寧心寶膠囊的X 射線衍射Fourier 指紋圖譜分析

柳江紅，劉巖峰，張 鑫

(1. 河北省張家口市第一醫(yī)院，河北 張家口 075000; 2. 河北省張家口陽(yáng)原縣醫(yī)院，河北 張家口 075000)

寧心寶膠囊為從新鮮冬蟲(chóng)夏草中分離得到的麥角菌科真菌頭孢Cephalospovium sinensis Chen.Sp.nov. 經(jīng)液體發(fā)酵后得到的菌絲體干燥粉末制成的膠囊，是一種抗心律失常的中成藥，商品名為安可新。該藥適用于老年器質(zhì)性心臟病合并心律失常患者，尤其是伴有竇性心動(dòng)過(guò)緩或(和)傳導(dǎo)阻滯的室上性心律失常患者，具有一定的臨床優(yōu)勢(shì)。但以往多對(duì)寧心寶膠囊臨床療效及作用機(jī)制研究，對(duì)其藥物成分的研究甚少。本研究中采用X 射線衍射Fourier 指紋圖譜法分析寧心寶膠囊的主要成分，并提供圖譜與數(shù)值化的信息。為確證寧心寶主要成分，筆者以天然冬蟲(chóng)夏草和金水寶膠囊作為對(duì)照[1-2]，結(jié)果寧心寶膠囊的主成分與金水寶一致，局部差異源于工藝條件的不同。

1 儀器與試藥

日本理光(Rigaku)D/max-2550 型粉末X 射線衍射儀。寧心寶膠囊(沈陽(yáng)東新藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z21021024，批號(hào)為080401 -001)、百令膠囊(杭州中美華東制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10910036，批號(hào)為120239)、金水寶膠囊(江西金水寶制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10890003，批號(hào)為130339)。

2 方法和結(jié)果

2.1 試驗(yàn)條件

CuKα 輻射，石墨單色器，40 kV，250 mA，2 θ 掃描范圍3°～60°，掃描速度每分鐘8°，步長(zhǎng)0.02°，發(fā)散狹縫1.0°，接受狹縫0.30 mm，防散射狹縫1°。

2.2 方法

隨機(jī)抽取上述3 個(gè)樣品6 粒，除去膠囊，倒入瑪瑙研缽，經(jīng)研磨過(guò)100 目篩得粉末樣品，稱(chēng)取3 組100 mg 樣品進(jìn)行平行衍射試驗(yàn)。獲得寧心寶膠囊樣品的X 射線衍射圖譜。相關(guān)衍射信息見(jiàn)表1。

采用粉末X 射線衍射法獲取寧心寶膠囊的微觀衍射圖譜。應(yīng)用光學(xué)衍射中的Fourier 變換原理，可將傳統(tǒng)的宏觀性狀顯微鑒別所得的真實(shí)空間中的樣品結(jié)構(gòu)信息，轉(zhuǎn)換為在衍射空間再現(xiàn)的對(duì)應(yīng)于樣品所含全體組分的衍射圖像。依據(jù)衍射圖像幾何拓?fù)?形狀)異同和衍射峰值(d/ I/ I0)的一致性，來(lái)確定其相同或不同，達(dá)到鑒定目的。因?yàn)楸狙芯康奈镔|(zhì)為中藥，屬多組分復(fù)雜體系，而且由于產(chǎn)地、物候、光照、工藝等條件的差異，在同一種中藥中所含組分的含量存在相對(duì)變化。這是復(fù)雜體系有別于簡(jiǎn)單物質(zhì)(如單一化學(xué)成分)的重要差別。在微觀衍射圖像上就表現(xiàn)為圖形拓?fù)湫螤畹漠愅室詧D形拓?fù)涞漠愅鳛橐环N定性分類(lèi)的方法，同時(shí)對(duì)比衍射峰值的異同實(shí)現(xiàn)數(shù)值化鑒定目的。衍射試驗(yàn)數(shù)據(jù)以晶面間距d(A)與衍射峰相對(duì)強(qiáng)度(I/ I0)表示，并記為d/ I/ I0。X 衍射Fourier 指紋圖譜是由衍射圖形的拓?fù)湫螤钆c諸衍射峰值構(gòu)成。

2.3 結(jié)果

寧心寶、百令膠囊與金水寶膠囊的衍射圖形拓?fù)涫且恢碌?圖1)，衍射特征峰間的符合度Σ 高(表1)。由此確認(rèn)三者為含有共同主成分的物質(zhì)。本方法可應(yīng)用于中藥材和中成藥的鑒定，它將把延續(xù)千年的宏觀性狀顯微的定性鑒定方法轉(zhuǎn)換為在微觀衍射圖像中，以圖形、數(shù)值重現(xiàn)其整體結(jié)構(gòu)之異同，從而實(shí)現(xiàn)了復(fù)雜體系的微觀鑒定。結(jié)果表明，寧心寶膠囊與金水寶膠囊均是以CS-4 發(fā)酵蟲(chóng)草粉為原料的制劑，二者的主成分一致。表1 中所列的3 個(gè)樣品的衍射特征峰符合度Σ(即每種成分的特征峰加和)高于0.82。

