高效液相色譜法測(cè)定氯鋅油中氯霉素含量

胡娟妮，聶 平，鄧永琪，李曉燕，李文莉

(1. 中南大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410013;2. 湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410001)

氯鋅油為第2 版《中國醫(yī)院制劑規(guī)范·西藥制劑》收載的制劑，由氯霉素、氧化鋅、麻油等組方，適用于亞急性及慢性皮炎、濕疹、燙傷等，對(duì)嬰幼兒重度臀紅有良好效果[1-2]。低鈣血癥患兒靜脈滴注時(shí)出現(xiàn)局部皮膚紅腫、水皰時(shí)，給予氯鋅油局部涂藥后，可不需拔針重新穿刺，減輕了患兒痛苦[3]。改良后的氯鋅油滲透性強(qiáng)，具有減輕組織水腫、軟化痂皮的作用，適用于小兒消化道術(shù)后皮膚感染[4]。氯鋅油的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)均為各醫(yī)院的注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，各標(biāo)準(zhǔn)中缺乏對(duì)氯霉素的含量控制方法，因此建立該品種中氯霉素的含量測(cè)定方法很有必要。筆者建立了氯鋅油中氯霉素的含量測(cè)定方法，旨在為有效地控制氯鋅油的質(zhì)量提供參考。

1 儀器與試藥

LC-20AT 型高效液相色譜儀(日本島津公司);LC Solution色譜工作站;Mettler AE-200 型電子天平，Mettler CP-225D 型電子天平(德國梅特勒公司);超高速離心機(jī)。重蒸餾水自制，甲醇為色譜純，均經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾;其余試劑均為分析純;氯霉素對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為130555-200602，含量99.4%)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Waters C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.01 mol /L 庚烷磺酸鈉緩沖溶液(取磷酸二氫鉀6.8 g，用0.01 mol/L 庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀釋至1 000 mL，再加三乙胺5 mL，混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH 至2.0)-甲醇(60 ∶40);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):277 nm;柱溫:30 ℃。理論板數(shù)按氯霉素計(jì)，不低于5 000。

取對(duì)照品溶液、供試品溶液及缺氯霉素的陰性對(duì)照品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果表明，樣品中其他成分對(duì)氯霉素的測(cè)定無干擾，見圖1。

2.2 溶液制備[5]

圖1 高效液相色譜圖

精密稱取氯霉素對(duì)照品52.03 mg，置50 mL 容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。精密吸取對(duì)照品貯備液各0.5，2.0，5.0，20.0 mL，分別置50 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.010 34 g /L 的對(duì)照品溶液Ⅰ、0.041 37 g /L 的對(duì)照品溶液Ⅱ、0.103 4 g /L 的對(duì)照品溶液Ⅲ、0.413 7 g /L 的對(duì)照品溶液Ⅳ、以及1.034 mg /mL 對(duì)照品溶液Ⅴ。精密稱取本品適量(約相當(dāng)于氯霉素10 mg)，置50 mL 離心管中，加入石油醚(30-60)25 mL 使溶解，搖勻，4 000 r/min 離心3 min，棄去上清液，加甲醇25 mL，搖勻，3 000 r/min 離心2 min，收集上清液于100 mL 容量瓶中，再重復(fù)收集甲醇提取液2 次，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按處方比例和方法去除氯霉素外的其余輔料制成缺氯霉素樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺氯霉素的陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液Ⅰ～Ⅴ各10 μL，注入高效液相色譜儀測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=2 ×107X-209 35，r=1。結(jié)果表明，氯霉素對(duì)照品質(zhì)量濃度在0.010 34 ～1.034 g/L 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取氯霉素對(duì)照品溶液Ⅲ，按擬訂色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，每次10 μL，記錄色譜峰面積。結(jié)果的RSD 為0.08%。表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液(批號(hào)為120427)，分別于配制后的0，1，2，4，6，8 h 時(shí)，精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定氯霉素峰面積。結(jié)果的RSD 為0.39%，表明供試品溶液8 h 內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為120427)樣品，依法制備供試品溶液，測(cè)定氯霉素的含量。結(jié)果氯霉素的平均含量為標(biāo)示量的98.6%，RSD 為0.94%，表明方法重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn):精密稱取氯霉素原料9 份，分別加入相應(yīng)處方量的空白輔料，制成每2 g 中約含氯霉素的量分別為0.08，0.10，0.12 mg 的溶液，按照樣品處理方法處理，加甲醇至刻度，搖勻;另取氯霉素原料適量，加甲醇定量稀釋并制成每1 mL 含氯霉素0.10 mg 溶液，作為對(duì)照品溶液。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL 注入高效液相色譜儀;按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見表1。

表1 氯霉素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果( n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取不同批次的氯鋅油樣品，依法制備供試品溶液。結(jié)果批號(hào)為120427 和120509 的樣品含量為標(biāo)示量的98.5%和99.3%。

3 討論

供試品溶液制備方法的確定:參照2010 年版《中國藥典(二部)》中氯霉素的性狀[6]，氯霉素在甲醇、乙醇、丙酮或丙二醇中易溶，在水中微溶，而氧化鋅在水或乙醇中幾乎不溶，故首先采用石油醚除去輔料麻油，再用甲醇提取氯霉素。本試驗(yàn)考察了不同提取方式、提取次數(shù)、提取時(shí)間的提取效率，選擇最優(yōu)提取條件。而離心的目的是分離溶液與沉淀，便于收集上清液，故離心的轉(zhuǎn)速與時(shí)間不會(huì)影響氯霉素的提取效率，在試驗(yàn)過程中觀察發(fā)現(xiàn)3 000 r /min 離心2 min 時(shí)，易于收集上清液。

檢測(cè)波長(zhǎng)選擇:采用紫外分光光度法測(cè)定，氯霉素在277 nm 波長(zhǎng)附近有最大吸收，因2010 年版《中國藥典(二部)》氯霉素項(xiàng)下含量測(cè)定選擇277 nm 波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)，故本試驗(yàn)選擇該檢測(cè)波長(zhǎng)。

流動(dòng)相選擇:本試驗(yàn)曾采用甲醇-水體系洗脫，但氯霉素峰形拖尾，理論板數(shù)較低，采用甲醇-庚烷磺酸鈉緩沖溶液體系后收到了很好的效果，可以滿足測(cè)定需要。

[1] 陳淑英，陳春青，陳紅梅，等. 氯鋅油軟膏用于嬰兒紅臀的效果觀察[J]. 當(dāng)代護(hù)士，2008(11):39.

[2] 丁川中，王鳳姣，肖 嬪，等.2 種藥物治療嬰幼兒重度臀紅的效果比較[J]. 當(dāng)代護(hù)士，2009(10):60.

[3] 楊亞玲，邵成香. 氯鋅油治療靜脈注射鈣劑外滲[J]. 護(hù)理學(xué)雜志，2002，1(17):27.

[4] 王可為. 改良氯鋅油軟膏在小兒消化道術(shù)后皮膚感染中的應(yīng)用[J].護(hù)理學(xué)雜志，2007，2(22):62.

[5] 魏丕紀(jì)，劉鳳聲，董偉海，等. 氯鋅油軟膏的制備及臨床應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001，21(9):564.

[6] 國家藥典委員會(huì). 中國藥典二部[J]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1 029 -1 030.