曾楨迦，李芳，賈黃，肖小君,2，傅慧

（1.內(nèi)江師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，四川內(nèi)江641100；2.四川省高等學(xué)校特色農(nóng)業(yè)資源研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川內(nèi)江641100）

大花蕙蘭原球莖快速繁殖條件的優(yōu)化

曾楨迦1，李芳1，賈黃1，肖小君1,2，傅慧1

（1.內(nèi)江師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，四川內(nèi)江641100；2.四川省高等學(xué)校特色農(nóng)業(yè)資源研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川內(nèi)江641100）

以大花蕙蘭原球莖（PLB）為試驗(yàn)材料，比較不同濃度植物激素6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）、NAA（萘乙酸），AC（活性炭），有機(jī)添加物（香蕉汁）及不同培養(yǎng)方式（固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)）等因子對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖效果的影響.結(jié)果表明：大花蕙蘭PLB增殖以MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+AC 0.1mg/L結(jié)合液體振蕩的培養(yǎng)方式效果較好，培養(yǎng)基中添加100 g/L香蕉汁對(duì)大花蕙蘭PLB的增殖具有顯著的促進(jìn)作用.

大花蕙蘭；原球莖；增殖；優(yōu)化

大花蕙蘭（Cymbidium hybridum），又稱虎頭蘭、西姆比蘭，是蘭科蘭屬植物中大花型附生種類的雜交種.其花大，花多，花型規(guī)整豐滿，色澤艷麗，花莖直立，花期長(zhǎng)，生長(zhǎng)健壯，栽培容易，近年來(lái)種植極為流行，進(jìn)口品種在中國(guó)的蘭花市場(chǎng)上獨(dú)領(lǐng)風(fēng)騷[1].大花蕙蘭多為雜交品種，其種子繁殖一般無(wú)法保持品種特性，結(jié)實(shí)率相當(dāng)?shù)?，分株能力弱[2]，繁殖系數(shù)低，繁殖速度也比較慢[3]，還容易引起退化，遠(yuǎn)不能滿足大花蕙蘭商品化生產(chǎn)的要求[4].與其他蘭花組織培養(yǎng)一樣，大花蕙蘭主要也是通過(guò)誘導(dǎo)形成原球莖(PLB)再擴(kuò)繁建立繁殖體系[5]，因此，快速增殖原球莖并誘導(dǎo)分化成苗是實(shí)現(xiàn)大花蕙蘭工廠化生產(chǎn)的關(guān)鍵[6].本試驗(yàn)探討了不同濃度的植物激素（6-BA、NAA）、活性炭、有機(jī)添加物（香蕉汁）及不同培養(yǎng)方式（固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)）等因子對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖的影響，為大花蕙蘭商品開發(fā)與利用提供科學(xué)依據(jù)和參考，以達(dá)到降低成本、提高經(jīng)濟(jì)效益的目的.

1 材料與方法

1.1 材料

選用長(zhǎng)勢(shì)一致、品名為“火炬”的大花蕙蘭原球莖（由內(nèi)江師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院植物組織培養(yǎng)室提供）.

1.2 方法

1.2.1 大花蕙蘭原球莖增殖培養(yǎng)的激素濃度篩選

以MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，采用3因素3水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案（見表1），選取生長(zhǎng)健壯、大小一致的原球莖切成直徑5mm左右接入9種培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基中均加入蔗糖30 g/L，瓊脂條7 g/L，pH為5.8左右，其中每個(gè)配方接種6瓶，每瓶接種5個(gè)原球莖.

培養(yǎng)條件：白天24℃、夜間20℃左右，光照時(shí)間為13.5 h/d，光照強(qiáng)度為2 000 lx，室內(nèi)的通氣條件良好，每周觀察原球莖的生長(zhǎng)情況，40 d后統(tǒng)計(jì)增殖后總芽數(shù)、增殖倍數(shù)及生長(zhǎng)狀態(tài).

表1 大花蕙蘭原球莖增殖正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.2 有機(jī)添加物對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖效果的影響

選取方法1.2.1中最佳的大花蕙蘭原球莖增殖培養(yǎng)基作為對(duì)照，在培養(yǎng)基中添加不同濃度梯度香蕉汁(50 g/L、100 g/L、150 g/L)，接種方法和培養(yǎng)條件與1.2.1相同.40 d后觀察增殖的情況，統(tǒng)計(jì)大花蕙蘭原球莖增殖總數(shù)、增殖倍數(shù)及長(zhǎng)勢(shì)情況.

