MMP-2MMP-9及其抑制因子TIMP-2TIMP-1聯(lián)合檢測對宮頸癌浸潤轉移潛能的預測價值

游泳+杜瑩瑩+曹媛+李真珍+張勝軍

[摘要] 目的 分析基質金屬蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9及其抑制因子2（TIMP-2）和TIMP-1聯(lián)合檢測對宮頸癌浸潤轉移潛能的預測價值。 方法 選取經(jīng)病理證實的宮頸浸潤癌患者112例（ICC組）、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變患者56例（CIN組）；同時，選取正常宮頸組織標本30例為對照組。采用SABC法行免疫組織化學檢測MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1的表達情況。比較3組相關因子陽性表達率的差異，并分析ICC組各因子陽性表達率與臨床病理參數(shù)的關系。 結果 ICC組MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于CIN組和對照組，TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率顯著低于CIN組和對照組（P<0.05）。ICC組中，MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率與國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期、組織學分級、分化程度、脈管浸潤和淋巴結轉移有關（P<0.05）。 結論 MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有關，其可作為評估宮頸癌侵襲轉移潛能的重要指標。

[關鍵詞] 基質金屬蛋白酶；基質金屬蛋白酶組織抑制物；宮頸癌

[中圖分類號] R737.33[文獻標識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）05（c）-0104-04

Evaluated value of invasion and metastasis of combined examination of MMP-2,MMP-9 and TIMP-2,TIMP-1 in cervical cancer

YOU Yong1 DU Ying-ying1 CAO Yuan1 LI Zhen-zhen2 ZHANG Sheng-jun2

1.Department of Gynaecology and Obstetrics,the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China;2.The Open Key Laboratory of Clinical Medical Experimental Research of Universities in Henan Province,Zhengzhou 450052,China

[Abstract] Objective To investigate the evaluated value of invasion and metastasis of combined examination of matrix metalloproteinase (MMP-2,MMP-9) and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase (TIMP-2,TIMP-1) in cervical cancer. Methods 112 cases of patients with early invasive cervical cancer (ICC) and 56 cases of patients with cervical intraepithelial neoplasm (CIN) were selected,and 30 cases of normal cervical epithelium (NCE) were selected as control group.The expression of MMP-2,MMP-9,TIMP-2 and TIMP-1 were examined by SABC method of immunohistochemistry.Expression rate of every factor in different groups and the factors related to clinical pathology of ICC group were analyzed. Rusults Compared with control group and CIN group,expression rate of MMP-2,MMP-9 in ICC group were higher,TIMP-2 and TIMP-1 in ICC group were lower (P<0.05).In ICC group,expression rate of MMP-2,MMP-9,TIMP-2,TIMP-1 were correlated with FIGO clinical stage,histological grading,differentiated degree,intravascular infiltration and lymph node metastasis (P<0.05). Conclusion MMP-2,MMP-9 and TIMP-2,TIMP-1 may play an important role in ivasion and metastasis of cervical cancer.The expression can be used to estimate the metastasis potentiality.

[Key words] Matrix metalloproteinase;Tissue inhibitor of matrix metalloproteinase;Cervical cancer

