(即潛伏期)及10min內(nèi)各鼠的扭體次數(shù)。以下列公式計(jì)算藥物的鎮(zhèn)痛百分率(%)。

2.3 對(duì)小鼠耳腫脹［9］的抗炎作用 取雄性小鼠40只，分組及給藥方法同2.1項(xiàng)下。連續(xù)給藥7天后，第8天每只小鼠右耳均勻涂二甲苯0.05ml/只，致炎15min，將小鼠脫頸椎處死，用直徑8mm的打孔器沖下左右耳廓，分別在電子天平上稱(chēng)重后，按以下公式計(jì)算耳腫脹度和抑制率。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均輸入SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組計(jì)量數(shù)據(jù)以(s)表示，兩組之間的比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果與討論

3.1 對(duì)熱板法致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用 馬錢(qián)子粉、馬錢(qián)子堿與九分散對(duì)熱板致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用影響結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)熱板法致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用(n=10，s)

表1 對(duì)熱板法致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用(n=10，s)

注:與生理鹽水組相比，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;組間比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01。

組別 給藥前的痛閾(s)給藥后的痛閾(s)0.5h 1h生理鹽水組16.2 ±1.67 18.7 ±1.56 16.2 ±1.95馬錢(qián)子粉組 15.3 ±1.72 23.31 ±0.93＊＊ 22.5 ±0.42＊＊馬錢(qián)子堿組 16.7 ±1.34 38.3 ±1.33＊＊## 35.2 ±1.74＊＊##九分散組 16.5 ±2.39 25.4 ±3.40＊＊# 22.9 ±0.26＊＊

與生理鹽水組相比，給藥前各組小鼠的基礎(chǔ)痛閾值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，給藥后組間具有顯著差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。三組給藥組相比，三組制劑均于0.5h后提高熱板致痛小鼠的痛閾值，1h后降低，其中0.5、1h后馬錢(qián)子堿的鎮(zhèn)痛作用均優(yōu)于馬錢(qián)子粉組及九分散組(P＜0.01)，而0.5h九分散組作用優(yōu)于馬錢(qián)子粉組(P＜0.05)，1h后兩組鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，馬錢(qián)子堿是鎮(zhèn)痛作用的主要成分，能明顯提高小鼠痛閾值，具顯著鎮(zhèn)痛作用，且起效時(shí)間快，維持時(shí)間久，單藥及復(fù)方配伍對(duì)熱板法致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用不及單體成分，復(fù)方的鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于單藥。

3.2 對(duì)冰醋酸致痛小鼠扭體次數(shù)的鎮(zhèn)痛作用 對(duì)冰醋酸致痛小鼠扭體次數(shù)的鎮(zhèn)痛作用結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 對(duì)冰醋酸致痛小鼠扭體次數(shù)的鎮(zhèn)痛作用(n=10，s)

表2 對(duì)冰醋酸致痛小鼠扭體次數(shù)的鎮(zhèn)痛作用(n=10，s)

注:與生理鹽水組相比，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;組間比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01。

組別 扭體次數(shù) 鎮(zhèn)痛百分率(%)45.8 38.4 ±1.61 －馬錢(qián)子粉組 21.5±4.32＊＊ 44.0馬錢(qián)子堿組 15.3 ±1.37＊＊## 60.2九分散組 20.8 ±1.84＊＊生理鹽水組

結(jié)果表明，與生理鹽水組相比，給藥組均具顯著性差異，能抑制冰醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)，減少小鼠扭體次數(shù)，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。三組給藥組相比，馬錢(qián)子堿組鎮(zhèn)痛百分率最高為60.2%，優(yōu)于九分散組的45.8%及馬錢(qián)子粉組的44.0%，具顯著性差異(P＜0.01)，而九分散組與馬錢(qián)子粉組作用相當(dāng)，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，說(shuō)明單味馬錢(qián)子堿具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，單藥及復(fù)方配伍對(duì)冰醋酸致痛小鼠扭體次數(shù)的鎮(zhèn)痛作用不及單體成分，復(fù)方與單藥作用相當(dāng)。

3.3 對(duì)小鼠耳腫脹的抗炎作用 對(duì)小鼠耳腫脹的抗炎作用結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 對(duì)小鼠耳腫脹的抗炎作用(n=10，s)

表3 對(duì)小鼠耳腫脹的抗炎作用(n=10，s)

注:與生理鹽水組相比，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;組間比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01。

組別 耳腫脹度(mg)抑制率(%)55.3 22.6 ±1.22 －馬錢(qián)子粉組 15.4±2.71＊＊ 36.6馬錢(qián)子堿組 11.7 ±1.01＊＊## 48.2九分散組 10.1 ±1.15＊＊##生理鹽水組