表1 3 種樣品衍射信息表

3 討論

目前我國(guó)中藥產(chǎn)地眾多，導(dǎo)致了藥物成分的不穩(wěn)定性，從而影響其臨床療效。此外，蟲(chóng)草中含有的蟲(chóng)草素具有抗菌、抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫力等作用，具有很大的開(kāi)發(fā)價(jià)值，因其價(jià)格昂貴，故目前市場(chǎng)偽品層出不窮。中藥品種的真?zhèn)舞b別是確保中藥制劑質(zhì)量和臨床用藥安全的基礎(chǔ)，由于中藥材及中藥成分復(fù)雜，一般的理化法不能準(zhǔn)確地加以鑒別。X 射線衍射分析是研究物質(zhì)微觀成分結(jié)構(gòu)的一種有效手段，不僅可用于植物、動(dòng)物、礦物類(lèi)中藥的鑒定，還可用于菌類(lèi)中藥和中藥復(fù)方的鑒定，為中藥的鑒定提供了準(zhǔn)確、有效、快速的鑒別方法，并為臨床用藥提供了安全保障[3]。

圖1 X 射線衍射圖

本研究結(jié)果表明，X 射線衍射Fourier 指紋圖譜法可用于復(fù)雜體系的識(shí)別與鑒定。中藥及其制劑是一種源遠(yuǎn)流長(zhǎng)的民族瑰寶，由于其成分復(fù)雜，并受自然環(huán)境的影響出現(xiàn)了許多組分的含量變化，形成具有自身特色的成千上萬(wàn)個(gè)種類(lèi)。如源自礦物的中藥材會(huì)因地球內(nèi)部在不同區(qū)域中具備不同的地質(zhì)條件，而造成不同礦區(qū)的同一種礦物其組分存在差異。這些來(lái)自無(wú)機(jī)物世界的物質(zhì)，大多數(shù)仍屬于由有限組分混合而成的一個(gè)不太復(fù)雜的體系。X射線粉末衍射分析從上世紀(jì)初，便以礦物質(zhì)成分分析作為一個(gè)重要的研究探索領(lǐng)域，在此基礎(chǔ)上，形成了X 射線晶體學(xué)中的物相分析，并且延用了簡(jiǎn)單物質(zhì)體系的還原歸一方式，去找出全部組分，形成了認(rèn)識(shí)物質(zhì)世界的還原論思維方式。然而，當(dāng)認(rèn)識(shí)源于動(dòng)植物生命世界中的個(gè)體時(shí)，面對(duì)一個(gè)個(gè)復(fù)雜體系不可能用還原論方式一一剖析，因?yàn)樗鼈冊(cè)?jīng)是生命體系，有別于單一物質(zhì)，是由幾十、上百種成分在大自然的環(huán)境中，隨光照、物候、地域等變化，歷經(jīng)千萬(wàn)年的漫長(zhǎng)歲月而形成的一種組分復(fù)雜、變化各異的復(fù)雜體系。中藥中的動(dòng)植物藥是其中的典型物質(zhì)，因此在弘揚(yáng)傳統(tǒng)藥學(xué)的認(rèn)知上，應(yīng)該從物種的形成去認(rèn)識(shí)其組成，因此在發(fā)展創(chuàng)新祖國(guó)藥學(xué)中，要立足于物質(zhì)屬性，而不能去“拆零還原”，因?yàn)檫@是絕對(duì)不可能做到的事情。本研究所用的衍射Fourier 指紋圖譜法，借鑒了光學(xué)衍射原理，立足于復(fù)雜體系的認(rèn)知特點(diǎn)，應(yīng)用衍射圖形的拓?fù)湎嗟扔^念，將有序與無(wú)序、穩(wěn)定與漲落等概念從簡(jiǎn)單物質(zhì)進(jìn)入到復(fù)雜體系的整體結(jié)構(gòu)研究中，期望能得到解析中藥及其制劑結(jié)構(gòu)中的量與形的模糊識(shí)別，最終得到一個(gè)通用的分析鑒定方法，形成中藥材及其制劑的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，建立中藥制劑的計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)系統(tǒng)。

綜上所述，X 射線衍射分析技術(shù)在新藥及制藥研究中有著廣闊的應(yīng)用前景，是一種現(xiàn)代物理分析技術(shù)，可幫助人類(lèi)認(rèn)識(shí)和了解未知微觀世界物質(zhì)存在的形式與狀態(tài)，并給出定性與定量分析結(jié)果。該方法具有簡(jiǎn)便易行、直觀、圖譜信息量大、指紋性強(qiáng)、穩(wěn)定可靠、所需樣品量少、結(jié)果可靠的特點(diǎn)，其分析測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、再現(xiàn)性強(qiáng)，減少了人為因素的影響，是目前世界先進(jìn)國(guó)家普遍接受的一種物理分析技術(shù)和測(cè)試手段[4-6]。隨著我國(guó)加入世界貿(mào)易組織(WTO)，進(jìn)出口貿(mào)易的增加，X 射線衍射分析技術(shù)將在我國(guó)傳統(tǒng)藥物(中藥材、中成藥)和創(chuàng)新藥物(化學(xué)藥物)研究中發(fā)揮更大的作用。

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