1.2.3 不同培養(yǎng)方式對(duì)原球莖增殖生長(zhǎng)的影響

選取方法1.2.1中最佳的大花蕙蘭原球莖增殖配方作為基本培養(yǎng)基，在固體培養(yǎng)方式中接入質(zhì)量為6.47 g的原球莖，在液體培養(yǎng)方式中接入質(zhì)量為8.71 g原球莖，每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)基50mL.每處理接種6瓶作為重復(fù)，培養(yǎng)40 d后統(tǒng)計(jì)原球莖增殖和生長(zhǎng)情況.液體振蕩培養(yǎng)的轉(zhuǎn)數(shù)為100 r/min，培養(yǎng)條件為溫度22℃，相對(duì)濕度70%～80%，光照強(qiáng)度2 000 lx，每天光照16 h.

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 不同激素濃度配比對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖的影響

經(jīng)過(guò)觀察，原球莖在接種2周后，1號(hào)、6號(hào)和8號(hào)培養(yǎng)基相繼出現(xiàn)小的瘤狀愈傷組織，原球莖顏色較淺，呈橢圓瘤狀，3周之后，原球莖的顏色漸漸從黃綠變?yōu)榈G色，40 d后新生的原球莖充分成熟，顏色轉(zhuǎn)為深綠色.其中2號(hào)、3號(hào)和5號(hào)培養(yǎng)基中原球莖出現(xiàn)少量的黃化現(xiàn)象，3號(hào)有幾顆原球莖出現(xiàn)芽化情況.表2為不同激素配比對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖的影響.

由表2可知，隨著6-BA濃度的增大，原球莖增殖總數(shù)和增殖倍數(shù)也隨著增高，在6-BA為2.0mg/L時(shí)達(dá)到最大，以MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+ AC 0.1 g/L的組合生長(zhǎng)狀況最好，增殖總數(shù)為116個(gè)，增值倍數(shù)為3.87，原球莖生長(zhǎng)健壯，顏色濃綠，長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng).適量的NAA有利于原球莖增殖，以0.2mg/L最佳，當(dāng)NAA的濃度繼續(xù)增加時(shí)，會(huì)抑制原球莖的增殖，且長(zhǎng)勢(shì)不好，說(shuō)明較高濃度的6-BA與低濃度NAA配比，適合大花蕙蘭的原球莖增殖.同時(shí)發(fā)現(xiàn)，添加適量的活性炭可有效抑制原球莖增殖過(guò)程中產(chǎn)生褐化.

表2 不同激素配比對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖的影響

2.2 有機(jī)添加物對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖的影響

由表3可以看出，在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+AC 0.1 g/L培養(yǎng)基中，添加香蕉汁均有利于大花蕙蘭原球莖的增殖，其中添加100 g/L的香蕉汁增殖效果最為明顯，主要表現(xiàn)為原球莖顏色濃綠，生長(zhǎng)健壯，長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，當(dāng)香蕉汁的濃度為150 g/L時(shí)，生長(zhǎng)一段時(shí)間后就會(huì)長(zhǎng)出大量的根，對(duì)生根有明顯的促進(jìn)作用.

表3 有機(jī)添加物對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖的影響

2.3 不同培養(yǎng)方式對(duì)原球莖增殖生長(zhǎng)的影響

由表4可知，液體振蕩培養(yǎng)的原球莖總重為36.28 g，而固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的原球莖總重僅為16.91 g，振蕩培養(yǎng)的原球莖的增殖倍數(shù)(4.2倍)明顯高于固體培養(yǎng)(2.6倍).在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)的原球莖生長(zhǎng)速度快，在短時(shí)間內(nèi)即可誘導(dǎo)出大量的原球莖，且生長(zhǎng)狀況良好；而固體培養(yǎng)中的原球莖生長(zhǎng)速度比較緩慢，前期原球莖生長(zhǎng)現(xiàn)象不明顯，到第2～3周生長(zhǎng)速度較快，切口邊緣膨大，外層細(xì)胞開始誘導(dǎo)分裂，生成綠色的珠狀愈傷組織.這是因?yàn)橐簯B(tài)培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)體可以與培養(yǎng)基充分接觸，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)快速移動(dòng)到培養(yǎng)體表面，從而使吸收養(yǎng)分的速度快于固體培養(yǎng)[7].

表4 培養(yǎng)方式對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖的影響

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明：適宜濃度配比的6-BA、NAA和AC，能有效促進(jìn)大花蕙蘭原球莖的增殖，其中MS+ 6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+AC 0.1 g/L效果較好，在其基礎(chǔ)上添加100 g/L的香蕉汁增殖效果顯著，當(dāng)香蕉汁濃度為150 g/L時(shí)，可明顯促進(jìn)大花蕙蘭的生根，在液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)原球莖生長(zhǎng)狀態(tài)顯著好于在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的原球莖增殖倍數(shù)是固體培養(yǎng)的1.5倍.