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，位居生殖器官腫瘤死因的首位。雖然以手術、化療和放療為主的綜合治療的療效有所提高，但預后仍不甚理想[1]。腫瘤的侵襲和轉移是導致宮頸癌患者預后不佳的主要原因[2]，如何有效預測宮頸癌的侵襲轉移潛能是當前亟待解決的課題。基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）在腫瘤的發(fā)生、侵襲轉移中發(fā)揮重要作用，其抑制物（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMPs）可特異性抑制MMPs的活性[3]。目前，已有少量文獻對MMPs/TIMPs在宮頸癌中的表達情況進行報道[4]，但有關聯(lián)合檢測MMPs和TIMPs預測宮頸癌浸潤轉移潛能的研究較少。本研究分析宮頸癌患者MMP-2、MMP-9及其抑制劑TIMP-2、TIMP-1的表達情況及其聯(lián)合檢測對宮頸癌浸潤轉移潛能的預測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年3月～2013年12月本院收治的早期宮頸浸潤癌患者112例（ICC組），年齡35～70歲，平均（59.8±5.5）歲；按照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）標準[5]分期：Ⅰa期21例，Ⅰb期27例，Ⅱa期28例，Ⅱb期36例；組織學分級：G1 20例，G2 32例，G3 60例；組織學類型：鱗癌83例，腺癌29例；伴有脈管浸潤36例，盆腔淋巴結轉移30例。另選取手術治療的宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變患者56例（CIN組）。年齡34～68歲，平均（57.8±6.0）歲。同時，取同期正常宮頸組織標本30例為對照組，年齡35～69歲，平均（55.6±5.8）歲。所有標本均經(jīng)病理學確診，患者均未合并結締組織病和免疫系統(tǒng)疾病，術前均未接受過放療、化療、免疫、冷凍和激光等治療。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑即用型鼠抗人MMP-2、MMP-9免疫組織化學試劑盒由北京中山生物制品有限公司提供；即用型鼠抗人TIMP-2、TIMP-1多克隆抗體由武漢博士德生物工程有限公司提供；HIGH-SABC試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供；DAB顯色試劑盒由北京中山生物工程公司提供。

1.2.2 實驗方法取ICC組和CIN組切除的病變組織標本1份；對照組任取宮頸組織1份。標本經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋備用。厚度4 μm連續(xù)定向切片，處理后用于免疫組織化學染色和HE染色。免疫組織化學檢測用SABC法，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。用磷酸鹽緩沖鹽液（PBS）代替一抗作陰性對照，用已知的免疫組織化學染色陽性的宮頸切片（試劑公司提供）作陽性對照。結果判定[6]：采用雙盲法，由兩位醫(yī)師獨立觀察每張切片后共同判斷；陽性染色為細胞質或細胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒沉著。

1.2.3 參數(shù)記錄和比較記錄各個因子（MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2）的表達情況；比較各組相關因子的陽性表達率。同時記錄ICC組患者年齡、FIGO分期、組織學分級、大體類型、組織類型、分化程度、脈管浸潤和淋巴結轉移等臨床病理情況，分析臨床病理參數(shù)與各因子陽性表達率的關系。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以x±s表示，采用t檢驗和方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 3組相關因子陽性表達率的比較

ICC組MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于CIN組和對照組，TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率顯著低于CIN組和對照組（P<0.05）；CIN組MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于對照組，TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率顯著低于對照組（P<0.05）（表1）。

表1 3組相關因子陽性表達率的比較[n（%）]

2.2 臨床病理參數(shù)與相關因子陽性表達率的關系

ICC組中，Ⅱ期、G3級、低分化、有脈管浸潤、有淋巴結轉移的患者MMP-2和MMP-9的陽性表達率分別顯著高于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者（P<0.05），而TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率分別顯著低于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者（P<0.05）。各因子的陽性表達率在不同大體類型、不同組織類型之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表2）。

3 討論

宮頸癌早期可發(fā)生浸潤轉移，預后較差，嚴重威脅女性的生命健康。如何有效預測宮頸癌的侵襲與轉移能力，對制訂正確的治療方案及判斷預后具有重要的意義[7]。不過目前尚未發(fā)現(xiàn)具有特異性的生物學指標可有效預測宮頸癌的侵襲與轉移能力[8]。

