愈骨膠囊的薄層色譜鑒別

何騰龍，譚亞亞，孫艷霞

(1. 楊凌生物醫(yī)藥科技有限公司，陜西 西安 712100; 2. 西安正大制藥有限公司，陜西 西安 710043)

愈骨膠囊是中醫(yī)骨傷驗(yàn)方，由血竭、骨碎補(bǔ)、續(xù)斷、牛膝、紅花、元胡等組方。方中血竭活血化瘀、消腫止痛，為君藥;骨碎補(bǔ)、續(xù)斷、牛膝補(bǔ)肝腎、接骨續(xù)筋，為臣藥;紅花、元胡等活血化瘀、止痛，為佐使藥[1]?？诜悄z囊治療骨痹，療效明顯[2]，但缺乏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。為有效控制該制劑的質(zhì)量，現(xiàn)對(duì)處方中的血竭、大黃、三七、骨碎補(bǔ)、沒(méi)藥采用薄層色譜(TLC)法進(jìn)行定性鑒別，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);Sartorius BS224S 型分析天平。血竭對(duì)照藥材(批號(hào)為120906 -200609)、大黃對(duì)照藥材(批號(hào)為120902-200408)、大黃素對(duì)照品(批號(hào)為110756-200110)、三七對(duì)照藥材(批號(hào)為120941 -200807)、三七皂苷R1對(duì)照品(批號(hào)為110745 -200617)、柚皮苷對(duì)照品(批號(hào)為110722 -200309)、天然沒(méi)藥對(duì)照藥材(批號(hào)為120967-200903)，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;愈骨膠囊(批號(hào)分別為110409，110410，110411)、陰性對(duì)照品，均由楊凌生物醫(yī)藥科技有限公司提供;硅膠G(青島海洋化工廠);羧甲基纖維素鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);其他試劑均為分析純，購(gòu)自西安市化學(xué)試劑廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 血竭

取本品內(nèi)容物3 g，加乙醚50 mL，加熱回流提取2 次，每次30 min，濾過(guò)，合并2 次濾液，揮干溶劑，加甲醇10 mL 使溶解，加在中性氧化鋁柱(100 ～200 目，2 g，內(nèi)徑為1 cm)上，收集流出液，濃縮至約2 mL，作為供試品溶液。取按處方比例和工藝制備不含血竭的陰性對(duì)照品3 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。另取血竭對(duì)照藥材0.1 g，加乙醚10 mL，密塞，振搖，放置10 min，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液。照2010 年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB 中薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3 種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(95∶5)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的主斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液色譜則無(wú)此斑點(diǎn)。見圖1A。

2.2 大黃

取本品內(nèi)容物5 g，加甲醇50 mL，鹽酸5 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)铀?0 mL 使溶散，用乙醚提取2 次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状? mL，作為供試品溶液。取按處方比例和工藝制備不含大黃的陰性對(duì)照品3 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0.03 g，同法制成對(duì)照藥材溶液;再取大黃素對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL 含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照2010 年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB中薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4 種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚(30 ～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15 ∶5 ∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外線燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，而陰性對(duì)照品溶液色譜則無(wú)此斑點(diǎn)。見圖1 B1和圖1 B2。

2.3 三七

取本品內(nèi)容物5 g，加甲醇100 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL 使溶散，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液;用氨試液20 mL，洗滌1 次，棄去水層，再用水洗滌2 次，每次20 mL，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為供試品溶液。取按處方比例和工藝制備不含三七的陰性對(duì)照品5 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。取三七對(duì)照藥材0.5 g，加水5 滴，攪勻，加水飽和的正丁醇5 mL，密塞，振搖10 min，放置2 h，離心，取上清液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為對(duì)照藥材溶液;另取三七皂苷R1對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。照2010 年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB 中薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4 種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15 ∶40 ∶22 ∶10)10 ℃以下放置的下層溶液展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與三七對(duì)照藥材和三七皂苷R1對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的主斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此斑點(diǎn)。見圖1 C。

2.4 骨碎補(bǔ)

取本品內(nèi)容物10 g，加甲醇100 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL 使溶散，用乙酸乙酯提取2 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為供試品溶液。另取按處方比例和工藝制備不含骨碎補(bǔ)的陰性對(duì)照品10 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL 含0.2 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。照2010 年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB 中薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3 種溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在70 ℃加熱4 min，置紫外線燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液色譜則無(wú)此斑點(diǎn)。見圖1 D。

2.5 沒(méi)藥

取本品內(nèi)容物2.5 g，加乙醚50 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液揮至近干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為供試品溶液。取天然沒(méi)藥對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取按處方比例和工藝制備不含沒(méi)藥的陰性對(duì)照品2.5 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。照2010 年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB 中薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3 種溶液各5 ～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-乙醚(4 ∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，立即噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。置紫外線燈 (254 nm)下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的主斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液色譜則無(wú)此斑點(diǎn)。見圖1 E。

圖1 薄層色譜圖

3 討論

薄層色譜法是鑒別中藥最常用的方法，專屬性強(qiáng)，可比性、靈敏度好，是藥品檢驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的鑒別手段之一[3]。本處方中血竭為君藥，且是貴重藥品，藥典中有較成熟的質(zhì)量控制方法，考慮檢測(cè)方法的通用、成熟、可行及本品種的劑型特點(diǎn)，認(rèn)為薄層色譜法比較合理，故采用薄層色譜法鑒別處方中的血竭及大黃、三七、骨碎補(bǔ)、沒(méi)藥的特征色譜斑點(diǎn)，結(jié)果方法重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾，可以定性地控制該制劑的質(zhì)量。

對(duì)于沒(méi)藥，經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)用乙醚提取效果較好，可除去脂溶性成分，有效地排除背景色帶的干擾現(xiàn)象，其斑點(diǎn)分離清晰。

曾對(duì)方中的續(xù)斷、牛膝、紅花、元胡采用不同的提取方法和展開劑進(jìn)行薄層色譜試驗(yàn)，但因薄層板效果不佳，專屬性不強(qiáng)，故未列入正文。

[1] 王 琴，邢 茂，易美彤，等. 愈骨膠囊鎮(zhèn)痛和抗炎活性的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)藥房，2011，22(27)∶2 506.

[2] 姜麗芳，王吉明，都洪敏. 愈骨膠囊治療骨痹的臨床觀察[J]. 齊魯藥事，2012，31(8)∶479 -482.

[3] 趙希賢，尤麗華，楊秉呼，等. 中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)常見問(wèn)題探討[J]. 中國(guó)藥業(yè)，2013，22(6)∶2 -3.