青蒿組分的體外抗氧化活性研究

馬文芳+郭新榮+余秀+李晉+王春鵬+王振中+成志東+常艷旭+蕭偉

[摘要] 目的 研究青蒿水提取物抗氧化活性及物質(zhì)基礎(chǔ)，為天然抗氧化劑開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。 方法 采用傳統(tǒng)加熱回流提取法，用水作為提取溶劑對(duì)青蒿中抗氧化成分進(jìn)行提取，并利用溶劑萃取、D101大孔樹(shù)脂等分離手段對(duì)水提取物進(jìn)行組分劃分，進(jìn)行DPPH自由基清除活性評(píng)價(jià)及鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力、總酚酸和總黃酮的測(cè)定。 結(jié)果 從青蒿水提取物中制備得到11個(gè)組分，且70%乙醇洗脫液（S10）、乙酸乙酯萃取物（S6）、大孔樹(shù)脂20%乙醇洗脫液（S9）的抗氧化活性較高，與其所含的總酚酸和總黃酮密切相關(guān)。 結(jié)論 本研究明確了青蒿中大孔樹(shù)脂70%乙醇洗脫液（S10）、乙酸乙酯萃取物（S6）、大孔樹(shù)脂20%乙醇洗脫液（S9）為青蒿水提取物抗氧化活性物質(zhì)基礎(chǔ)，為今后青蒿資源在天然抗氧化劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞] 青蒿；抗氧化活性；DPPH法；總黃酮；總酚酸

[中圖分類(lèi)號(hào)] R646[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-7210（2014）05（b）-0004-05

Study on antioxidant of Artemisia annua L. Fraction in vitro

MA Wenfang1 GUO Xinrong1 YU Xiu1 LI Jin1 WANG Chunpeng1 WANG Zhenzhong2 CHENG Zhidong2CHANG Yanxu1,2 XIAO Wei2

1.Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese MedicineTianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China; 2.Postdoctoral Workstation, Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Jiangsu Province, Lianyungang222001, China

[Abstract] Objective To screen antioxidant from the water extracts of A. annua L. for providing the theoretical basis for the development and application of natural antioxidants. Methods A. annua L.were extracted with water by conventional heating reflux extraction. Water extracts were separated by means of solvent extraction, D101 macroporous resin. The radical scavenging activity of fractions was evaluated by DPPH, reducing power and metal chelating capacity assay. Total phenolic and total flavonoids of antioxidant fractions were determinated. Results 11 fractions were obtained from A. annua L. Antioxidant activity of 70% ethanol eluate from macroporous resin (S10), ethyl acetate extract (S6), 20% ethanol eluate from macroporous resin (S9) fractions was higher and was highly correlated with total phenolic and total flavonoid content. Conclusion It is demonstrated that 70% ethanol eluate from macroporous resin (S10), ethyl acetate extract (S6), 20% ethanol eluate from macroporous resin (S9) are material basis for antioxidant activity of water extract from A. annua L., which can lay the foundation for resources of A. annua L. in the development and application of natural antioxidants

[Key words] Artemisia annua L.; Antioxidant activity; DPPH assay; Total phenolic acids; Total flavonoid

隨著自由基生物學(xué)深入發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到，自由基會(huì)對(duì)人體的產(chǎn)生一定的負(fù)面影響，而適當(dāng)補(bǔ)充外源性抗氧化劑或給予能促使機(jī)體內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)恢復(fù)到一定水平的藥物，可以改善這一狀況[1]?？寡趸瘎┦侵冈诘蜐舛认履苡行а泳徎蜃柚沟孜铮ǖ鞍踪|(zhì)、脂質(zhì)、糖和DNA）氧化的物質(zhì)[2]。目前抗氧化劑依據(jù)其來(lái)源可分為兩大類(lèi)：化學(xué)合成抗氧化劑和天然抗氧化劑?，F(xiàn)代研究表明化學(xué)合成的抗氧化劑，如二丁基羥基甲苯（BHT）、丁基羥基茴香醚（BHA）、沒(méi)食子酸丙酯（PG）和特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）具有一定的毒性和致癌作用，其應(yīng)用范圍受到一定的限制，而天然抗氧化劑因其具有無(wú)毒副作用、無(wú)殘留、無(wú)污染、穩(wěn)定、安全等優(yōu)點(diǎn)，符合人們對(duì)健康、安全新需求，而越來(lái)越受到人們的關(guān)注。天然抗氧化劑的研究在醫(yī)藥學(xué)、保健與功能食品、美容養(yǎng)顏?zhàn)o(hù)膚等領(lǐng)域均有非常重要的意義[3]。