MMPs在腫瘤的侵襲和轉移中發(fā)揮重要作用。MMPs通過降解ECM，破壞基底膜屏障及局部的組織結構，使腫瘤細胞浸潤周圍組織，進而發(fā)生淋巴等遠處轉移[9]；同時MMPs具有促進新生血管形成的作用，為腫瘤細胞的浸潤和轉移提供條件[10]。TIMPs是體內(nèi)MMP的天然抑制物，與MMPs結合特異性抑制其活性。郝力等[6]研究顯示，宮頸癌組織MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于癌旁組織。劉嶸等[11]研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者MMP-9表達陽性率顯著高于CIN患者和正常宮頸組織。本研究發(fā)現(xiàn)，ICC組MMP-2和MMP-9的表達水平顯著高于CIN組和對照組。與上述研究結果相似，提示MMP-2和MMP-9可能與宮頸癌發(fā)生發(fā)展有關。南云澤等[12]研究顯示，TIMP-1在原位宮頸癌和宮頸浸潤癌中的陽性表達率顯著高于正常宮頸上皮。李芳等[13]研究顯示，TIMP-1和TIMP-2在宮頸鱗癌中的陽性表達率明顯低于慢性宮頸炎。本研究結果與上述研究相似，ICC組TIMP-2和TIMP-1的表達水平顯著低于CIN組和對照組，提示TIMP-2和TIMP-1可能與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展有關。

MMPs/TIMPs與腫瘤轉移的相關性已在乳腺癌研究中得到證實，但其與宮頸癌患者的臨床病理因素關系尚不完全清楚。李嬋玉等[14]報道，有淋巴結轉移的宮頸癌患者MMP-9陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移的患者，且陽性表達率隨著腫瘤浸潤程度的增加而明顯升高。王德華等[15]研究顯示，MMP-2和TIMP-2在宮頸癌的陽性表達率與FIGO分期、組織分級和淋巴結轉移有關，隨著臨床分期升高、組織分級降低和淋巴結轉移，MMP-2陽性表達率升高，而TIMP-2陽性表達率降低。本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅱ期、G3級、低分化、有脈管浸潤、有淋巴結轉移的ICC患者MMP-2和MMP-9的陽性表達率分別顯著高于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者，而TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率分別顯著低于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者，提示ICC患者MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率可能與FIGO分期、組織學分級、分化程度、脈管浸潤、淋巴結轉移有關[14]。因此，MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1可能在宮頸癌侵襲與轉移中發(fā)揮重要作用[15]。

綜上所述，MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1在宮頸癌的侵襲轉移中發(fā)揮重要作用，其可作為評估宮頸癌侵襲轉移潛能的重要指標。

[參考文獻]

[1]張靜，李穎，素慧審.MMPs及其抑制物在宮頸癌浸潤轉移中的作用[J].國外醫(yī)學計劃生育分冊，2005，24（5）：240-242.

[2]劉紅麗，李燕華.MMP-2與宮頸癌侵襲轉移的相關性研究[J].吉林醫(yī)學，2012，33（18）：3842-3844.

[3]付曉瑞，張辰，陳長英，等.基質金屬蛋白酶及其抑制因子在非黑色素性皮膚癌中的表達及臨床意義[J].中華腫瘤雜志，2012，34（5）：369-373.

[4]衷筱琴，蔡紅平，肖雯，等.CD44v6和MMP-9過表達與宮頸癌浸潤轉移的關系[J].中國婦幼保健，2009，24（34）：4900-4903.

[5]羅春芬，朱潤慶，王暉，等.環(huán)氧合酶-2和基質金屬蛋白酶-9在宮頸癌中的表達及其臨床意義[J].中華腫瘤雜志，2009，29（7）：526-530.

[6]郝力，丁美珍.宮頸癌患者基質金屬蛋白酶2、9及其組織抑制劑檢測的意義[J].浙江醫(yī)學，2006，28（2）：100-102.

[7]王森，高敏，趙毅，等.RNA干擾HPV E6下調eIF4E轉錄表達抑制宮頸癌HeLa細胞增殖并影響細胞周期進程研究[J].中國醫(yī)藥導報，2014，11（2）：4-7.

[8]呂汕群，姚婷婷，黃諾潔，等.PTEN在宮頸癌組織中的表達及對宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的作用[J].中國醫(yī)藥導報，2013， 10（15）：37-39.

[9]徐平，蔡海寧，王丹霞，等.基質金屬蛋白酶-2、-9在宮頸癌進展中的意義[J].西部醫(yī)學，2009，21（12）：2040-2042.

