結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)在結(jié)核病診斷中的價(jià)值

吳友根，楊興萍，王 軍，羅菊華，劉紅兵，張 麗，李朝金，余 碧，肖舒元

(攀枝花市第六人民醫(yī)院，四川 攀枝花 617023)

結(jié)核病是結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)感染引起的一種感染性疾病，部分確診困難。結(jié)核病也是不明原因發(fā)熱性疾病的主要疾病之一。全球有約17億人感染結(jié)核菌；在我國(guó)一些地區(qū)結(jié)核病已在感染性長(zhǎng)期發(fā)熱的病因中上升至首位，其中肺外結(jié)核遠(yuǎn)較肺內(nèi)結(jié)核為多[1]。目前結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)MTB-IgG抗體在結(jié)核病診斷應(yīng)用較多而療效觀察較少。我們應(yīng)用蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)MTB-IgG抗體，對(duì)結(jié)核感染的診斷具有一定的作用，但發(fā)現(xiàn)無動(dòng)態(tài)檢測(cè)治療效果的作用。2009年12月至2014年2月，我們利用該方法進(jìn)行臨床檢測(cè)，現(xiàn)總結(jié)分析如下。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源 ①結(jié)核組：選取我院感染科臨床表現(xiàn)、細(xì)菌學(xué)、影像學(xué)或抗結(jié)核治療有效而明確診斷的結(jié)核病例464 例，其中:結(jié)核性胸膜炎35例,淋巴結(jié)結(jié)核20例，骨結(jié)核19例，腎泌尿系結(jié)核9例，其他肺外結(jié)核16例，余為肺結(jié)核。肺外結(jié)核的部分患者合并有肺結(jié)核?；颊咧心?09例，女155例；年齡1～84歲，平均48.39歲。②非結(jié)核病組：選取我院非結(jié)核病例4 038例(且以出院診斷為準(zhǔn))，其中：男2 396例，女1 642例；年齡1個(gè)月至94歲，平均58.12歲。均抽取空腹血液5 mL。所有研究對(duì)象均無HIV感染、妊娠、使用免疫抑制劑或增強(qiáng)劑。采用5種MTB復(fù)合群特異性的抗原來檢測(cè)待檢血清中的抗體，如果任一抗體檢測(cè)陽性則結(jié)果可判定為陽性，5種抗體檢測(cè)均為陰性則結(jié)果可判定為陰性。

1.2 儀器及試劑 西安聯(lián)爾科技有限公司的配套儀器及相應(yīng)試劑盒。

1.3 檢測(cè)方法 嚴(yán)格依照配套說明書進(jìn)行操作，結(jié)果由儀器自動(dòng)判讀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 2組結(jié)核蛋白芯片法檢測(cè)情況 結(jié)核病組464例患者中結(jié)核蛋白芯片法檢測(cè)陽性323例，陽性率69.61%；非結(jié)核病組4 038例患者中結(jié)核蛋白芯片法檢測(cè)陽性788例，陽性率19.51%。2組抗體陽性率有非常顯著性差異(P<0.01)。

2.2 2組多項(xiàng)指標(biāo)的檢出率情況 結(jié)果詳見表1。

表1 2組多項(xiàng)指標(biāo)的檢出率情況

2.3 2組各項(xiàng)指標(biāo)的檢出情況 結(jié)果詳見表2。

表2 2組各項(xiàng)指標(biāo)的檢出率情況

在4 502例血清標(biāo)本MTB-IgG抗體檢測(cè)中，5項(xiàng)MTB-IgG抗體的敏感性為69.61%(323/464)，特異性為80.49%(3 250/4 038)。