在大花蕙蘭組培快繁培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞分裂素6-BA與細(xì)胞生長(zhǎng)素NAA都可促進(jìn)原球莖的增殖以及誘導(dǎo)，兩者以一定濃度組配再添加一定濃度的蔗糖作碳源，可選出最適大花蕙蘭原球莖增殖的培養(yǎng)基，在本試驗(yàn)研究中最適合的濃度為6-BA 2.0 mg/L、NAA 0.2mg/L.韓勁峰等[8]在“大花蕙蘭組織培養(yǎng)及快速繁殖研究”試驗(yàn)中，得出細(xì)胞分裂素6-BA濃度在0.5～1.0mg/L范圍內(nèi)，原球莖的誘導(dǎo)和增殖效果最佳，當(dāng)6-BA濃度超過(guò)1.0mg/L時(shí)，對(duì)原球莖的誘導(dǎo)和增殖反而起抑制作用.但付志惠[9]在“大花蕙蘭快速繁殖技術(shù)的研究”中提到隨著6-BA濃度的升高，原球莖的增殖率上升，當(dāng)6-BA濃度為8.0mg/L時(shí)，叢生芽生長(zhǎng)健壯，顏色濃綠，說(shuō)明其激素濃度越高，增殖率就越高.田英翠等[10]研究結(jié)果表明，當(dāng)NAA的濃度為0.1～0.5mg/L、6-BA為5mg/L左右時(shí)，外植體上原球莖數(shù)最多，原球莖的誘導(dǎo)率達(dá)到最高.本研究表明低濃度生長(zhǎng)素與較高濃度的細(xì)胞分裂素對(duì)大花蕙蘭原球莖增殖有利；低濃度NAA與較高濃度細(xì)胞分裂素6-BA會(huì)促進(jìn)原球莖的增殖，抑制分化.

一般認(rèn)為，一定濃度的活性炭可吸附培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)如酚、醌等，從而有利于原球莖的生長(zhǎng)[11-12].高濃度的活性炭能夠吸收繼代培養(yǎng)中產(chǎn)生的某種物質(zhì)，從而削弱這種物質(zhì)對(duì)原球莖增殖的阻礙作用，而李方認(rèn)為活性炭對(duì)原球莖增殖有抑制作用[13]，與本試驗(yàn)結(jié)論不同，這可能是由于接種的原球莖已經(jīng)多次繼代培養(yǎng)，其體內(nèi)已含大量細(xì)胞分裂素，活性炭的濃度對(duì)其影響較小的緣故.

前人研究認(rèn)為香蕉汁是一類含有氨基酸、激素和酶等有機(jī)成分較為復(fù)雜的天然復(fù)合物，對(duì)植物細(xì)胞和組織的生長(zhǎng)和增殖具有明顯的促進(jìn)作用，還能有效地吸收由外植體分泌的多酚類氧化物，抑制外植體的褐變，降低外植體的死亡率[14].付志惠[9]研究認(rèn)為添加香蕉汁也有利于提高增長(zhǎng)率和生長(zhǎng)勢(shì)，降低其褐化.田英翠等[10]、張超等[15]研究結(jié)果表明復(fù)合添加物如香蕉汁、活性炭、蛋白胨等增殖效果比較明顯，原球莖的生長(zhǎng)更加健壯，這與本文的試驗(yàn)結(jié)果一致.究其原因可能是適宜濃度的香蕉汁等天然有機(jī)物能提供一些必要的微量營(yíng)養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長(zhǎng)激素等，具有較大的pH緩沖作用，對(duì)原球莖的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用.

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【編校：王露】

Optim ization of Conditions for Rapid Propagation of Cymbidium Hybridum Protocorm

ZENGZhenjia1,LIFang1,JIA Huang1,XIAOXiaojun1,2,FUHui1
(1.School ofLife Science,Neijiang Normal University,Neijiang,Sichuan 641100,China;.2.Key Laboratory ofCollegesand Universities in Sichuan for Research and Utilization ofDistinctive Agricultural Undertakings,Neijiang,Sichuan 641100, China)

The effects of different concentrations of plant hormones(6-BA、NAA),AC(activated carbon),organic compounds(banana juice)and different culturemethods(solid culture and liquid culture)on themultiplication of PLB were studied by using Cymbidium hybridium PLB.The results indicated that the bestmethod for PLB propagation wasMS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+AC 0.1mg/L associatingwith liquid shaking culture,adding banana juice 100 g/L in the medium could have significant role on the promotion of themultiplication of Cymbidium hybridium PLB.

Cymbidium hybridum;protocorm;propagation;optimization

S682.313

A

1671-5365(2014)12-0118-03

2014-07-05修回：2014-09-10

內(nèi)江師范學(xué)院大學(xué)生科研項(xiàng)目（13NSB-75）

曾楨迦(1993-)，女，本科生，研究方向?yàn)橹参锝M織培養(yǎng)

肖小君(1982-)，女，碩士，助理研究員，研究方向?yàn)榛ɑ芙M織培養(yǎng)

時(shí)間：2014-09-12 13:00

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1630.Z.20140912.1300.002.htm l