[10]Shao W，Wang W，Xiong XG，et al.Prognostic impact of MMP-2 and MMP-9 expression in pathologic stage ⅠA non-small cell lung cancer[J].J Surg Oncol，2011，104（12）：841-846.

[11]劉嶸，蒲德敏，程艷香，等.受體結合腫瘤抗原、血管內(nèi)皮生長因子和基質金屬蛋白酶-9在宮頸癌組織中的表達及其與腫瘤侵襲、轉移的關系[J].中華醫(yī)學雜志，2007，87（49）：1326-1329.

[12]南云澤，劉麗利，林貞花，等.MMP-9及TIMP-1在子宮頸鱗癌組織中的表達及臨床意義[J].中國婦幼保健，2011， 26（10）：1523-1526.

[13]李芳，張淑蘭，邱榮蘭.MMP-2、MMP-9及TIMP-2、TIMP-1在宮頸鱗癌中的表達及其意義[J].臨床腫瘤學雜志，2006， 11（6）：450-456.

[14]李嬋玉，李力.MMP-9及其相關因子與宮頸癌[J].重慶醫(yī)學，2012，41（33）：3545-3547.

[15]王德華，田冬艷.MMP-2和TIMP-2在宮頸癌中的表達及意義[J].天津醫(yī)科大學學報，2010，16（4）：590-593.

（收稿日期：2014-04-13本文編輯：郭靜娟）

[基金項目] 國家自然科學青年基金（U1304803）；河南省教育廳科學技術研究重點項目（12A320067）

[作者簡介] 游泳（1974-），女，碩士，副主任醫(yī)師；研究方向：女性生殖系統(tǒng)腫瘤的診斷和治療

1.2 方法

1.2.1 主要試劑即用型鼠抗人MMP-2、MMP-9免疫組織化學試劑盒由北京中山生物制品有限公司提供；即用型鼠抗人TIMP-2、TIMP-1多克隆抗體由武漢博士德生物工程有限公司提供；HIGH-SABC試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供；DAB顯色試劑盒由北京中山生物工程公司提供。

1.2.2 實驗方法取ICC組和CIN組切除的病變組織標本1份；對照組任取宮頸組織1份。標本經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋備用。厚度4 μm連續(xù)定向切片，處理后用于免疫組織化學染色和HE染色。免疫組織化學檢測用SABC法，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。用磷酸鹽緩沖鹽液（PBS）代替一抗作陰性對照，用已知的免疫組織化學染色陽性的宮頸切片（試劑公司提供）作陽性對照。結果判定[6]：采用雙盲法，由兩位醫(yī)師獨立觀察每張切片后共同判斷；陽性染色為細胞質或細胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒沉著。

1.2.3 參數(shù)記錄和比較記錄各個因子（MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2）的表達情況；比較各組相關因子的陽性表達率。同時記錄ICC組患者年齡、FIGO分期、組織學分級、大體類型、組織類型、分化程度、脈管浸潤和淋巴結轉移等臨床病理情況，分析臨床病理參數(shù)與各因子陽性表達率的關系。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以x±s表示，采用t檢驗和方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 3組相關因子陽性表達率的比較

ICC組MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于CIN組和對照組，TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率顯著低于CIN組和對照組（P<0.05）；CIN組MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于對照組，TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率顯著低于對照組（P<0.05）（表1）。

表1 3組相關因子陽性表達率的比較[n（%）]

2.2 臨床病理參數(shù)與相關因子陽性表達率的關系

ICC組中，Ⅱ期、G3級、低分化、有脈管浸潤、有淋巴結轉移的患者MMP-2和MMP-9的陽性表達率分別顯著高于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者（P<0.05），而TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率分別顯著低于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者（P<0.05）。各因子的陽性表達率在不同大體類型、不同組織類型之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表2）。

3 討論

宮頸癌早期可發(fā)生浸潤轉移，預后較差，嚴重威脅女性的生命健康。如何有效預測宮頸癌的侵襲與轉移能力，對制訂正確的治療方案及判斷預后具有重要的意義[7]。不過目前尚未發(fā)現(xiàn)具有特異性的生物學指標可有效預測宮頸癌的侵襲與轉移能力[8]。