現(xiàn)代研究表明某些中藥具有明顯的抗氧化活性，并與其所含各種各樣的天然產(chǎn)物，如酚酸、黃酮類(lèi)化合物和丹寧酸等密切相關(guān)。近年來(lái)，中藥的抗氧化活性受到研究者的關(guān)注，取得了許多研究成果[4-6]。因此，中藥資源可作為高效的天然抗氧化劑篩選的一個(gè)重要來(lái)源。

青蒿（黃花蒿，Artemisia annua L.）為菊科蒿屬（Arte misia）一年生草本植物[7]。味苦，性寒而芳香，入肝、膽經(jīng)。本品苦寒以清熱，芳香而透散，長(zhǎng)于清泄肝膽和血分之熱，可使陰分伏熱由陰分透出陽(yáng)分。常用治暑邪發(fā)熱、溫邪傷陰發(fā)熱、瘧疾寒熱、骨蒸勞熱以及血分有熱的風(fēng)疹瘙癢等癥[8]。

目前對(duì)青蒿中抗氧化活性的研究不多，僅有少量文獻(xiàn)對(duì)青蒿中水提取物、黃酮類(lèi)化合物的抗氧化進(jìn)行報(bào)道，而有關(guān)青蒿中的抗氧化活性物質(zhì)基礎(chǔ)的未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬根據(jù)青蒿的傳統(tǒng)提取方法，利用溶劑萃取、D101大孔樹(shù)脂等分離手段對(duì)水提取物進(jìn)行組分劃分，并進(jìn)行DPPH自由基清除活性評(píng)價(jià)，明確青蒿抗氧化活性組分，擬為從青蒿篩選天然抗氧化劑提供實(shí)驗(yàn)參考依據(jù)，為今后青蒿資源在天然抗氧化劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

1.1.1 儀器

RE-5205/RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；TDL-5-B型臺(tái)式低速離心機(jī)（湖南星科科學(xué)儀器有限公司）；電熱真空干燥箱（天津市天宇實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；BP121S萬(wàn)分之一天平（德國(guó)賽托利斯公司）；XW-80A微型漩渦混合儀（上海滬西儀器廠有限公司）；KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；MODEL2-16A高速離心機(jī)（TOMOS）；202-0型臺(tái)式干燥箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；多功能微孔板分析儀（美國(guó)Molecular Devices 公司）。

1.1.2 試劑與藥材

1.1.2.1 試劑D101型大孔吸附樹(shù)脂（天津市海光化工有限公司）；甲醇，乙腈為色譜純（天津康科德有限公司）；蘆丁，沒(méi)食子酸（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；DPPH（Sigma-aldrich）；甲酸（TEDIA Company，USA）水為超純水（Millipone），其余試劑均為分析純。

1.1.2.2 藥材青蒿（江蘇康源股份有限公司青蒿基地）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 青蒿組分的制備

稱(chēng)取青蒿飲片0.5 kg，置于10 L圓底燒瓶中，加6 L蒸餾水，浸泡12 h，加熱回流2 h，濾過(guò)，剩余殘?jiān)尤? L蒸餾水，加熱回流2 h，濾過(guò)，合并濾液，60℃減壓濃縮至700 mL，取50 mL母液作為S1，剩余母液70%醇沉，靜置12 h。醇沉溶液14 000 r/min，離心10 min，得沉淀S2和上清液，上清液于60℃減壓濃縮至400 mL，取50 mL作為S3。剩余溶液用等體積石油醚萃取，得石油醚萃取物S4，取剩余溶液50 mL作為S5，然后剩余溶液用等體積乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物S6，取剩余溶液50 mL作為S6。過(guò)D101大孔樹(shù)脂，分別用兩個(gè)柱體積的蒸餾水，20%乙醇，70%乙醇，95%乙醇進(jìn)行洗脫，得S8~S11。將S8~S11置于水浴鍋上揮干，然后放入60℃真空干燥箱中干燥約8 h，至恒重取出，稱(chēng)量。

