鹽酸安舒法辛對(duì)嗅球摘除大鼠抑郁行為及血清皮質(zhì)酮、睪酮的影響

何 杰,林 菲,董秋菊,邢艷麗,田京偉

(1.煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院,山東 煙臺(tái) 264005;2. 山東綠葉制藥有限公司,山東 煙臺(tái) 264003)

抑郁癥是一種常見(jiàn)的精神障礙性疾病,是由各種原因引起的以抑郁為主要癥狀的一組心境障礙或情感性障礙[1-2],具有發(fā)病率高、復(fù)發(fā)率高、致殘率高的特點(diǎn)．WHO預(yù)測(cè),到2020年抑郁癥將成為繼冠心病后的第二大疾病負(fù)擔(dān)源．

目前治療抑郁癥的一線藥物為選擇性5-羥色胺(5-HT)再攝取抑制劑(SSRIs)、5-HT和NE再攝取抑制劑(SNRIs),雖然療效確切,但起效慢,不能有效治療抑郁患者的快感缺乏,也不能改善獎(jiǎng)勵(lì)、激勵(lì)驅(qū)動(dòng)和目標(biāo)導(dǎo)向行為,而且易導(dǎo)致性功能障礙,無(wú)法滿足臨床更高需求．鹽酸安舒法辛是山東綠葉制藥有限公司自主研發(fā)的新化合物,已獲得化合物專利,相對(duì)于SSRIs和SNRIs,鹽酸安舒法辛是一種潛在的三攝取抑制劑,具有起效快,改善快感缺乏和性功能障礙,增強(qiáng)認(rèn)知、獎(jiǎng)勵(lì)激勵(lì)驅(qū)動(dòng)和目標(biāo)導(dǎo)向行為等特點(diǎn),是一種新型抑郁治療藥物．本實(shí)驗(yàn)選用嗅球摘除抑郁模型大鼠,觀察鹽酸安舒法辛的抗抑郁作用,并探討其可能的抗抑郁機(jī)制．

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

12周齡SPF級(jí)健康雄性SD大鼠,體重200～240 g,由山東綠葉制藥有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)碼:SCXK(魯)2009-0009．

1.2 藥品與試劑

鹽酸安舒法辛:山東綠葉制藥有限公司(批號(hào):20110513);鹽酸文拉法辛:華北制藥集團(tuán)海翔醫(yī)藥有限責(zé)任公司(批號(hào):110106);大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒:R&D公司生產(chǎn)(批號(hào):KGE010);大鼠皮質(zhì)酮(CROT)ELISA試劑盒:ArborAssays生產(chǎn)(批號(hào):K014-H1);注射用青霉素鈉:山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司(批號(hào):L110804);羧甲基纖維素鈉(CMC):上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司分裝(美國(guó)AQUALON生產(chǎn))(批號(hào):91342);水合氯醛:天津市福晨化學(xué)試劑廠(批號(hào):20090820)．

1.3 儀器

酶標(biāo)儀(SPECTRARMAX M5,Molecular Devices,USA);離心機(jī)(ALLEGRATM X-22R,BEKMAN,USA);開(kāi)場(chǎng)試驗(yàn)箱(上海軟隆科技發(fā)展有限公司)．

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 嗅球摘除抑郁大鼠模型的建立[3-4]雄性大鼠60只,隨機(jī)取10只作為假手術(shù)對(duì)照組,余下50只復(fù)制嗅球摘除抑郁模型．模型組大鼠以10%水合氯醛(380 mg/kg,i.g.)麻醉后固定,兩耳聯(lián)線中點(diǎn)處剝開(kāi)皮膚,暴露頭骨,在距前囟7～8 mm,與正中縫兩側(cè)旁開(kāi)2 mm的交點(diǎn)處,以顱骨鉆鉆2個(gè)直徑2 mm的小孔．以探針自顱骨孔攪動(dòng),真空泵吸出從顱骨鉆孔溢出的白色腦組織,以吸收性明膠海綿填入止血并封閉顱骨孔．假手術(shù)組大鼠采用相同方法在手術(shù)定位點(diǎn)上鉆孔,但不損傷嗅球．清理傷口,撒少許青霉素粉,縫合皮膚,腹腔注射青霉素16萬(wàn)單位/只,連續(xù)注射3 d,以防術(shù)后感染．手術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng),每日撫摸大鼠5～10 min,隔天換墊料,自由飲食．

1.4.2 分組和給藥 術(shù)后2周,根據(jù)自主活動(dòng)得分,將抑郁模型大鼠均衡隨機(jī)分為5組,每組10只,分別為模型組、鹽酸文拉法辛組、鹽酸安舒法辛低(4.0 mg/kg)、中(8.0 mg/kg)和高(16.0 mg/kg)劑量組．各組動(dòng)物灌胃給予0.5%羧甲基纖維素鈉混懸的相應(yīng)藥物,假手術(shù)組和模型組給予等容積的0.5%羧甲基纖維素鈉,給藥體積:10 mL/kg,每日1次,連續(xù)給藥20 d．

