麥冬提取物“抗腫瘤Ⅰ號(hào)”小鼠體內(nèi)抑瘤作用

張桂賢，劉大衛(wèi)，胡人杰

(天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020)

癌癥在當(dāng)今社會(huì)仍然是一個(gè)生命健康的殺手，是嚴(yán)重威脅人類的一種疾病。目前市場(chǎng)上已存在不少種類的抗癌藥物，但由于存在藥物毒性、作用差異和交叉耐藥等問題難以解決，開發(fā)新型抗腫瘤藥物一直是新藥研發(fā)的熱點(diǎn)。植物來源的抗腫瘤藥物的發(fā)現(xiàn)及抗癌機(jī)理的研究是最活躍的研究領(lǐng)域之一，目前多種抗腫瘤天然藥物已用于臨床治療。

1 實(shí)驗(yàn)材料

615小鼠、C57小鼠、裸小鼠(BALB/c,nu/nu)，SPF級(jí)；其中615小鼠由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供；其余均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(京)2012-0001。麥冬提取物，褐色固體，無明顯氣味,微溶于水(實(shí)驗(yàn)時(shí)以1%羧甲基纖維素鈉為助溶劑進(jìn)行配制)，由北京同仁堂股份有限公司提供；環(huán)磷酰胺注射劑(CTX)，為瓶裝粉針劑，200 mg/瓶，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，H32020857，產(chǎn)品批號(hào)：12041025。L615，由中國醫(yī)科院血液病研究所細(xì)胞庫提供；PG，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部病理系細(xì)胞庫提供；Lewis肺癌，由本所傳代保存。電子天平,T500型，d=0.1 g，美國雙杰兄弟(集團(tuán))公司，常州常熟雙杰測(cè)試儀器廠生產(chǎn)。電子精密天平，PB303-N型，d=0.001，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物模型的建立 1)L615的接種：615小鼠具有其特殊性，本次試驗(yàn)中先將L615細(xì)胞(由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病研究所提供)接種于615小鼠腋下(2只)作為瘤源,6 d后取其中1只斷頸處死，取其脾(本模型特點(diǎn)為動(dòng)物形成巨脾)，放入玻璃研磨器按1∶3(g/mL)比例加入適量生理鹽水研磨成細(xì)胞懸液后，接種于615小鼠的右前肢腋皮下,0.2 mL/只。此種動(dòng)物模型接種部位不形成腫瘤，而是形成白血病模型。接種后，對(duì)照組動(dòng)物7 d左右陸續(xù)出現(xiàn)死亡，觀察實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物給藥后生存期是否延長(zhǎng)，以評(píng)價(jià)藥效[1]。2)C57小鼠Lewis肺癌[2]接種、裸鼠[3]PG的接種:取生長(zhǎng)良好的7～10 d 的實(shí)體瘤荷瘤鼠2只，剔除包膜和壞死部分，將完好的瘤塊置于玻璃勻漿器內(nèi)研磨，與生理鹽水1∶3(g/mL)制成勻漿，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為5×106/mL，制成細(xì)胞懸液，接種于小鼠的右前肢腋皮下，0.2 mL/只(含細(xì)胞數(shù)1×106/mL)。整個(gè)過程均在無菌條件下操作。

2.2 給藥方案 預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，采用常規(guī)給藥方法，連續(xù)給藥7 d，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，顯示出較高的抑瘤率及病死率，遂決定采用大劑量突擊療法，即高劑量給藥3 d，中劑量2 d，低劑量1 d。經(jīng)預(yù)試后，獲得較滿意結(jié)果。給藥劑量：預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，樣品LD50在4～5 g/kg之間，設(shè)其1/5 LD50為給藥劑量，高劑量組以1 g/(kg·d)連續(xù)3 d，中劑量組以1 g/(kg·d)連續(xù)2 d，低劑量組以1 g/(kg·d)僅給1 d。共分5組：空白對(duì)照組(生理鹽水，灌胃)、環(huán)磷酰胺對(duì)照組(50 mg/kg,0.1 mL/10 g,腹腔注射)、樣品高劑量組、中劑量組和低劑量組(灌胃)。于腫瘤細(xì)胞接種后24 h開始給藥。

抗腫瘤活性分別以腫瘤抑制率和動(dòng)物生命延長(zhǎng)率評(píng)價(jià)。[4]

3 結(jié)果

3.1 抗腫瘤1號(hào)對(duì)實(shí)體型腫瘤的抑瘤作用 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組平均瘤質(zhì)量在1 g以上，最小瘤重均大于0.4 g。環(huán)磷酰胺組和抗腫瘤1號(hào)給藥組平均瘤質(zhì)量和抑瘤率與陰性對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。

抗腫瘤1號(hào)的抑瘤作用見表1、2。Lewis肺癌抑瘤作用可達(dá)61.98%，PG抑瘤作用可達(dá)73.54%。

表1 Lewis肺癌抑瘤作用

注：與空白對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01

表2 裸鼠PG抑瘤作用

注：與空白對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01

3.2 對(duì)白血病小鼠的作用 抗腫瘤1號(hào)能明顯提高對(duì)615小鼠的生存質(zhì)量,延長(zhǎng)615小鼠的帶瘤生存時(shí)間，生命延長(zhǎng)率可達(dá)到68.42%，見表3。

表3 L615白血病小鼠生命延長(zhǎng)作用(n=10)

注：與空白對(duì)照組比較，#P<0.05，###P<0.001

4 討論

各組動(dòng)物移植瘤生長(zhǎng)情況良好，試驗(yàn)?zāi)Ｐ统闪?。抗腫瘤Ⅰ號(hào)具有明顯的體內(nèi)抗腫瘤活性。而且，該樣品不論是對(duì)荷瘤鼠的抑瘤率還是對(duì)鼠的生命延長(zhǎng)率均顯示出抗腫瘤活性。隨著給藥劑量的增加，實(shí)體瘤的抑瘤率隨之增加，腹水瘤的存活時(shí)間延長(zhǎng)，體現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。

[1]Yihong Huang,Bing Du,Kailin Xu etd.同基因混合G-CSF動(dòng)員的異基因骨髓移植物誘導(dǎo)的抗白血病效應(yīng)[J].中德臨床腫瘤學(xué)雜志(英文版),2008,7(9):549-554.

[2]陳學(xué)彰,田華琴,黃志慶,等.肺積方對(duì)Lewis肺癌小鼠抑瘤率及EGFR、TNF-α表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中西醫(yī)結(jié)合研究,2013,5(1):17-20.

[3]顧丹琳,舒琦瑾,王彬彬.南方紅豆杉水提物對(duì)肺癌裸鼠抑瘤作用及生活質(zhì)量影響的研究[J].浙江中醫(yī)雜志,2013,48(11):853-854.

[4]胡釗,李永生,趙誠.粉防己堿聯(lián)合阿霉素對(duì)人膀胱癌BIU-87/ADM細(xì)胞裸鼠移植瘤抑瘤率影響的研究[J].現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志,2013,5(1):41-44.