粘蛋白MUC1在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)研究

李 娟，趙桂桂

（鄭州華信學(xué)院， 河南 鄭州 451150）

粘蛋白MUC1在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)研究

李 娟，趙桂桂

（鄭州華信學(xué)院， 河南 鄭州 451150）

目的：檢測(cè)粘蛋白MUC1在膀胱移行細(xì)胞癌和膀胱良性病變及正常膀胱組織中的表達(dá),探討其在膀胱移性細(xì)胞癌診斷、預(yù)后和治療中的意義.方法：采用免疫組化S-P方法和彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)，對(duì)40例膀胱移行細(xì)胞癌組織，14例腺性膀胱炎組織（對(duì)照組）和17例正常膀胱組織（對(duì)照組）粘蛋白MUC1表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)分析；所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.結(jié)果：MUC1在膀胱移行細(xì)胞癌組織中表達(dá)高于正常膀胱組織，兩者差異性有顯著性意義(P＜0.05)；與病人年齡、性別、結(jié)石、感染、首發(fā)或復(fù)發(fā)等無(wú)明顯相關(guān)(P＞0.05).結(jié)論：從正常膀胱粘膜組織到腺性膀胱炎再向膀胱癌的演進(jìn)過(guò)程中MUC1的表達(dá)具有增多的趨勢(shì)，MUC1 是反應(yīng)膀胱粘膜上皮細(xì)胞代謝活躍的增生特征，而不是惡性變的標(biāo)志.

膀胱腫瘤；MUC1；免疫組織化學(xué)

近年來(lái)，我國(guó)部分城市腫瘤發(fā)病率報(bào)告顯示膀胱癌發(fā)病率有增高趨勢(shì)[1].腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是更為復(fù)雜的分 子生物學(xué)變化過(guò)程.癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中會(huì)遇到一系列的組織屏障,腫瘤細(xì)胞穿過(guò)組織屏障后,在自分泌移動(dòng)因子和旁分泌移動(dòng)因子的作用下移動(dòng),到達(dá)其他器官和組織繼續(xù)生長(zhǎng)[2].MUC1是一種多形態(tài)的高糖基化、高相對(duì)分子質(zhì)量的跨膜糖蛋白.MUC1在粘膜表面可產(chǎn)生潤(rùn)滑作用,對(duì)保護(hù)上皮免受外界理化因素侵襲起到很重要的屏障作用,隨著對(duì) MUC1研究的逐漸深入，專家們發(fā)現(xiàn) MUC1是一種具有多種功能的分子，在調(diào)節(jié)細(xì)胞間的相互作用，參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)生、發(fā)展和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)中起著重要的作用[3].為了進(jìn)一步探討膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的根本原因，本研究針對(duì)MUC1在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)進(jìn)行了相關(guān)探討.

材料與方法

1 材料

1.1 標(biāo)本

40例膀胱移行細(xì)胞癌（BTCC）標(biāo)本來(lái)自新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一、三附屬醫(yī)院和河南省人民醫(yī)院；所有患者均進(jìn)行手術(shù)治療；膀胱腫瘤患者中，男性 29例，女性 11例，年齡 24-82歲，平均 56.12歲；所有病例經(jīng)醫(yī)院病理診斷為膀胱移行細(xì)胞癌，設(shè)為 BTCC組.同時(shí)收集 14例腺性膀胱炎標(biāo)本及 17例正常膀胱組織（包括膀胱炎）作為對(duì)照組.對(duì)照組中：男性13例，女性 18例，年齡 20-82歲，平均 54.5歲.所有材料均經(jīng)過(guò) 10%緩沖甲醛固定，石蠟包埋，所有病例切片均經(jīng)過(guò)復(fù)查，再次診斷分級(jí)、分期.

1.2 切片處理

研究用標(biāo)本在光鏡下再次確診，進(jìn)行組織學(xué)分級(jí).所用蠟塊放置冰箱 24h后均切成 2-3um切片(載玻片提前經(jīng)多聚 -L-賴氨酸防脫片處理)，在 70℃烤箱烤 10h取出備用.