結(jié)果表明，與生理鹽水組對(duì)比，三組均能明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹，具有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。三組相比，九分散的抗炎抑制率作用較優(yōu)，為55.3%，優(yōu)于馬錢(qián)子堿組的48.2%及馬錢(qián)子粉組的 36.6%，具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。而馬錢(qián)子堿組抗炎作用明顯優(yōu)于馬錢(qián)子粉組，具有顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明復(fù)方對(duì)小鼠耳腫脹的抗炎作用明顯優(yōu)于單體成分及單味藥，而馬錢(qián)子堿抗炎療效要明顯優(yōu)于馬錢(qián)子粉。

4 結(jié)論

馬錢(qián)子具有散結(jié)消腫止痛功效，是治療風(fēng)濕痹癥的良藥，因其有大毒，臨床使用安全范圍小。九分散是以馬錢(qián)子為主藥的經(jīng)典方，起效時(shí)間快，療效確切，因含有馬錢(qián)子口服給藥副作用大，且散劑劑量不易控制易引起中毒。因此無(wú)論單藥還是復(fù)方，盡管療效顯著，但其毒副作用都影響了在臨床的使用范圍。馬錢(qián)子堿是馬錢(qián)子的有效成分，其毒性只有同類(lèi)生物堿士的寧堿的1/8 ～1/30［10］，安全性高，因此對(duì)馬錢(qián)子堿的鎮(zhèn)痛、抗炎作用進(jìn)行研究更具有開(kāi)發(fā)意義和價(jià)值。

本研究通過(guò)經(jīng)典鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，比較了馬錢(qián)子堿與原藥粉及其復(fù)方的鎮(zhèn)痛作用。研究表明，馬錢(qián)子堿鎮(zhèn)痛作用顯著，起效快，維持時(shí)間久，0.5、1h后對(duì)熱板致痛小鼠及冰醋酸致痛小鼠扭體反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用均優(yōu)于原藥粉及九分散(P＜0.01)，提示鎮(zhèn)痛是馬錢(qián)子堿的主要功效，提純的單體優(yōu)于未提純的原藥，也優(yōu)于復(fù)方配伍的九分散，在鎮(zhèn)痛作用上，可單獨(dú)運(yùn)用馬錢(qián)子堿進(jìn)行止痛治療。

抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，馬錢(qián)子堿對(duì)二甲苯引起的小鼠耳腫脹抗炎抑制率為48.2%，低于九分散的55.3%(P＜0.05)，優(yōu)于原藥粉及生理鹽水組，具有顯著性差異(P＜0.01)，表明中藥的復(fù)方配伍增強(qiáng)了抗炎作用，方中其余三藥通過(guò)協(xié)同促進(jìn)作用增強(qiáng)了馬錢(qián)子的抗炎療效，體現(xiàn)出中藥復(fù)方配伍的優(yōu)勢(shì)?？寡捉Y(jié)果說(shuō)明，在抗炎作用上，九分散具有綜合優(yōu)勢(shì)，要優(yōu)于單體成分或單藥，提純的單體成分的抗炎作用要顯著優(yōu)于原藥粉。

從藥效結(jié)果考慮，馬錢(qián)子堿、馬錢(qián)子粉、九分散均具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用，其中馬錢(qián)子堿的鎮(zhèn)痛作用顯著，而九分散的抗炎作用較強(qiáng)，兩者的抗炎、鎮(zhèn)痛作用均優(yōu)于馬錢(qián)子粉，表現(xiàn)出單一成分和復(fù)方的各自?xún)?yōu)勢(shì)，可根據(jù)臨床用藥的目的分別選擇單體或復(fù)方進(jìn)行對(duì)癥治療。從制劑成型角度考慮，復(fù)方成分復(fù)雜，提取、制備、純化、成型工藝均較為復(fù)雜，散劑劑量不易準(zhǔn)確控制，而單體成分制備、工藝、劑型設(shè)計(jì)簡(jiǎn)便，劑量容易準(zhǔn)確控制。從安全性角度考慮，采用單體成分用藥可減少原藥粉及復(fù)方中其他生物堿類(lèi)成分的毒性反應(yīng)，同時(shí)也能克服劑量不準(zhǔn)造成的毒副作用。綜合比較，馬錢(qián)子堿在鎮(zhèn)痛作用上具有顯著優(yōu)勢(shì)，可提高安全性及有效性，具有較好的研究?jī)r(jià)值，有望進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成鎮(zhèn)痛制劑，發(fā)揮其高效的止痛作用。

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