1.4.3 檢測(cè)指標(biāo) (1)開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)．給藥第7天、14天進(jìn)行自主活動(dòng)測(cè)定．測(cè)定前所有動(dòng)物禁食16 h,給藥后1 h開(kāi)始測(cè)定．所用開(kāi)場(chǎng)試驗(yàn)箱為高40 cm、長(zhǎng)寬均為52 cm的內(nèi)空立柱體,底面劃分為面積相等的16塊．分別計(jì)算5 min內(nèi)每只大鼠穿越底面的方塊數(shù)和站立次數(shù),以大鼠兩前爪均離地計(jì)為站立1次．

(2)糖水消耗實(shí)驗(yàn)．實(shí)驗(yàn)時(shí)大鼠單籠飼養(yǎng),在安靜的房間內(nèi)訓(xùn)練動(dòng)物適應(yīng)喝糖水(1%蔗糖溶液),給藥第15天每籠放置2瓶糖水;第16天每籠放置1瓶糖水,1瓶純水,2瓶位置隨機(jī);第17天禁食禁水;第18天給每只大鼠隨機(jī)放置2個(gè)水瓶,分別放有事先稱重的1%蔗糖水和純水,2 h后取2瓶水再次稱重．記錄每只大鼠的糖水和純水的消耗量,計(jì)算大鼠2 h糖水消耗百分率:

糖水消耗百分率(%)= 所喝糖水量/(純水量+糖水量)×100.

(3)皮質(zhì)酮、睪酮含量測(cè)定．實(shí)驗(yàn)第20天,于給藥后2 h麻醉大鼠,腹主動(dòng)脈取血,離心取血清,ELISA試劑盒測(cè)定皮質(zhì)酮、睪酮含量．

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 鹽酸安舒法辛對(duì)對(duì)嗅球摘除抑郁模型大鼠行為學(xué)的影響

與假手術(shù)組比較,實(shí)驗(yàn)第7天和第14天模型組大鼠的跨格數(shù)與站立次數(shù)明顯增加(P<0.01);與模型組比較,鹽酸安舒法辛中、高劑量組明顯降低大鼠的跨格數(shù)與站立次數(shù)(P<0.01),鹽酸安舒法辛 8.0 mg/kg作用強(qiáng)度略優(yōu)于等物質(zhì)的量劑量的鹽酸文拉法辛(P<0.05)．結(jié)果見(jiàn)表1和2．

表1 鹽酸安舒法辛對(duì)嗅球摘除抑郁模型大鼠跨格數(shù)的影響

注:與假手術(shù)組相比,#為P<0.05;##為P<0.01;與模型組相比,*為P<0.05;**為P<0.01．

表2 鹽酸安舒法辛對(duì)嗅球摘除抑郁模型大鼠站立次數(shù)的影響

注：與假手術(shù)組相比,#為P<0.05;##為P<0.01;與模型組相比,**為P<0.01．

2.2 鹽酸安舒法辛對(duì)嗅球摘除抑郁模型大鼠糖水消耗的影響

與假手術(shù)組比較,模型組大鼠的糖水消耗率明顯降低(P<0.01)．與模型組比較,鹽酸安舒法辛中、高劑量組大鼠的糖水消耗明顯升高(P<0.05,P<0.01),8.0 mg/kg鹽酸安舒法辛作用強(qiáng)度與等物質(zhì)的量劑量的鹽酸文拉法辛相當(dāng)．結(jié)果見(jiàn)表3．

表3 鹽酸安舒法辛對(duì)嗅球摘除抑郁模型大鼠糖水消耗的影響

注：與假手術(shù)組相比,#為P<0.05;##為P<0.01;與模型組相比,*為P<0.05;**為P<0.01．

2.3 鹽酸安舒法辛對(duì)嗅球摘除抑郁模型大鼠血清皮質(zhì)酮、睪酮的影響

與假手術(shù)組相比,模型組大鼠的皮質(zhì)酮水平升高、睪酮水平降低,鹽酸安舒法辛中、高劑量組明顯降低大鼠血清皮質(zhì)酮水平(P<0.05,P<0.01),高劑量組明顯升高血清睪酮水平(P<0.05),鹽酸安舒法辛8 mg/kg作用強(qiáng)度優(yōu)于等物質(zhì)的量劑量的鹽酸文拉法辛．結(jié)果見(jiàn)表4．

表4 鹽酸安舒法辛對(duì)嗅球摘除抑郁模型大鼠血清皮質(zhì)酮、睪酮的影響

注：與模型組相比,*為P<0.05;**為P<0.01．

3 討 論

大鼠嗅球摘除模型是經(jīng)典的抑郁動(dòng)物模型,嗅球摘除引起的腦內(nèi)結(jié)構(gòu)、神經(jīng)遞質(zhì)變化和行為學(xué)改變均與抑郁癥的病理改變相似[5]．大鼠嗅球摘除后,自主活動(dòng)明顯增加,攻擊性增強(qiáng),開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)反映的是大鼠的激越性情緒的改變;快感缺失為抑郁癥的核心癥狀之一,利用動(dòng)物對(duì)甜味的偏好設(shè)計(jì)的糖水消耗實(shí)驗(yàn)反映的是動(dòng)物對(duì)獎(jiǎng)賞的反應(yīng)性[6-7]．