1.2.2 青蒿組分清除DPPH自由基活性研究

二苯基苦味肼基自由基[DPPH·]是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，在517 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。[DPPH·]醇溶液呈紫色，其濃度與吸光度呈線性關(guān)系。在[DPPH·]乙醇溶液中加入樣品后，樣品可以與[DPPH·]結(jié)合或發(fā)生替代，使[DPPH·]數(shù)量減少，溶液顏色變淺，表現(xiàn)為：其在517 nm波長(zhǎng)處的吸光度不斷減小，直至達(dá)到穩(wěn)定[9]。清除率計(jì)算公式為：K=[1-（A1-A2）/Ao]×100%，其中Ao為空白對(duì)照液的吸光度，A1為加入待測(cè)液后的吸光度，A2為待測(cè)液的本底吸收值?？寡趸瘎┣宄杂苫芰Σ捎们宄鼶PPH的半清除率（IC50值）表示[10-11]。所需濃度越低，表明半清除率越高，抗氧化劑的自由基清除能力越強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)用比色法測(cè)定青蒿各組分的總體抗氧化能力，以VC、VE為陽(yáng)性對(duì)照藥物，平行測(cè)定3次，取平均值。

稱(chēng)取適量青蒿組分S1~S11和VC、VE用適宜溶劑溶解配制成1 mg/mL后，按一定濃度配制后，分別取400 μL放于eppendorf管中，加入400 μL的100 μg/mL DPPH，渦旋30 s，在室溫下放置30 min后，吸取200 μL于96孔板。每個(gè)濃度平行制備3份，于微型多功能酶標(biāo)儀517 nm下測(cè)定，VC和VE作為陽(yáng)性對(duì)照[12]，并以VC、VE的濃度（X）為橫坐標(biāo)，抑制率（Y）為縱坐標(biāo)，繪制VC、VE的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，利用回歸方程求出供試品溶液中折合VC、VE的濃度（總抗氧化活性），并計(jì)算青蒿組分中總抗氧化活性的含量。每個(gè)樣品平行制備3份，每次平行測(cè)定3個(gè)復(fù)孔，取平均值。其中總抗氧化活性的含量包括相對(duì)總抗氧化活性的含量和絕對(duì)總抗氧化活性的含量。

青蒿組分抗氧化劑含量（mg/g）=CD/W，其中W為青蒿組分S1～S11的重量（g），C為供試品溶液中折合VC、VE的濃度（mg/mL），D為稀釋因素。青蒿組分等價(jià)于原藥材的抗氧化劑總量（mg/kg）=CDE/W，其中W為青蒿組分S1～S11的重量（kg），C為供試品溶液中折合VC、VE的濃度（mg/mL），D為稀釋因素，E為產(chǎn)率。

1.2.3青蒿組分鐵離子還原能力評(píng)價(jià)

精密稱(chēng)取各樣品1 mg，加入甲醇和水混合溶劑溶解，分別取0.2 mL樣品溶液，加入1 mL磷酸鹽緩沖液（0.2 mol/L，pH 6.6），和1 mL鐵氰化鉀（1%，W/V），混合均勻后在50℃水浴放置20 min，加入1 mL三氯乙酸（10%，W/V）混合后，取上清液1 mL加入1 mL水，加入0.2 mL的氯化鐵溶液（0.1%，W/V），30 min后，在700 nm下紫外檢測(cè)，以沒(méi)食子酸值計(jì)算。

1.2.4 青蒿組分亞鐵離子螯合能力評(píng)價(jià)