3 討 論

蛋白芯片作為一種新近發(fā)展起來的微量分析技術(shù)，以其良好的穩(wěn)定性、高通量和高度敏感性等優(yōu)點(diǎn)，在疾病診斷領(lǐng)域受到越來越多的青睞[2-4]。許多研究顯示活動(dòng)性結(jié)核患者的抗LAM抗體陽性率為60%～70%，特異性達(dá)到95%；檢測(cè)具有很好的重復(fù)性。本文研究也支持以上觀點(diǎn)，靈敏度、特異性低于預(yù)計(jì)值，可能為多因素所致；我院感染科所收治的結(jié)核病患者大多由內(nèi)外科轉(zhuǎn)診而來，非結(jié)核病患者中存在部分漏診可能；過去由于我國(guó)非結(jié)核分枝桿菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)病發(fā)病較少，故檢出抗酸桿菌對(duì)診斷結(jié)核病有極重要的意義[5]；近年來NTM肺病疫情呈上升趨勢(shì)[6]，NTM肺病容易被誤診為肺結(jié)核病。以上2點(diǎn)是靈敏度、特異性低于預(yù)計(jì)值的主要原因。 ESAT-6即早期分泌性低分子量抗原6 000融合蛋白抗原靶、CFP10(培養(yǎng)濾液蛋白10)、38 000融合蛋白、16 000融合蛋白等4項(xiàng)抗體，許多同行研究顯示有很好的特異性，但敏感性太差，本研究也顯示以上4項(xiàng)抗體的陽性率均低于17%；其中CFP10的陽性率僅為4.53%。5種抗體聯(lián)合檢測(cè)較單個(gè)抗體檢測(cè)提高了檢測(cè)的陽性率。當(dāng)患者經(jīng)過1個(gè)療程治療2個(gè)月后復(fù)查時(shí)LAM或38 000融合蛋白仍陽性反應(yīng)，表示治療效果不佳，需要調(diào)整治療方案并持續(xù)治療；如果呈陰性反應(yīng)，表示治療達(dá)到效果[7]。但本文研究顯示隨著治療的好轉(zhuǎn)，蛋白芯片結(jié)核抗體陽性率并未出現(xiàn)明顯下降，筆者分析MTB-IgG抗體如其他IgG抗體一樣可通過胎盤，在新生兒的抗感染中起重要作用，6個(gè)月后才逐漸降解；其半衰期長(zhǎng)，為23 d；而治療好轉(zhuǎn)中，殺滅的MTB仍可繼續(xù)刺激機(jī)體繼續(xù)產(chǎn)生IgG抗體。故筆者認(rèn)為MTB-IgG抗體陽性對(duì)判斷療效無意義，本研究也支持這一理論推斷。綜上所述，蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核患者血清抗體作為臨床輔助診斷結(jié)核病具有一定的價(jià)值。對(duì)結(jié)核病的療效監(jiān)測(cè)無實(shí)用價(jià)值。本芯片僅能檢測(cè)MTB-IgG抗體，若能同時(shí)檢測(cè)IgM抗體或抗原，對(duì)于MTB感染的臨床輔助診斷則更有意義。有關(guān)結(jié)核抗原的檢測(cè)，國(guó)內(nèi)外均有人進(jìn)行該方面的研究[8-9]。本研究也有待于進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量及同行的佐證。

參考文獻(xiàn)：

[1]王吉耀，廖二元，黃從新，等．內(nèi)科學(xué)[M].2版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：106-112．

[2]Poetz O, Schwenk JM, Kramer S, et al. Protein microarrays: catching the proteome[J]. Mech Ageing Dev, 2005, 126(1): 161-170.

[3]WANG Yefu, GAO Wenjuan, WANG Huaquan, et al. Preparation of a visual protein chip for detection of IgG against Treponema pallidum[J]. Mol Biotechnol, 2005, 31(2): 121-128.

[4]LIU Huihui, CAO Xuan, YANG Yong, et al. Array-based nano-amplification technique was applied in detection of hepatitis E virus[J]. J Biochem Mol Biol, 2006, 39(3): 247-252.

[5]中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)．肺結(jié)核診斷和治療指南[J]．中華結(jié)核和呼吸雜志，2001，24(2)：5-9．

[6]馬玙，王敬．重視非結(jié)核分枝桿菌肺病與肺結(jié)核的鑒別[J]．臨床肺科雜志，2010，15(3)：301-302．

[7]李影，張東浩．蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌IgG抗體的診斷價(jià)值[J]．中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10(3)：65-66．

[8]Munk ME, Arend SM, Brock I, et al. Use of ESAT-6 and CFP-10 antigens for diagnosis of extrapulmonary tuberculosis[J]. J Infect Dis, 2001, 183(1): 175-176.

[9]唐宇龍，楊華，劉湘新，等．三種結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白的抗體制備及其在抗原檢測(cè)中的應(yīng)用[J]．中華傳染病雜志，2007，25(10)：597-600．