2 免疫組織化學(xué)方法

2.1 試劑：鼠抗人 MUC1單克隆抗體；通用型免疫組織化學(xué)超敏 S-P試劑盒；S-P試劑盒；PBS緩沖液.

2.2 陽(yáng)性對(duì)照:MUC1用試劑說(shuō)明書(shū)中推薦的乳腺癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)果陽(yáng)性.

2.3 陰性對(duì)照：用 PBS緩沖液替代抗孵育切片，結(jié)果陰性. 2.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) MUC1的組織表達(dá)以細(xì)胞漿內(nèi)靠近包膜側(cè)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，取 10個(gè)高倍鏡視野每個(gè)視野計(jì)數(shù) 100個(gè)細(xì)胞，每個(gè)視野下出現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞多于 5個(gè)為陽(yáng)性表達(dá)，小于5個(gè)或沒(méi)有出現(xiàn)視為陰性表達(dá).

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用 SPSS 13.0 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,MUC1的表達(dá)與臨床病理分級(jí)、分期及部分生物學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系采用四格表 χ2進(jìn)行檢驗(yàn),其檢驗(yàn)水準(zhǔn) a=0.05，P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

結(jié)果

1 粘蛋白MUC1的表達(dá)

MUC1染色以細(xì)胞漿或細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞.BTCC組40例中MUC1陽(yáng)性表達(dá)率為82.5%(33/40)；腺性膀胱炎組陽(yáng)性表達(dá)率為64.3%(9/14)；正常組織組陽(yáng)性表達(dá)率為23.5%(4/17).在淺表組、浸潤(rùn)組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.5%，92.7%.MUC1的陽(yáng)性表達(dá)率在腫瘤組和腺性膀胱炎組間的差異性無(wú)顯著性意義(P>0.05)；MUC1的陽(yáng)性表達(dá)率在正常組和腺性膀胱炎組間的差異性有顯著性意義(P<0.05)；在與膀胱移行細(xì)胞癌相關(guān)的幾種臨床生物學(xué)特征統(tǒng)計(jì)中，年齡組中大于 50歲與小于 50歲的陽(yáng)性表達(dá)率分別是 88.9%，78.7%，二者差異性無(wú)顯著性意義(P>0.05)，吸煙組與非吸煙組陽(yáng)性表達(dá)率分別為 90.2%，66.7%，二者差異性有顯著性意義(P<0.05)；合并感染或結(jié)石組與單純腫瘤組異常表達(dá)率分別為 88.9%，90.2%，二者差異性無(wú)顯著性意義(P>0.05).

MUC1在膀胱移行細(xì)胞癌（病理分級(jí)）及對(duì)照組中的表達(dá)

討論

1 MUC1的作用及在腫瘤發(fā)病及侵襲中的作用

MUC1胞外段決定著 MUC1特異性的空間結(jié)構(gòu)和免疫原性，是細(xì)胞表面最先與機(jī)體免疫系統(tǒng)接觸的膜表面分子之一[4].MUC1在正常上皮組織中起著重要作用：MUC1可能參與和選擇素的相互作用,促進(jìn)細(xì)胞-細(xì)胞間的相互作用,有利于胚泡植入的發(fā)生[5].Uehara等報(bào)道 MUC1基因轉(zhuǎn)錄后可發(fā)生選擇性剪切，形成多種剪切體，雖然對(duì)于 MUC1基因轉(zhuǎn)錄后發(fā)生選擇性剪切的機(jī)制目前仍不清楚，但這種選擇性剪切可能與細(xì)胞的癌變有一定的關(guān)系[6].另外，血管生成在腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，目前已發(fā)現(xiàn)在一些腫瘤中 MUC1與血管生成因子自發(fā)表達(dá)相關(guān)，從而影響腫瘤后續(xù)的一系列生物學(xué)行為.