1 mL FeSO4（0.025 mmol/L）加入不同稀釋倍數(shù)的樣品溶液1 mL，接著加入1 mL Ferrozine（0.25 mmol/L），10 min后在562 nm下紫外檢測(cè)，以甲醇-水溶劑代替樣品為對(duì)照。螯合效率=（1-Asample/Acontrol）×100，以EC50（CEC50）表達(dá)。

1.2.5 青蒿提取物總酚酸和總黃酮的含量測(cè)定

1.2.5.1 青蒿提取物總酚酸的含量測(cè)定分別精密吸取不同體積的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋到200、100、50、20、10、5、1 μg/mL，分別取對(duì)照品溶液100 μL加入500 μL FCR（1∶10，V/V），渦旋30 s，加入400 μL的Na2CO3（7.5%，M/V），30℃反應(yīng)90 min后，吸取200 μL于96孔板中。每個(gè)濃度平行制備3份，于微型多功能酶標(biāo)儀765 nm下測(cè)定，以待測(cè)液的本底溶液為空白對(duì)照[13]。以對(duì)照品的濃度（X）為橫坐標(biāo)，吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，繪制沒(méi)食子酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

分別取100 μL供試品溶液加入500 μL FCR （1℃10，V/V），渦旋30 s，接著加入400 μL Na2CO3 （7.5%，M/V），30℃反應(yīng)90 min后，吸取200 μL于96孔板中，每個(gè)樣品平行制備3份，每次平行測(cè)定3個(gè)復(fù)孔，取平均值。按沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測(cè)定其吸光度，利用回歸方程求出供試品溶液中折合沒(méi)食子酸的濃度（總酚酸），并計(jì)算青蒿組分中總酚酸的含量。計(jì)算公式：總酚酸含量（%）=CD/W×100%，其中W為青蒿組分S1~S11的重量（g），C為供試品溶液中折合沒(méi)食子酸的濃度（mg/mL），D為稀釋因素。

1.2.5.2 青蒿提取物總黃酮的含量測(cè)定分別精密吸取不同體積的蘆丁對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋成80、70、60、50、40、30、20、10、5 μg/mL。分別取1 mL于eppendorf管中，加入100 μL的NaNO2（5%），靜置6 min后，加入100 μL的AlCl3（10%），靜置6 min，然后加入1 L的NaOH（5%），混合均勻，吸取200 μL于96孔板中，每個(gè)濃度平行制備3份。用微型多功能酶標(biāo)儀全波長(zhǎng)掃描，于415 nm下測(cè)定，以待測(cè)液的本底溶液為空白對(duì)照[14]。以對(duì)照品的濃度（X）為橫坐標(biāo)，吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

精密稱(chēng)取青蒿組分S1～S11，用適宜溶劑溶解配制成1 mg/mL（S4，S6組分樣品用甲醇溶解，其余組分樣品用40%甲醇溶解），作為供試品溶液。分別取500 μL，加入50 μL的NaNO2（5%），靜置6 min后，加入50 μL的AlCl3（10%），靜置6 min，然后加入500 μL的NaOH（5%），混合均勻，吸取200 μL于96孔板中，每個(gè)樣品平行制備3份，每次平行測(cè)定3個(gè)復(fù)孔，取平均值。按蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測(cè)定其吸光度，利用回歸方程求出供試品溶液中折合蘆丁的濃度（總黃酮），并計(jì)算青蒿組分中總黃酮的含量。計(jì)算公式：總黃酮含量（%）=CD/W×100%，其中W為青蒿組分S1～S11的重量（g），C為供試品溶液中折合黃酮的濃度（mg/mL），D為稀釋因素。

2 結(jié)果

2.1 青蒿組分的得率

通過(guò)提取分離所得的S1～S11個(gè)組分的產(chǎn)率分別為20.16%、4.12%、15.33%、0.14%、14.00%、1.25%、12.29%、8.51% 1.02%、1.96%和0.02%。