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠跨格數(shù)和站立次數(shù)明顯增加,糖水消耗率明顯降低,鹽酸安舒法辛連續(xù)灌胃給藥明顯減少嗅球摘除抑郁模型大鼠的跨格數(shù)(與模型組比較,P<0.01)和站立次數(shù)(與模型組比較,P<0.01),增加糖水消耗率(與模型組比較,P<0.01),且呈劑量依賴關(guān)系,表明鹽酸安舒法辛能明顯改善大鼠的行為學(xué)和快感缺失的癥狀,鹽酸安舒法辛 8 mg/kg作用強(qiáng)度優(yōu)于或相當(dāng)于等物質(zhì)的量劑量的鹽酸文拉法辛．

下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸作為神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的樞紐,主要用于維持人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,對(duì)外界環(huán)境的刺激作出必要的生理心理反應(yīng)[8]．越來(lái)越多的研究顯示,HPA軸在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要的作用[9],HPA軸的持續(xù)亢進(jìn)程度和抑郁患者癥狀的嚴(yán)重程度密切相關(guān)．皮質(zhì)醇(CROT)是HPA軸涉及的主要激素之一,大鼠嗅球摘除后,5-HT神經(jīng)纖維被破壞,5-HT神經(jīng)元活性降低,刺激促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)分泌,引起促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)分泌增加,導(dǎo)致CROT分泌增加,致使HPA軸過(guò)度活化[10-11]．HPA軸功能亢進(jìn),抑制促性腺激素釋放激素(GnRH),從而抑制下丘腦-垂體-性腺(HPG)軸,導(dǎo)致睪酮水平下降．

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,鹽酸安舒法辛相對(duì)文拉法辛能明顯降低血清皮質(zhì)酮水平(與模型組比較,P<0.01),升高血清睪酮水平(與模型組比較,P<0.05),且呈劑量依賴關(guān)系,表明鹽酸安舒法辛有可能是通過(guò)拮抗HPA軸的功能亢進(jìn)來(lái)改善抑郁癥狀,同時(shí),與臨床表現(xiàn)出的文拉法辛性功能障礙的副作用相比,鹽酸安舒法辛能升高血中睪酮水平,表明其對(duì)男性抑郁患者的性功能障礙應(yīng)具有一定的治療作用．

綜上所述,鹽酸安舒法辛能夠改善嗅球摘除模型大鼠的抑郁行為,降低HPA軸的亢進(jìn)狀態(tài),是一個(gè)很有潛力的抗抑郁新化合物．

參考文獻(xiàn):

[1]江開(kāi)達(dá).抑郁障礙防治指南[M].北京:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社,2006.

[2]Pratt L A, Brody D J. Depression in the United States household population， 2005—2006. [DB/OL].NCHS Data Brief,2008(7):1-8[2008-08-01].http://www.cdc.gov/nchs/data/databriefs/db07.pdf.

[3]崔翰明,黃世敬，白鴿，等.開(kāi)心解郁湯對(duì)抑郁模型大鼠皮質(zhì)內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和行為學(xué)的影響[J].實(shí)驗(yàn)研究,2011,17(3):276-278.

[4]陳紅霞,張黎明,薛瑞,等.大鼠嗅球切除抑郁癥動(dòng)物模型的改進(jìn)與評(píng)價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)方法學(xué),2011,27(3):436-439.

[5]Sato A, Nakagawasai O, Tan-No K, et al. Effect of non-selective dopaminergic receptor agonist on disrupted maternal behavior in olfactory bulbectomized mice [J].Behav Brain Res, 2010, 210(2):251-256.

[6]Romeas T, Morissette MC, Mnie-Filali O, et al. Simultaneous anhedonia and exaggerated locomotor activation in an animal model of depression [J].Psychopharmacology (Berl)， 2009,205(2):293-303.

[7]Slattery D A,Markou A, Cryan J F. Evaluation of reward processes in an animal model of depression [J].Psychopharmacology (Berl)，2007,190(4):555-568.

[8]Uys JD, Marais L, Faure J, et al. Developmental trauma is associated with behavioral hyperarousal, altered HPA axis activity, and decreased hippocampal neurotrophin expression in the adult rat [J].Ann N Y Acad Sci， 2006，1071:542

[9]路翠艷,潘芳.應(yīng)激反應(yīng)中HPA軸的中樞調(diào)控和免疫調(diào)節(jié)[J].中國(guó)行為醫(yī)學(xué),2003,12(3):353.

[10]Marcilhac A, Faudon M, Anglade C,et al. An investigation of serotonergic involvement in the regulation of ACTH and corticosterone in the olfactory bulbectomized rat [J].Pharmacol Biochem Behav, 1999,63(4):599.

[11]Xu Ying, Ku Baoshan, Yao Haiyan, et al. Antidepressant effects of curcumin in the forced swim test and olfactory bulbectomy models of depression in rats [J]. Pharmacol Biochem Behav, 2005,82(1):200.