長白山地區(qū)高山紅景天中紅景天苷含量及農(nóng)藥殘留的測定

丁雪，劉賀，敖宇濤，王冬雪，郭建鵬,2*

(1.延邊大學藥學院，吉林 延吉 133002；2.長白山生物資源與功能分子教育部重點實驗室(延邊大學)，吉林 延吉 133002)

高山紅景天(RhodiolasachalinensisA．Bor)是景天科(Crassulaceace)紅景天屬的多年生草本植物，主要分布于長白山地區(qū)，是長白山珍稀特色藥材之一.高山紅景天用作“適應(yīng)原”樣藥材，具有抗缺氧、抗衰老、抗腫瘤、抗疲勞、預防高原反應(yīng)、降血糖等多種功能[1-3].目前，高山紅景天的人工栽培品種尚未形成規(guī)模，僅在吉林省臨江、敦化、和龍等地的山區(qū)有少量栽培，較大的栽培基地正在建設(shè)當中,位于吉林省安圖縣高海拔林下山地.本文采用高效液相色譜法和氣相色譜法，對產(chǎn)自長白山地區(qū)3～6年生的人工栽培高山紅景天和4年生野生高山紅景天中紅景天苷含量和農(nóng)藥殘留量進行測定，為了解高山紅景天藥材質(zhì)量信息以及制定藥材標準提供參考.

1 儀器與試藥

儀器有Agilent 1260 Infinity LC，Agilent 6890氣相色譜儀，配Ni63電子捕獲檢測器(ECD)和SK5200HP超聲波清洗器；FW100高速萬能粉碎機.紅景天苷對照品(中國藥品生物制品檢驗所，批號為10818-200404)，六六六(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC)、滴滴涕(ρ，ρ’-DDE、ο，ρ’-DDT、ρ，ρ’-DDD和ρ，ρ’-DDT)標準溶液濃度均為100 μg/mL(中國國家標準物質(zhì)研究中心，批號分別為GBW-060081、GBW060082、GBW060083、GBW060084、GSB05-2280-2008、GSB05-2281-2008、GSB05-2282-2008、GSB05-2283-2008)，甲醇、丙酮、正己烷為色譜純，其余試劑均為分析純.

①長白山朝鮮一側(cè)4年生野生高山紅景天; ②長白山安圖一側(cè)4年生野生高山紅景天; ③ 6年生人工栽培高山紅景天; ④ 5年生人工栽培高山紅景天; ⑤ 4年生人工栽培高山紅景天; ⑥ 3年生人工栽培高山紅景天.以上紅景天均經(jīng)延邊大學藥學院呂慧子副教授鑒定.

2 紅景天苷含量的測定

2.1 溶液的制備[4-5]

2.1.1對照品溶液 取紅景天苷對照品，精密稱定，加甲醇制成0.5 mg/mL溶液.

2.1.2供試品溶液的制備 精密稱取粉末(過3號篩)0.5 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇10 mL，超聲提取30 min；提取液置10 mL容量瓶中定容，用0.45 μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液.

2.2 色譜條件[6]

柱溫為25 ℃，色譜柱為PLATISTLTM C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.01 mol/L乙酸銨溶液(20∶80,體積比)；檢測波長為275 nm，流速為1.0 mL/min，進樣量為5 μ；以外標法定量.對照品及供試品溶液的色譜圖如圖1所示.

圖1 對照品(A)和供試品(B)溶液的色譜圖

2.3 線性關(guān)系

將對照品溶液稀釋制成系列濃度的標準溶液，以濃度(mg/mL)為橫坐標(X)，峰面積值為縱坐標(Y)，線性擬合后得到回歸方程Y=303.179X-43 875，r=0.999 8.

2.4 精密度

取對照品溶液并按2.2的色譜條件重復進樣以測定紅景天苷峰面積值，結(jié)果顯示紅景天苷峰面積的RSD值為1.19%(n=6)，這表明儀器精密度良好.

2.5 重復性

取同一供試品溶液，按色譜條件2.2測定，結(jié)果顯示紅景天苷的RSD值為1.03%(n=6)，這表明該方法的重復性良好.