2.2 青蒿組分抗氧化活性比較研究

2.2.1 青蒿組分清除DPPH自由基的能力比較研究

采用DPPH法對(duì)青蒿不同組分進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示各組分均具有一定的抗氧化作用。以VC和VE作為陽(yáng)性對(duì)照，IC50為指標(biāo)，對(duì)不同青蒿組分的抗氧化活性進(jìn)行比較研究（表1）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：11個(gè)組分清除DPPH自由基能力排序?yàn)椋篠10>S6>S9>S1>S3>S2>S11>S7>S5>S8>S4；當(dāng)以IC50≤100 μg/mL為臨界值，所制備的組分S6[（72.40±1.11）μg/mL]、S9[（84.85±0.50）μg/mL]和S10[（58.37±0.85）μg/mL]具有較強(qiáng)的抗氧化活性，但均低于陽(yáng)性對(duì)照物VC、VE。

表1 青蒿組分與VC、VE的IC50值（μg/mL，x±s，n=3）

2.2.2 青蒿組分抗氧化活性物質(zhì)含量比較研究

本研究以VC、VE為陽(yáng)性對(duì)照藥物，建立了量效關(guān)系曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在1～13 μg/mL、15～45 μg/mL范圍，VC、VE的濃度與各自抑制率呈良好的線性關(guān)系，回歸方程分別為Y=4.525X-6.299（r=0.996），Y=1.500X-0.137（r=0.999）。根據(jù)各組分的抑制率，以等價(jià)的VC、VE的量為指標(biāo)，對(duì)其所含抗氧化劑含量進(jìn)行了測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可知1 g S6、S9和S10提取物分別等價(jià)于（144.92±2.60）、（111.32±0.33）、（163.91±4.20）mg的VC，相當(dāng)于（515.19±7.83）、（389.44±1.00）和（580.27±12.70）mg的VE，因此青蒿組分S6、S9和S10具有較好的抗氧化活性，可用于進(jìn)一步天然抗氧化劑篩選。

表2 青蒿組分中抗氧化活性物質(zhì)的含量（mg/g，x±s）

2.3 青蒿組分鐵離子還原能力的評(píng)價(jià)

不同濃度的青蒿組分鐵離子還原能力評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表3，S10、S9和S6具有較強(qiáng)的還原能力，其中組分S10和S6的活性?xún)?yōu)于人工合成的抗氧化劑二丁基羥基甲苯（BHT）的活性。

表3 青蒿組分還原能力（x±s，n=3）

2.4 青蒿組分亞鐵離子螯合能力

以VC作為陽(yáng)性對(duì)照，IC50為指標(biāo)，對(duì)不同青蒿組分的亞鐵離子螯合能力進(jìn)行比較研究（表4）。表4發(fā)現(xiàn)：10個(gè)組分亞鐵離子螯合能力排序?yàn)椋篠2>S8>S1>S7>S9>S4>S3>S10>S5>S6>S4；當(dāng)以IC50≤1000 μg/mL為臨界值，所制備的組分S2、S1和S8具有較強(qiáng)的亞鐵離子螯合能力，但均高于陽(yáng)性對(duì)照物Vc。

表4 青蒿組分的亞鐵離子螯合能力（μg/mL，x±s，n=3）

2.5 青蒿組分抗氧化活性相關(guān)物質(zhì)研究

近年來(lái)的研究表明，植物抗氧化活性與植物中所含酚酸類(lèi)和黃酮類(lèi)化合物密切相關(guān)，為了闡明青蒿發(fā)揮抗氧化活性物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究選用福林試劑法測(cè)定總酚酸含量，三氯化鋁比色法測(cè)定總黃酮含量。

2.5.1 總酚酸含量測(cè)定

本研究以沒(méi)食子酸為陽(yáng)性對(duì)照，建立了沒(méi)食子酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明在1～200 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=0.0016x-0.0005（r=0.999）。

利用福林試劑法對(duì)S1～S11的總酚酸含量進(jìn)行了測(cè)定（表5），結(jié)果表明11個(gè)組分中中均含有一定量的酚酸，其中S10[（90.51±0.02）mg/g]、S6[（83.47±0.60）mg/g]和S9[（81.81±0.80）mg/g]的酚酸含量最高，與其抗氧化活性IC50具有較好的相關(guān)性。

