二氫楊梅素分散片制備工藝及質(zhì)量控制

劉 顥，郁建平

(貴州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

二氫楊梅素(dihydromyricetin，DMY)是藤茶(Ampelopsis grossedentata)中的主要成分之一，又名雙氫楊梅樹皮素、雙氫楊梅素、蛇葡萄素。經(jīng)藥理研究證明，二氫楊梅素具有抗炎、抑菌［1］、抗氧化［2］、抗癌［3－4］、解酒［5］和降低血壓血脂等作用，廣泛應(yīng)用于治療呼吸道感染、酒精中毒的中成藥制劑并已在制備抗白血病及鼻咽癌藥物的應(yīng)用領(lǐng)域取得了發(fā)明專利。目前主要作為醫(yī)藥原料藥并作為一類新藥準(zhǔn)備進(jìn)入臨床試驗(yàn)。二氫楊梅素［(2R，3R)－3，5，7－三羥基 －2－(3，4，5－三羥基苯基)苯并二氫吡喃 －4－酮］在25℃水中溶解度為4%，熱水中溶解度更大;林淑英［6］等對二氫楊梅素穩(wěn)定性和影響因素進(jìn)行了考察，證實(shí)二氫楊梅素溶液易發(fā)生氧化，穩(wěn)定性較差，在不超過100℃，加熱時(shí)間不超過30 min以及酸性和中性條件可保持其化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，而金屬離子 Al3+，F(xiàn)e3+，Cu2+等對二氫楊梅素的氧化起誘導(dǎo)催化作用。

分散片是指在水中能迅速崩解并均勻分散的片劑，分散片可以解決難溶性藥物不易溶出以及吸收利用度低等問題［7］，二氫楊梅素的口服利用度不高［8］，將二氫楊梅素制成分散片，可以有效提高二氫楊梅素的溶出度，本文對二氫楊梅素分散片的制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

TDP－6A單沖壓片機(jī)(南通市華宇制藥機(jī)械有限公司)，78X－3C型片劑多用測定儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)，RCZ－6B3型藥物溶出儀(上海海藥檢儀器有限公司)，YPD－300C型智能片劑硬度測定儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)，TU－1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。二氫楊梅素對照品(上海源葉生物科技有限公司，含量≥98%)，藤茶二氫楊梅素提取物(中國玉緣生物制品有限公司，經(jīng)HPLC測定含量為70.36%)，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(PVPP，上海金穗生物科技有限公司)，微晶纖維素(MCC，湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司)，羧甲基淀粉納(CMC－Na，湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司)，低取代羥丙基纖維素(L－HPC，湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司)，預(yù)膠化淀粉(PS，湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司)，其它試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為重蒸水。

1.2 制備工藝

將原、輔料充分干燥，采用粉碎機(jī)打碎，分別過100目篩，按處方比例混勻后加50%乙醇制軟材，24目篩制粒，置于40℃干燥，整粒后加入潤滑劑及外加崩解劑壓片。片重約為230 mg(每片約含二氫楊梅素50 mg)。硬度平均為5.82 kgf。

2 結(jié)果與分析

2.1 處方優(yōu)化

2.1.1 填充劑的選擇 按處方量加入10%崩解劑(其中PVPP 2.5%，CMS－Na 5%，L－HPC 2.5%)，25%主藥，2%硬脂酸鎂和60%填充劑，按1.2方法制備分散片，選用微晶纖維素、硫酸鈣、糊精和預(yù)膠化淀粉三種組合作為填充劑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 填充劑的選擇Tab.1 Choice of filler

由表1可知，選用MCC和預(yù)膠化淀粉作為崩解劑崩解時(shí)間最短，為最優(yōu)組合。

2.1.2 崩解劑的選擇 按1.2方法制備分散片，以MCC和預(yù)膠化淀粉為填充劑，分別選用PVPP、CMS－Na和L－HPC 3種崩解劑作為考察因素，采用正交表L9(34)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，以崩解時(shí)間作為考察指標(biāo)，確定最佳崩解劑用量和配比。其因素水平安排見表2。實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表2 正交試驗(yàn)因素水平表Tab.2 Factors and levels of orthogonal experiment

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析Tab.3 Results of the orthogonal experiment

