胸腺五肽對(duì)重度創(chuàng)傷失血性休克大鼠免疫功能的影響

邵仲達(dá)，張建新，陳朔華，蔡立松，張小平，程愛國(guó)

胸腺五肽對(duì)重度創(chuàng)傷失血性休克大鼠免疫功能的影響

邵仲達(dá)，張建新，陳朔華，蔡立松，張小平，程愛國(guó)

目的觀察胸腺五肽(TP-5)對(duì)重度創(chuàng)傷失血性休克大鼠免疫功能的影響。方法54只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組，即對(duì)照組(n=6)、重度創(chuàng)傷失血性休克模型組(模型組，n=24)、TP-5復(fù)蘇組(TP-5組，n=24)，在復(fù)蘇后12 h(T1)、24 h(T2)、48 h(T3)、72 h(T4)各時(shí)間窗抽取靜脈血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)量T淋巴細(xì)胞亞群含量,并應(yīng)用ELISA法測(cè)量腸道黏液內(nèi)分泌性免疫球蛋白A(SIgA)含量。結(jié)果模型組與TP-5組病死率均為4.17%(1/24)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與對(duì)照組比較，模型組T1～4的CD+4、CD+4/CD+8、SIgA含量均明顯下降，CD+8明顯升高(P<0.01，P<0.05)；與模型組比較，TP-5組隨復(fù)蘇時(shí)間延長(zhǎng)，各項(xiàng)指標(biāo)逐漸恢復(fù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。結(jié)論早期聯(lián)合應(yīng)用TP-5復(fù)蘇治療對(duì)重度創(chuàng)傷失血性休克大鼠免疫功能有一定保護(hù)作用。

休克，創(chuàng)傷失血性；免疫功能；胸腺五肽；分泌性免疫球蛋白A；大鼠

免疫功能損傷是創(chuàng)傷失血性休克后引起諸如感染及多器官功能衰竭等并發(fā)癥，導(dǎo)致遠(yuǎn)期預(yù)后差的主要原因。胸腺五肽(thymopentin-5,TP-5)是人工合成的五肽片段，具有免疫調(diào)節(jié)功能，近年來在嚴(yán)重?zé)齻⒏闻K疾病及產(chǎn)科危重癥的治療中取得了較好效果[1，2]。本研究利用重度創(chuàng)傷失血性休克動(dòng)物模型，動(dòng)態(tài)觀察復(fù)蘇后大鼠T淋巴細(xì)胞亞群及腸道黏膜分泌性免疫球蛋白A(SIgA)含量變化，探討TP-5對(duì)其免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 動(dòng)物及分組：健康雄性SD大鼠54只 (北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供)，月齡12周，體質(zhì)量(300±10)g，在實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物房標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)1周，而后隨機(jī)分為3組：對(duì)照組(n=6)，模型組(n=24)，胸腺五肽復(fù)蘇組(TP-5組，n=24)。儀器及試劑：外科手術(shù)顯微鏡(上海手術(shù)機(jī)械廠)，BL-410生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)(四川泰盟科技有限公司)，深低溫冰箱(美國(guó)Thermo Forma公司)，M/ETM型高速自動(dòng)平衡離心機(jī)(美國(guó)SIGMA公司)，BioTek酶標(biāo)儀(美國(guó)伯騰儀器有限公司)，F(xiàn)ACSCalibur 流式細(xì)胞儀(美國(guó)Becton Dickinson公司)。單克隆抗體(美國(guó)Becton Dickinson公司)，淋巴細(xì)胞分離液(天津?yàn)笊镏破饭?，SIgA試劑盒(上海藍(lán)基生物科技有限公司)。

1.2 模型制作 所有大鼠術(shù)前禁食12 h，不禁水，手術(shù)室溫度保持在(25±2)℃。大鼠腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛0.35 ml/100 g麻醉后，將其仰臥固定于操作臺(tái)上，頸部和雙側(cè)腹股溝區(qū)備皮，0.5%碘伏消毒。逐層切開左側(cè)腹股溝區(qū)皮膚及皮下組織，分離出股靜脈行全身肝素化并置管用于復(fù)蘇，股動(dòng)脈用于放血；頸部正中偏右側(cè)縱切口，逐層切開頸部皮膚及皮下組織，于氣管旁分離出右側(cè)頸總動(dòng)脈，置管后接壓力換能器進(jìn)行持續(xù)血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)。用特制咬骨鉗致大鼠股骨干中上1/3處開放性骨折，查無明顯出血后縫合切口。骨折后即經(jīng)股動(dòng)脈插管開始緩慢放血，于10 min內(nèi)使平均動(dòng)脈壓下降至(35±5)mm Hg,并通過繼續(xù)放血或回輸血液使血壓在(35±5)mm Hg維持90 min，造模完成。根據(jù)創(chuàng)傷嚴(yán)重度評(píng)分(ISS)標(biāo)準(zhǔn)[3]，本模型符合重度創(chuàng)傷失血性休克。