2.5.2總黃酮測(cè)定

本研究以蘆丁為陽(yáng)性對(duì)照，建立了蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明在1～80 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=0.0062x-0.0108（r=0.999）。利用三氯化鋁比色法對(duì)S1～S11的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定（表5），結(jié)果表明11個(gè)組分中中均含有一定量的黃酮，其中S10[（73.72±0.77）mg/g]、S6[（53.85±0.30）mg/g]和S9[（69.76±1.13）mg/g]的總黃酮含量最高，并與其抗氧化活性IC50具有較好的相關(guān)性。

表5 青蒿中11個(gè)組分的總酚酸含量和總黃酮含量（mg/g，x±s，n=3）

上述研究表明，青蒿各組分具有抗氧化活性，其中組分S10、S6和S9抗氧化活性最強(qiáng)，其發(fā)揮抗氧化的物質(zhì)基礎(chǔ)可能是其酚酸和黃酮類(lèi)化合物。

3 討論

從青蒿水提取物中制備得到11個(gè)組分，利用DPPH法、還原能力法與亞鐵離子螯合法對(duì)青蒿組分的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定，且使用福林試劑法與三氯化鋁比色法對(duì)其總酚酸和總黃酮進(jìn)行了定量研究，發(fā)現(xiàn)了青蒿中70%乙醇大孔樹(shù)脂洗脫液（S10）、乙酸乙酯萃取物（S6）、20%乙醇大孔樹(shù)脂洗脫液（S9）具有較強(qiáng)的抗氧化活性。青蒿不同組分抗氧化能力的強(qiáng)弱與總酚酸和總黃酮的含量有明顯相關(guān)性，說(shuō)明酚酸和黃酮可能是主要的活性物質(zhì)；青蒿水溶液（S1），青蒿多糖組分（S2）和大孔樹(shù)脂水洗脫物（S8）具有較強(qiáng)的亞鐵離子螯合能力，在亞鐵離子的螯合能力方面卻顯著高于其他組分。本研究制備了青蒿不同標(biāo)準(zhǔn)組分，結(jié)合此多種方法對(duì)青蒿組分的抗氧化活性進(jìn)行了較為全面的評(píng)價(jià)，初步闡明了各組分的抗氧化活性，為青蒿作為天然抗氧化劑資源開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

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[4]樸香淑，樸香蘭，洪承權(quán).中藥連翹體外抗氧化作用的研究[J].中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)，2008，17（1）：77-81.

[5]彭偉文，洪暉菁.幾味姜科和豆科類(lèi)中藥抗氧化性能的研究[J].時(shí)珍國(guó)藥研究，1998，9（2）：146.

[6]公衍玲，金宏，玄光善.7種中藥水提物體外抗氧化活性研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7（29）：863-865.

[7]黃紅英，鄧斌，張曉軍，等.青蒿中黃酮類(lèi)化合物的提取及其抗氧化性研究[J].安徽業(yè)科學(xué)農(nóng)，2009，37（7）：3037-3039.

[8]金美花.青蒿的藥理作用與臨床新用[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009，25（15）：2352.

[9]孫濤付，雪艷，張蓓，等.DPPH法測(cè)定沙棘籽原花青素清除自由基的能力[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，31（1）：26-27.

[10]鄭德勇.竹葉提取物清除DPPH自由基的測(cè)定方法[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，34（1）：59.

[11]Mirella N，Gaulejac N. Comparative study of polyphenol scavenging activities assessed by different methods [J]. J Agric Food Chem，1999，47（2）：425-431.

[12]Blois MS. Antioxidant determination by the use of a stable free radical [J]. Nature，1958，（181）：1199-1200.

[13]Mohammad A，Esmaeili AS. Antioxidant，free radical scavenging activities of Salvia brachyantha and its protective effect against oxidative cardiac cell injury [J]. Food and Che mical Toxicology，2010，（48）：846-853.