MMPs在腫瘤的侵襲和轉移中發(fā)揮重要作用。MMPs通過降解ECM，破壞基底膜屏障及局部的組織結構，使腫瘤細胞浸潤周圍組織，進而發(fā)生淋巴等遠處轉移[9]；同時MMPs具有促進新生血管形成的作用，為腫瘤細胞的浸潤和轉移提供條件[10]。TIMPs是體內(nèi)MMP的天然抑制物，與MMPs結合特異性抑制其活性。郝力等[6]研究顯示，宮頸癌組織MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于癌旁組織。劉嶸等[11]研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者MMP-9表達陽性率顯著高于CIN患者和正常宮頸組織。本研究發(fā)現(xiàn)，ICC組MMP-2和MMP-9的表達水平顯著高于CIN組和對照組。與上述研究結果相似，提示MMP-2和MMP-9可能與宮頸癌發(fā)生發(fā)展有關。南云澤等[12]研究顯示，TIMP-1在原位宮頸癌和宮頸浸潤癌中的陽性表達率顯著高于正常宮頸上皮。李芳等[13]研究顯示，TIMP-1和TIMP-2在宮頸鱗癌中的陽性表達率明顯低于慢性宮頸炎。本研究結果與上述研究相似，ICC組TIMP-2和TIMP-1的表達水平顯著低于CIN組和對照組，提示TIMP-2和TIMP-1可能與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展有關。

MMPs/TIMPs與腫瘤轉移的相關性已在乳腺癌研究中得到證實，但其與宮頸癌患者的臨床病理因素關系尚不完全清楚。李嬋玉等[14]報道，有淋巴結轉移的宮頸癌患者MMP-9陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移的患者，且陽性表達率隨著腫瘤浸潤程度的增加而明顯升高。王德華等[15]研究顯示，MMP-2和TIMP-2在宮頸癌的陽性表達率與FIGO分期、組織分級和淋巴結轉移有關，隨著臨床分期升高、組織分級降低和淋巴結轉移，MMP-2陽性表達率升高，而TIMP-2陽性表達率降低。本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅱ期、G3級、低分化、有脈管浸潤、有淋巴結轉移的ICC患者MMP-2和MMP-9的陽性表達率分別顯著高于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者，而TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率分別顯著低于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者，提示ICC患者MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率可能與FIGO分期、組織學分級、分化程度、脈管浸潤、淋巴結轉移有關[14]。因此，MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1可能在宮頸癌侵襲與轉移中發(fā)揮重要作用[15]。

綜上所述，MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1在宮頸癌的侵襲轉移中發(fā)揮重要作用，其可作為評估宮頸癌侵襲轉移潛能的重要指標。

[參考文獻]

[1]張靜，李穎，素慧審.MMPs及其抑制物在宮頸癌浸潤轉移中的作用[J].國外醫(yī)學計劃生育分冊，2005，24（5）：240-242.

[2]劉紅麗，李燕華.MMP-2與宮頸癌侵襲轉移的相關性研究[J].吉林醫(yī)學，2012，33（18）：3842-3844.

[3]付曉瑞，張辰，陳長英，等.基質金屬蛋白酶及其抑制因子在非黑色素性皮膚癌中的表達及臨床意義[J].中華腫瘤雜志，2012，34（5）：369-373.

[4]衷筱琴，蔡紅平，肖雯，等.CD44v6和MMP-9過表達與宮頸癌浸潤轉移的關系[J].中國婦幼保健，2009，24（34）：4900-4903.

[5]羅春芬，朱潤慶，王暉，等.環(huán)氧合酶-2和基質金屬蛋白酶-9在宮頸癌中的表達及其臨床意義[J].中華腫瘤雜志，2009，29（7）：526-530.

[6]郝力，丁美珍.宮頸癌患者基質金屬蛋白酶2、9及其組織抑制劑檢測的意義[J].浙江醫(yī)學，2006，28（2）：100-102.