2.6 穩(wěn)定性

分別以0，2，4，8，12，24 h按色譜條件2.2測定供試品溶液，結(jié)果顯示紅景天苷峰面積的RSD值為1.37%(n=6)，這表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.7 回收率

精密稱取已知紅景天苷含量的樣品(1.414 mg/g)，定量加入紅景天苷對照品，按2.1.2中方法制備供試品溶液，按色譜條件2.2測定，結(jié)果顯示平均加樣回收率為96.62%，RSD值為1.32%.

2.8 樣品測定

將各樣品按2.1.2中方法制成供試品溶液，按2.2的色譜條件測定紅景天苷含量，結(jié)果見表1.

表1 紅景天藥材中紅景天苷含量的測定結(jié)果

3 六六六、滴滴涕殘留量的測定

3.1 供試品的制備[7-8]

精密稱取粉碎后過5號篩的紅景天粉末2.000 0 g，加石油醚20 mL，振蕩30 min，過濾，濃縮，轉(zhuǎn)移至10 mL刻度的試管中，并用石油醚定容至5 mL.加入0.5 mL濃硫酸，漩渦混旋器混旋0.5 min，10 000 r/min離心5 min，取上清液.

3.2 色譜條件[9]

毛細管色譜柱為HP-5(0.32 mm×30 m×0.25 μm)；載氣為氮氣，流速為1 mL/min；不分流進樣；進樣口溫度為250 ℃；檢測器溫度為300 ℃；采用程序升溫，初始溫度為100 ℃，以10 ℃/min升溫至220 ℃，保持20 min；進樣量為2 μL.以保留時間定性，峰面積外標法定量.

3.3 線性與檢出限[10]

根據(jù)3.2所列儀器測試條件對六六六(α-HCH，β-HCH,γ-HCH,δ-HCH)和滴滴涕(ρ，ρ’-DDD、ρ，ρ’-DDE、ο，ρ’-DDT、ρ，ρ’-DDT)標準樣品進行檢測，經(jīng)分離的8種有機氯農(nóng)藥的色譜圖見圖2.配制濃度為5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 μg/L的系列標準溶液，氣相色譜分析結(jié)果以峰面積對標準濃度進行線性回歸.稱取已知不含六六六、滴滴涕的紅景天供試樣品，加入各不同濃度的對照品溶液，以信噪比為3的色譜峰作為檢測限量，以樣品提取方法中的取樣量和定容體積計算本方法的檢出限.8種有機氯農(nóng)藥線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及方法檢出限的測定結(jié)果見表2.表2表明，在5.0～100.0 μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，該方法的線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.99，8種農(nóng)藥的最低檢出限為0.6～1.2 μg/L.

圖2 對照品色譜圖

表2 方法學考察結(jié)果

3.4 回收率和精密度

對同一紅景天樣品，按照3.2方法連續(xù)測定加標回收率5次，計算其平均回收率和相對標準偏差，結(jié)果見表2.表2表明，8種有機氯農(nóng)藥的加標回收率為87.5%～102.3%，相對標準偏差(RSD)為0.9%～3.4%，表明試驗方法具有較好的準確度和精確度.

3.5 含量測定

按3.2法對7種紅景天樣品進行含量測定，測定結(jié)果中均未檢測到六六六、滴滴涕農(nóng)藥殘留.

4 結(jié)論

本文采用高效液相色譜法和氣相色譜法，對產(chǎn)自長白山地區(qū)3～6年生的人工栽培高山紅景天和4年生野生高山紅景天中紅景天苷含量和農(nóng)藥殘留量進行了測定，實驗結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地及年限的高山紅景天中紅景天苷含量有差異，其中野生品種含量最高，人工栽培品種含量低于野生品種，這與文獻[11]的結(jié)果相符合.在各樣品中均未檢出農(nóng)殘六六六和滴滴涕，表明長白山地區(qū)高山紅景天生藥材尚無嚴重農(nóng)藥污染.

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