2 MUC1在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

研究證明，在膀胱移行細(xì)胞癌中 MUC1發(fā)生質(zhì)與量的改變，并伴隨著一系列的結(jié)構(gòu)和功能改變.MUC1在腫瘤組陽(yáng)性表達(dá)率是 82.5%，在腺性膀胱炎組陽(yáng)性表達(dá)率是64.3%，兩組間差異性無(wú)顯著性意義(p>0.05)；正常組陽(yáng)性表達(dá)率是 23.5%，與腺性膀胱炎組和腫瘤組之間的差異性均無(wú)顯著性意義(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示 MUC1從正常膀胱粘膜組織到腺性膀胱炎再向膀胱癌的演進(jìn)過(guò)程中其表達(dá)有增多的趨勢(shì)，MUC1是反應(yīng)膀胱粘膜上皮細(xì)胞代謝活躍的增生特征，而不是惡性變的標(biāo)志.

3 MUC1在腫瘤治療中的作用

在上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中,MUC1發(fā)生質(zhì)與量的改變,其基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物亦發(fā)生異常選擇性剪接而形成新的抗原表位.由于 MUC1在腫瘤細(xì)胞上異常表達(dá),使之具有區(qū)別于正常 MUC1的腫瘤特異性抗原,而成為腫瘤生物學(xué)治療的新靶點(diǎn)[7].此外 MUC1的多肽骨架中含有許多連續(xù)重復(fù)序列，可非MHC(主要組織相容性復(fù)合體)限制性活化細(xì)胞毒性 T淋巴細(xì)胞(CILs)、特異性殺傷腫瘤細(xì)胞，故可設(shè)計(jì)含有一定數(shù)量連續(xù)重復(fù)序列的肽作為瘤苗來(lái)誘發(fā)針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而消除了糖基化對(duì)肽鏈表位免疫原性的影響.Murray等將 188Rc標(biāo)記 C595單抗，此種復(fù)合物具有較高的免疫活性和特異性，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)能特異定位在膀胱癌組織，可用于膀胱癌特異性靶向治療[8].

總之，隨著 MUC1在泌尿系腫瘤診斷和治療的研究不斷增多，MUC1在腫瘤的生物學(xué)特性、診斷和治療方面扮演著重要角色，充當(dāng)著腫瘤標(biāo)志物和免疫治療靶標(biāo)的雙重身份.由于 MUC1的基因定位已明確，以 MUC1為靶點(diǎn)的基因治療將是未來(lái)的發(fā)展方向.通過(guò)基因調(diào)節(jié)手段改變 MUC1在早期癌癥的表達(dá)有可能影響到細(xì)胞的粘附和極性，從而降低癌轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn).與 MUC1相關(guān)的腫瘤疫苗具有良好的應(yīng)用前景.

〔1〕張薇，項(xiàng)永兵，劉振偉，等.1973-1999 年上海市區(qū)老年人惡性腫瘤發(fā) 病趨勢(shì)分析 [J]. 中華 老 年 醫(yī) 學(xué) 雜 志,2005,24 (9):701-704.

〔2〕夏術(shù)階.膀胱腫瘤實(shí)驗(yàn)研究的發(fā)展現(xiàn)狀與展望[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2004,219(3):263-264.

〔3〕Julian J,Carson DD.Formation of MUC1 metabolic Complex is conserved in tumor-derived and normal epithelialcells [J].Biochem Biophys Res Commun, 2002,17，293(4):1183-1190.

〔4〕Werdelin O,Meldal M,Jensen T,et al.Processing of glycans on glycoprotein and gly-colpeptide antigens in antigen-presenting cells[J].Proc Natl Acad Sci USA, 2002,99(15):9611-9613.

〔5〕Carson DD,Julian J,Lessey BA,et al.MUC1 is a scaffold for selectin ligands in the human uterus[J].Front Biosci, 2006,11(4):2903-2908.

〔6〕OConner JC,Julian J,Lim SD,et a1.MUC1 expression in human prostate cancer cell lines and primary tumors[J]. Prostate Cancer Prostatic Dis,2005,8(1):36-44.

〔7〕Simms MS,Murray A,Denton G,et al.Bishop MC Production and characterisation of a C595 antibody-99m Tc conjugate for immunoscintigraphy of bladder cancer[J].U rol Res,2001,29(1):13-19.

〔8〕Murray A,Simms MS,Scholfield DP,et al.Production and characterization of 188Re- C595 antibody for radioimmunotherapy of transitional cell bladder cancer[J]. Nucl Med,2001,42(5):726-732.

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1673-260X（2014）08-0063-02