[7]王森，高敏，趙毅，等.RNA干擾HPV E6下調eIF4E轉錄表達抑制宮頸癌HeLa細胞增殖并影響細胞周期進程研究[J].中國醫(yī)藥導報，2014，11（2）：4-7.

[8]呂汕群，姚婷婷，黃諾潔，等.PTEN在宮頸癌組織中的表達及對宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的作用[J].中國醫(yī)藥導報，2013， 10（15）：37-39.

[9]徐平，蔡海寧，王丹霞，等.基質金屬蛋白酶-2、-9在宮頸癌進展中的意義[J].西部醫(yī)學，2009，21（12）：2040-2042.

[10]Shao W，Wang W，Xiong XG，et al.Prognostic impact of MMP-2 and MMP-9 expression in pathologic stage ⅠA non-small cell lung cancer[J].J Surg Oncol，2011，104（12）：841-846.

[11]劉嶸，蒲德敏，程艷香，等.受體結合腫瘤抗原、血管內(nèi)皮生長因子和基質金屬蛋白酶-9在宮頸癌組織中的表達及其與腫瘤侵襲、轉移的關系[J].中華醫(yī)學雜志，2007，87（49）：1326-1329.

[12]南云澤，劉麗利，林貞花，等.MMP-9及TIMP-1在子宮頸鱗癌組織中的表達及臨床意義[J].中國婦幼保健，2011， 26（10）：1523-1526.

[13]李芳，張淑蘭，邱榮蘭.MMP-2、MMP-9及TIMP-2、TIMP-1在宮頸鱗癌中的表達及其意義[J].臨床腫瘤學雜志，2006， 11（6）：450-456.

[14]李嬋玉，李力.MMP-9及其相關因子與宮頸癌[J].重慶醫(yī)學，2012，41（33）：3545-3547.

[15]王德華，田冬艷.MMP-2和TIMP-2在宮頸癌中的表達及意義[J].天津醫(yī)科大學學報，2010，16（4）：590-593.

（收稿日期：2014-04-13本文編輯：郭靜娟）

[基金項目] 國家自然科學青年基金（U1304803）；河南省教育廳科學技術研究重點項目（12A320067）

[作者簡介] 游泳（1974-），女，碩士，副主任醫(yī)師；研究方向：女性生殖系統(tǒng)腫瘤的診斷和治療

1.2 方法

1.2.1 主要試劑即用型鼠抗人MMP-2、MMP-9免疫組織化學試劑盒由北京中山生物制品有限公司提供；即用型鼠抗人TIMP-2、TIMP-1多克隆抗體由武漢博士德生物工程有限公司提供；HIGH-SABC試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供；DAB顯色試劑盒由北京中山生物工程公司提供。

1.2.2 實驗方法取ICC組和CIN組切除的病變組織標本1份；對照組任取宮頸組織1份。標本經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋備用。厚度4 μm連續(xù)定向切片，處理后用于免疫組織化學染色和HE染色。免疫組織化學檢測用SABC法，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。用磷酸鹽緩沖鹽液（PBS）代替一抗作陰性對照，用已知的免疫組織化學染色陽性的宮頸切片（試劑公司提供）作陽性對照。結果判定[6]：采用雙盲法，由兩位醫(yī)師獨立觀察每張切片后共同判斷；陽性染色為細胞質或細胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒沉著。

1.2.3 參數(shù)記錄和比較記錄各個因子（MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2）的表達情況；比較各組相關因子的陽性表達率。同時記錄ICC組患者年齡、FIGO分期、組織學分級、大體類型、組織類型、分化程度、脈管浸潤和淋巴結轉移等臨床病理情況，分析臨床病理參數(shù)與各因子陽性表達率的關系。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以x±s表示，采用t檢驗和方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 3組相關因子陽性表達率的比較

ICC組MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于CIN組和對照組，TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率顯著低于CIN組和對照組（P<0.05）；CIN組MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于對照組，TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率顯著低于對照組（P<0.05）（表1）。