根據(jù)上述正交實(shí)驗(yàn)，采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行方差綜合分析，結(jié)果見表4。結(jié)果分析:由直觀分析可知，對崩解度的影響因素主次為A＞C＞B，但是各因素對崩解度沒有顯著影響(P＞0.05)，處方比例下沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。由于B因素對崩解度的影響較小，根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)情況及正交實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，確定最優(yōu)處方為A3C2，即加入5%PVPP和2.5%L－HPC的崩解劑組合。

表4 方差分析表Tab.4 Analysis of variance

2.1.3 崩解劑加入方法的選擇 按1.2方法制備分散片，采用崩解劑內(nèi)加、外加和內(nèi)外加相結(jié)合的方法，操作方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。

由表5可知，組合6崩解時(shí)間最短，為最優(yōu)的崩解劑內(nèi)外加方法，即采用內(nèi)加1%PVPP、2%L－HPC和外加4%PVPP、0.5%L－HPC的方法加入崩解劑。

表5 崩解劑內(nèi)外加方法的選擇Tab.5 Selection of adding methods of disintegrators

2.1.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 采用最佳處方和工藝制備三批二氫楊梅素分散片(批號分別為:201211121，201211122，201211123)，對其外觀，硬度，片重差異，崩解時(shí)間進(jìn)行考察。結(jié)果表明，片劑外觀光潔，無缺損，硬度平均為5.82 kgf，片劑平均重量為0.25 g，片重差異＜±5%符合規(guī)定，三批分散片崩解時(shí)間平均為 69 s、70 s、65 s，符合規(guī)定。

2.2 二氫楊梅素分散片質(zhì)量控制

2.2.1 薄層鑒別 精密稱取二氫楊梅素對照品10.50 mg，置10 mL容量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻得濃度為1.05 mg/mL的對照品溶液。取分散片20片，研細(xì)，稱取0.25 g溶于50 mL容量瓶，加甲醇定容。取1 mL該溶液定容于10 mL容量瓶，即得樣品溶液。將樣品溶液稀釋10倍得樣品稀釋溶液。按中國藥典2010版二部附錄ⅤB薄層色譜法，分別吸取上述對照品溶液、樣品溶液和樣品稀釋溶液10μL，點(diǎn)于硅膠G板上(以0.5%羧甲基纖維素鈉做粘合劑)，以氯仿－乙酸乙酯－甲酸(5∶5∶0.5)為展開劑，5%FeCl3乙醇溶液為顯色劑，得到圖譜如圖1所示，得到比移值Rf分別為0.37、0.38和0.37。圖1中2號斑點(diǎn)比1號斑點(diǎn)顏色更深，3號斑點(diǎn)與1號斑點(diǎn)顏色相當(dāng)可能是由于點(diǎn)樣量不準(zhǔn)確所致。

2.2.2 含量測定

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取二氫楊梅素對照品10.50 mg，置10 mL容量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻得濃度為1.05 mg/mL的對照品溶液。分別吸取上述對照品溶液 0.00 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.15 mL、0.20 mL分別置10mL容量瓶，加入3 mL 5%AlCl3，用甲醇定容。于314 nm波長處分別測定吸光度值。以二氫楊梅素濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)得標(biāo)準(zhǔn)曲線為:A=0.104 9C+0.0234，R2=0.999 2。結(jié)果表明，二氫楊梅素在5.25～21μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

圖1 二氫楊梅素分散片與對照品薄層色譜圖Fig.1 TLC chromatogram of dihydromyricetin dispersible tablets and their control

(2)檢測波長的選擇和輔料干擾實(shí)驗(yàn)

取分散片粉末和輔料粉末適量，溶于甲醇和AlCl3溶液中并定容。于200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，以甲醇和AlCl3溶液為空白溶液，結(jié)果測得分散片溶液在314 nm處有最大吸收，而輔料溶液在314 nm處沒有吸收峰，見圖2。確定以314 nm為檢測波長。

圖2 紫外光譜圖Fig.2 UV spectrum

(3)精密度試驗(yàn)

取上述對照品溶液1 mL置于50 mL容量瓶中，加5%AlCl3、甲醇溶液定容。于314 nm波長處連續(xù)測定吸光度6次，RSD為0.32%。表明本方法精密度良好。