[14]祝德秋，羅啟劍，崔嵐，等.連錢(qián)草-小薊混合粉中總黃酮的含量測(cè)定[J].華西藥學(xué)雜志，2003，18（6）：477-478.

（收稿日期：2014-01-26本文編輯：衛(wèi)軻）

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)課題（編號(hào)2010ZX09502-005）；中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)2012T50225）。

[作者簡(jiǎn)介] 馬文芳（1988-），女，天津中醫(yī)藥大學(xué)2011級(jí)中藥學(xué)專(zhuān)業(yè)在讀碩士研究生，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

[通訊作者] 常艷旭（1981.12-），男，博士，副研究員，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。蕭偉，博士，研究員，高級(jí)工程師，從事中藥新劑型的研究與開(kāi)發(fā)。

·編讀往來(lái)·

正文主體部分之“討論”

1.著重討論研究結(jié)果的創(chuàng)新之處及從中導(dǎo)出的結(jié)論，包括理論意義、實(shí)際應(yīng)用價(jià)值、局限性，及其對(duì)進(jìn)一步研究的啟示等。如果不能導(dǎo)出結(jié)論，也可通過(guò)討論，提出建議、設(shè)想、改進(jìn)意見(jiàn)或待解決的問(wèn)題等。

2.應(yīng)將本研究結(jié)果與其他有關(guān)的研究相比較，并將本研究結(jié)論與目的聯(lián)系起來(lái)討論。

3.不必重述已在前言部分介紹過(guò)的背景和在結(jié)果部分詳述過(guò)的數(shù)據(jù)或資料。不應(yīng)列入圖或表。

[4]樸香淑，樸香蘭，洪承權(quán).中藥連翹體外抗氧化作用的研究[J].中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)，2008，17（1）：77-81.

[5]彭偉文，洪暉菁.幾味姜科和豆科類(lèi)中藥抗氧化性能的研究[J].時(shí)珍國(guó)藥研究，1998，9（2）：146.

[6]公衍玲，金宏，玄光善.7種中藥水提物體外抗氧化活性研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7（29）：863-865.

[7]黃紅英，鄧斌，張曉軍，等.青蒿中黃酮類(lèi)化合物的提取及其抗氧化性研究[J].安徽業(yè)科學(xué)農(nóng)，2009，37（7）：3037-3039.

[8]金美花.青蒿的藥理作用與臨床新用[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009，25（15）：2352.

[9]孫濤付，雪艷，張蓓，等.DPPH法測(cè)定沙棘籽原花青素清除自由基的能力[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，31（1）：26-27.

[10]鄭德勇.竹葉提取物清除DPPH自由基的測(cè)定方法[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，34（1）：59.

[11]Mirella N，Gaulejac N. Comparative study of polyphenol scavenging activities assessed by different methods [J]. J Agric Food Chem，1999，47（2）：425-431.

[12]Blois MS. Antioxidant determination by the use of a stable free radical [J]. Nature，1958，（181）：1199-1200.

[13]Mohammad A，Esmaeili AS. Antioxidant，free radical scavenging activities of Salvia brachyantha and its protective effect against oxidative cardiac cell injury [J]. Food and Che mical Toxicology，2010，（48）：846-853.

[14]祝德秋，羅啟劍，崔嵐，等.連錢(qián)草-小薊混合粉中總黃酮的含量測(cè)定[J].華西藥學(xué)雜志，2003，18（6）：477-478.