1.3 大鼠分組處理 對(duì)照組只分離組織并行血管插管，不進(jìn)行放血及骨折，穩(wěn)定10 min后開始取血液及病理取材；模型組造模完成后，靜脈回輸所放血液及2倍量的復(fù)方林格氏液進(jìn)行復(fù)蘇治療并逐層縫合創(chuàng)口，待大鼠清醒后置于籠中，室溫(25±2)℃，自由進(jìn)食及飲水；TP-5組造模完成后，在常規(guī)復(fù)蘇的基礎(chǔ)上腹腔注射胸腺五肽0.35 mg·kg-1·d-1，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。模型組按照常規(guī)復(fù)蘇及TP-5組治療后12 h(T1)、24 h(T2)、48 h(T3)和72 h(T4)分別取6只大鼠進(jìn)行觀察。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.2 腸道黏液SIgA含量檢測(cè)： 各組大鼠下腔靜脈取血后顯露腸管，在距回盲部5 cm處向近端方向切取小腸組織，沿腸系膜緣剖開小腸，以細(xì)圓玻璃棒輕柔展平，長(zhǎng)軸兩端用訂書釘固定于A4打印紙片上，用PBS緩沖液輕輕洗去腸壁上殘存糞便及污垢，用載玻片輕刮黏膜表面黏液，收集入1.5 ml離心管內(nèi)，加入0.5 ml PBS緩沖液振蕩混勻, 水平離心1 000 r/min，10 min，取上清液，-20℃保存。待樣本收集后，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定腸黏液內(nèi)SIgA含量，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況比較 各組大鼠的體質(zhì)量、動(dòng)脈放血量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組復(fù)蘇后病死率為4.17%(1/24)，TP-5組亦為4.17%(1/24)，2組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量、動(dòng)脈放血量情況比較

3 討 論

嚴(yán)重創(chuàng)傷失血性休克是外科常見的重癥疾病，即使復(fù)蘇成功仍有相當(dāng)高的病死率。研究表明，創(chuàng)傷失血性休克患者免疫功能紊亂[4]，腸黏膜屏障功能損傷[5]，引起腸道內(nèi)細(xì)菌、毒素易位，甚至全身性炎性反應(yīng)及多器官功能障礙。因此改善機(jī)體的免疫功能、防止內(nèi)源性感染，越來越受到重視。

表2 各組大鼠T淋巴細(xì)胞亞群、SIgA比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，#P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，☆P<0.01

TP-5是人工合成的五肽片段，與胸腺生成素II的32～36位氨基酸順序相同，具有其全部的生物學(xué)功能，是雙向免疫調(diào)節(jié)劑。近年來廣泛應(yīng)用于嚴(yán)重?zé)齻⒏闻K疾病及產(chǎn)科危重癥等[1，2]，但治療休克較少報(bào)道。因此本研究建立臨床重度創(chuàng)傷失血性休克模型，探討TP-5對(duì)休克復(fù)蘇后免疫功能的影響。

綜上所述，TP-5有效改善休克復(fù)蘇后機(jī)體的免疫功能，維護(hù)腸道黏膜屏障作用，有助于阻斷瀑布樣連鎖反應(yīng)，降低膿毒血癥發(fā)生機(jī)會(huì)，而TP-5免疫調(diào)理功能的量效關(guān)系及藥物聯(lián)合應(yīng)用尚需進(jìn)一步研究。

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TheeffectsofTP-5resuscitatingserioustraumatichemorrhagicshockonimmunefunctioninrats

SHAOZhongda*,ZHANGJianxin,CHENShuohua,CAILisong,ZHANGXiaoping,CHENGAiguo.

*DepartmentofPostgraduates,HebeiUnitedUniversity(nowworkingatDepartmentofAnesthesiology,KailuanHospitalofOccupationalDisease),Tangshan063000,China

ZHANGXiaoping,E-mail:xpzh55@sohu.com

ObjectiveTo investigate the influence of TP-5 on immune function of rats with severe traumatic hemorrhagic shock.Methods54 healthy male SD rats were randomly divided into three groups, the control group(n=6), severe traumatic hemorrhagic shock model (model group,n=24), TP-5 resuscitation group(TP-5 group,n=24), in recovery after 12 (T1), 24 (T2), 48 (T3), 72 (T4) each time window picked up venous blood, used flow cytometry to measure the content of T lymphocyte subsets and used ELISA to measure SIgA content within intestinal mucus.ResultsModel group and TP-5 group's mortality rate were 4.17% (1/24), the difference was not statistically significant (P>0.05). Compared with the control group, model group T1-4of CD+4,CD+4/CD+8,SIgA levels were significantly decreased,CD+8was significantly higher (P<0.01,P<0.05); compared with the model group, TP-5 group with prolonged recovery, the index gradually recovered, significantly better than the model group (P<0.01,P<0.05).ConclusionCombined TP-5 early resuscitation of severe traumatic hemorrhagic shock in rats immune function have a protective effect.

Shock,traumatic hemorrhagic; Immune function; Thymopentin; Secretory immunoglobulin A; Rats

063000 唐山，河北聯(lián)合大學(xué)研究生部(邵仲達(dá)，現(xiàn)就職于開灤職業(yè)病防治院麻醉科)； 河北聯(lián)合大學(xué)附屬開灤 總醫(yī)院麻醉科(張建新、陳朔華、蔡立松)； 河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科(張小平、程愛國(guó))

張小平，E-mail:xpzh55@sohu.com

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.05.020

2014-02-11)