(4)重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批次二氫楊梅素分散片樣品5份，分別溶于50 mL甲醇，再分別取1 mL樣品溶液定容至100 mL容量瓶，按3.2.3方法測定吸光度值，RSD為0.79%。表明方法重現(xiàn)性良好。

(5)穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取對照品溶液1 mL置于50 mL容量瓶中，加 5%AlCl3、甲醇溶液定容。分別在 0、30、60、90、120、180 min測定吸光度。RSD為0.62%。表明樣品在3h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

(6)加樣回收率試驗(yàn)

取同一批次分散片樣品9份，每份約0.25 g，精密稱定，分別加甲醇定容于100 mL容量瓶，再分別取100μL該溶液，定容于50 mL容量瓶中，分別加入1 μg/mL 對照品溶液 5 mL、10 mL、15 mL，按3.2.3方法測定吸光度。計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為96.35%，RSD為1.84%。表明本方法的加樣回收率實(shí)驗(yàn)符合要求，說明該方法作為含量測定方法可行。

(7)樣品含量測定

分別取三批樣品 20片，研細(xì)。精密稱取0.25 g，定容于50 mL容量瓶，取1 mL該溶液，定容于100 mL容量瓶，按上述方法測定吸光度，計(jì)算的二氫楊梅素分散片平均含量為46.25 mg/片。

2.2.3 分散均勻性考察 取二氫楊梅素分散片6片，置于(20±1)℃的100 mL水中，振搖3 min，分散片完全崩解并通過2號篩。

2.2.4 崩解時(shí)限測定 取二氫楊梅素分散片6片，按《中國藥典》2010年版二部附錄ⅹA崩解時(shí)限檢查法，置于(37±1)℃水中測定崩解時(shí)限，結(jié)果片劑在60 s內(nèi)完全崩解。

2.2.5 溶出度測定 取二氫楊梅素分散片6片，按《中國藥典》2010年版二部附錄ⅹC溶出度測定第二法，以900 mL蒸餾水，在(37±1)℃，轉(zhuǎn)速75 rpm 條件下，分別于 1、5、10、15、30、60 min 取樣 5 mL，樣品液過0.45μm微孔濾膜，同時(shí)補(bǔ)加同溫等體積溶出介質(zhì)。取濾液2 mL置于10 mL容量瓶中，加AlCl3、甲醇溶液定容，測定紫外吸光度，計(jì)算各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的累積溶出度，如圖3所示。

結(jié)果表明，二氫楊梅素分散片在15 min時(shí)溶出度已超過85%，能達(dá)到速釋的要求。

圖3 二氫楊梅素分散片的溶出曲線Fig.3 Dissolution curve of dihydromyricetin dispersible tablets

3 討論

藤茶中的主要成分是二氫楊梅素，文獻(xiàn)報(bào)道其具有抗炎、解酒、抗癌、降血糖等多種作用;我國的二氫楊梅素資源豐富，來源廣泛，具有很好的應(yīng)用前景。本文對二氫楊梅素分散片進(jìn)行了制備。分散片的特征是遇水可迅速崩解形成均勻的混懸液，綜合了片劑和液體制劑的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)中采用了微晶纖維素、預(yù)交化淀粉等優(yōu)良輔料作為填充劑，不僅具有良好的可壓性，使片劑具有光潔表面;還具有一定的崩解作用。另外，為提高分散片溶出度，在壓片前，分別對主藥和輔料粉末進(jìn)行微粉化處理，從而增加分散片溶出度，提高其生物利用度。

實(shí)驗(yàn)中曾用滑石粉代替硬脂酸鎂作為潤滑劑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，分散片的崩解度、溶出度等指標(biāo)并無明顯提高;而從片劑的外觀來看，采用硬脂酸鎂作為潤滑劑制備的分散片表面更加光滑，平整。綜合考慮，采用硬脂酸鎂作為潤滑劑。

在溶出度測定中，還分別考察了以pH 1.2鹽酸溶液、pH 4乙酸緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液和0.3%SDS溶液為溶出介質(zhì)的溶出度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，分散片在pH 1.2鹽酸溶液、pH 4乙酸緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液這三種溶出介質(zhì)中的溶出度較以蒸餾水為溶出介質(zhì)的溶出度更低，而以SDS溶液為溶出介質(zhì)的溶出度只是略有提高。

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