表1 3組相關因子陽性表達率的比較[n（%）]

2.2 臨床病理參數(shù)與相關因子陽性表達率的關系

ICC組中，Ⅱ期、G3級、低分化、有脈管浸潤、有淋巴結轉移的患者MMP-2和MMP-9的陽性表達率分別顯著高于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者（P<0.05），而TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率分別顯著低于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者（P<0.05）。各因子的陽性表達率在不同大體類型、不同組織類型之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表2）。

3 討論

宮頸癌早期可發(fā)生浸潤轉移，預后較差，嚴重威脅女性的生命健康。如何有效預測宮頸癌的侵襲與轉移能力，對制訂正確的治療方案及判斷預后具有重要的意義[7]。不過目前尚未發(fā)現(xiàn)具有特異性的生物學指標可有效預測宮頸癌的侵襲與轉移能力[8]。

MMPs在腫瘤的侵襲和轉移中發(fā)揮重要作用。MMPs通過降解ECM，破壞基底膜屏障及局部的組織結構，使腫瘤細胞浸潤周圍組織，進而發(fā)生淋巴等遠處轉移[9]；同時MMPs具有促進新生血管形成的作用，為腫瘤細胞的浸潤和轉移提供條件[10]。TIMPs是體內(nèi)MMP的天然抑制物，與MMPs結合特異性抑制其活性。郝力等[6]研究顯示，宮頸癌組織MMP-2和MMP-9的陽性表達率顯著高于癌旁組織。劉嶸等[11]研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者MMP-9表達陽性率顯著高于CIN患者和正常宮頸組織。本研究發(fā)現(xiàn)，ICC組MMP-2和MMP-9的表達水平顯著高于CIN組和對照組。與上述研究結果相似，提示MMP-2和MMP-9可能與宮頸癌發(fā)生發(fā)展有關。南云澤等[12]研究顯示，TIMP-1在原位宮頸癌和宮頸浸潤癌中的陽性表達率顯著高于正常宮頸上皮。李芳等[13]研究顯示，TIMP-1和TIMP-2在宮頸鱗癌中的陽性表達率明顯低于慢性宮頸炎。本研究結果與上述研究相似，ICC組TIMP-2和TIMP-1的表達水平顯著低于CIN組和對照組，提示TIMP-2和TIMP-1可能與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展有關。

MMPs/TIMPs與腫瘤轉移的相關性已在乳腺癌研究中得到證實，但其與宮頸癌患者的臨床病理因素關系尚不完全清楚。李嬋玉等[14]報道，有淋巴結轉移的宮頸癌患者MMP-9陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移的患者，且陽性表達率隨著腫瘤浸潤程度的增加而明顯升高。王德華等[15]研究顯示，MMP-2和TIMP-2在宮頸癌的陽性表達率與FIGO分期、組織分級和淋巴結轉移有關，隨著臨床分期升高、組織分級降低和淋巴結轉移，MMP-2陽性表達率升高，而TIMP-2陽性表達率降低。本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅱ期、G3級、低分化、有脈管浸潤、有淋巴結轉移的ICC患者MMP-2和MMP-9的陽性表達率分別顯著高于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者，而TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率分別顯著低于Ⅰ期、G1-G2級、中-高分化、無脈管浸潤、無淋巴結轉移的患者，提示ICC患者MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1的陽性表達率可能與FIGO分期、組織學分級、分化程度、脈管浸潤、淋巴結轉移有關[14]。因此，MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1可能在宮頸癌侵襲與轉移中發(fā)揮重要作用[15]。

綜上所述，MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1在宮頸癌的侵襲轉移中發(fā)揮重要作用，其可作為評估宮頸癌侵襲轉移潛能的重要指標。

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（收稿日期：2014-04-13本文編輯：郭靜娟）

[基金項目] 國家自然科學青年基金（U1304803）；河南省教育廳科學技術研究重點項目（12A320067）

[作者簡介] 游泳（1974-），女，碩士，副主任醫(yī)師；研究方向：女性生殖系統(tǒng)腫瘤的診斷和治療