（收稿日期：2014-01-26本文編輯：衛(wèi)軻）

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)課題（編號(hào)2010ZX09502-005）；中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)2012T50225）。

[作者簡(jiǎn)介] 馬文芳（1988-），女，天津中醫(yī)藥大學(xué)2011級(jí)中藥學(xué)專(zhuān)業(yè)在讀碩士研究生，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

[通訊作者] 常艷旭（1981.12-），男，博士，副研究員，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。蕭偉，博士，研究員，高級(jí)工程師，從事中藥新劑型的研究與開(kāi)發(fā)。

·編讀往來(lái)·

正文主體部分之“討論”

1.著重討論研究結(jié)果的創(chuàng)新之處及從中導(dǎo)出的結(jié)論，包括理論意義、實(shí)際應(yīng)用價(jià)值、局限性，及其對(duì)進(jìn)一步研究的啟示等。如果不能導(dǎo)出結(jié)論，也可通過(guò)討論，提出建議、設(shè)想、改進(jìn)意見(jiàn)或待解決的問(wèn)題等。

2.應(yīng)將本研究結(jié)果與其他有關(guān)的研究相比較，并將本研究結(jié)論與目的聯(lián)系起來(lái)討論。

3.不必重述已在前言部分介紹過(guò)的背景和在結(jié)果部分詳述過(guò)的數(shù)據(jù)或資料。不應(yīng)列入圖或表。

[4]樸香淑，樸香蘭，洪承權(quán).中藥連翹體外抗氧化作用的研究[J].中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)，2008，17（1）：77-81.

[5]彭偉文，洪暉菁.幾味姜科和豆科類(lèi)中藥抗氧化性能的研究[J].時(shí)珍國(guó)藥研究，1998，9（2）：146.

[6]公衍玲，金宏，玄光善.7種中藥水提物體外抗氧化活性研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7（29）：863-865.

[7]黃紅英，鄧斌，張曉軍，等.青蒿中黃酮類(lèi)化合物的提取及其抗氧化性研究[J].安徽業(yè)科學(xué)農(nóng)，2009，37（7）：3037-3039.

[8]金美花.青蒿的藥理作用與臨床新用[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009，25（15）：2352.

[9]孫濤付，雪艷，張蓓，等.DPPH法測(cè)定沙棘籽原花青素清除自由基的能力[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，31（1）：26-27.

[10]鄭德勇.竹葉提取物清除DPPH自由基的測(cè)定方法[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，34（1）：59.

[11]Mirella N，Gaulejac N. Comparative study of polyphenol scavenging activities assessed by different methods [J]. J Agric Food Chem，1999，47（2）：425-431.

[12]Blois MS. Antioxidant determination by the use of a stable free radical [J]. Nature，1958，（181）：1199-1200.

[13]Mohammad A，Esmaeili AS. Antioxidant，free radical scavenging activities of Salvia brachyantha and its protective effect against oxidative cardiac cell injury [J]. Food and Che mical Toxicology，2010，（48）：846-853.

[14]祝德秋，羅啟劍，崔嵐，等.連錢(qián)草-小薊混合粉中總黃酮的含量測(cè)定[J].華西藥學(xué)雜志，2003，18（6）：477-478.

（收稿日期：2014-01-26本文編輯：衛(wèi)軻）

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)課題（編號(hào)2010ZX09502-005）；中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)2012T50225）。

[作者簡(jiǎn)介] 馬文芳（1988-），女，天津中醫(yī)藥大學(xué)2011級(jí)中藥學(xué)專(zhuān)業(yè)在讀碩士研究生，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

[通訊作者] 常艷旭（1981.12-），男，博士，副研究員，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。蕭偉，博士，研究員，高級(jí)工程師，從事中藥新劑型的研究與開(kāi)發(fā)。

·編讀往來(lái)·

正文主體部分之“討論”

1.著重討論研究結(jié)果的創(chuàng)新之處及從中導(dǎo)出的結(jié)論，包括理論意義、實(shí)際應(yīng)用價(jià)值、局限性，及其對(duì)進(jìn)一步研究的啟示等。如果不能導(dǎo)出結(jié)論，也可通過(guò)討論，提出建議、設(shè)想、改進(jìn)意見(jiàn)或待解決的問(wèn)題等。

2.應(yīng)將本研究結(jié)果與其他有關(guān)的研究相比較，并將本研究結(jié)論與目的聯(lián)系起來(lái)討論。

3.不必重述已在前言部分介紹過(guò)的背景和在結(jié)果部分詳述過(guò)的數(shù)據(jù)或資料。不應(yīng)列入圖或表。