表達(dá)EGF乳酸菌對(duì)斷奶仔豬回腸中大腸桿菌的影響

摘要：以21日齡DLY斷奶仔豬為對(duì)象，分別用生理鹽水、無菌培養(yǎng)基、普通乳酸菌、表達(dá)EGF乳酸菌對(duì)其進(jìn)行連續(xù)14 d灌喂后，觀察其對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響，并研究表達(dá)EGF對(duì)斷奶仔豬回腸中大腸桿菌影響。結(jié)果表明，表達(dá)EGF乳酸菌對(duì)斷奶仔豬有促生長(zhǎng)作用，且表達(dá)EGF乳酸菌能很好地抑制大腸桿菌生長(zhǎng)，可有效減少由大腸桿菌引起的斷奶仔豬腹瀉。

關(guān)鍵詞：斷奶仔豬；表達(dá)EGF乳酸菌；大腸桿菌；回腸

中圖分類號(hào)： S858.28文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）01-0158-02

收稿日期：2012-12-19

基金項(xiàng)目：四川省教育廳自然科學(xué)重點(diǎn)項(xiàng)目（編號(hào)：2006A009）；四川省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（編號(hào)：2008JY0098）；“長(zhǎng)江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃”創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（編號(hào)：IRT0848）。

作者簡(jiǎn)介：楊慶穩(wěn)（1987—），男，重慶永川人，主要從事動(dòng)物繁殖障礙研究。E-mail：yangqingwen023@126.com。 表皮生長(zhǎng)因子（EGF）是一種活性物質(zhì)，是由53個(gè)氨基酸組成的活細(xì)胞，能修補(bǔ)增生肌膚的表層細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖有明顯的調(diào)節(jié)作用[1]。EGF通過與細(xì)胞膜上的EGF受體（EGFR）結(jié)合對(duì)多種細(xì)胞有強(qiáng)烈促進(jìn)有絲分裂的作用，并可促進(jìn)細(xì)胞角質(zhì)化和抑制胃酸分泌，可參與潰瘍愈合的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)EGF參與維持胃腸道黏膜的完整性，可保護(hù)胃腸道黏膜免受多種損傷因子損害，且EGF在胃腸道中比較穩(wěn)定而不易被消化，甚至可以部分被吸收進(jìn)入血液循環(huán)而作用于外周器官，這種有限吸收的特點(diǎn)，利于其在胃腸道局部范圍發(fā)揮作用[2]。乳酸菌是發(fā)酵糖類的主要產(chǎn)物，為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽(yáng)性菌，能促進(jìn)蛋白質(zhì)、單糖及鈣、鎂等物質(zhì)的吸收，產(chǎn)生維生素B族等有益物質(zhì)，也能使腸道菌群的構(gòu)造發(fā)生有益變化，改善胃腸道功能，抑制腐敗菌的繁殖，恢復(fù)腸道內(nèi)菌群平衡，形成抗菌生物屏障，增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力和抵抗力，促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育[3]。在初生哺乳動(dòng)物胃腸道發(fā)育過程中，通過外源途徑供給EGF激活損傷腸黏膜細(xì)胞中膜刷狀緣水解酶活性DNA的合成，可有效促進(jìn)胃腸道的發(fā)育，包括促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)腸細(xì)胞分化，提高小腸黏度，增強(qiáng)養(yǎng)分消化利用能力，減少細(xì)菌移位，維持黏膜屏障，降低細(xì)菌引發(fā)的感染，從而明顯加快初生動(dòng)物腸道的成熟[4]。

大腸桿菌是導(dǎo)致1～3月齡仔豬腹瀉的一種主要病原微生物。因飼養(yǎng)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等條件改變，血液抗體水平降低，使仔豬抗病力減弱，導(dǎo)致大腸桿菌大量增殖，破壞腸道內(nèi)微生物生態(tài)平衡，引起斷奶后腹瀉綜合征、水腫等應(yīng)激性疾病的發(fā)生。仔豬斷奶后，一方面由于母乳保護(hù)因子喪失，飼料消化負(fù)擔(dān)增加和環(huán)境的影響，使仔豬抗病力減弱而易感染病原微生物；另一方面由于斷奶后消化酶活力下降，胃酸分泌不足及胃腸道上皮組織萎縮，導(dǎo)致仔豬消化道微生物區(qū)系發(fā)生紊亂，極易發(fā)生腹瀉等疾病[5]。Mathew等對(duì)28日齡斷奶仔豬消化道微生物進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)斷奶仔豬消化道內(nèi)容物中乳酸桿菌和發(fā)揮脂肪酸濃度下降（P<0.05），說明仔豬消化道固有微生物區(qū)系已經(jīng)發(fā)生衰退[6]。

本研究探討了表達(dá)EGF乳酸菌對(duì)斷奶仔豬腸道中菌群的影響，旨在為進(jìn)一步研究EGF在腸道中促進(jìn)細(xì)胞增殖分化，加速皮膚和黏膜創(chuàng)傷愈合，消炎鎮(zhèn)痛，防止?jié)兊茸饔肹7]提供參考。

1材料與方法

1.1材料

表達(dá)EGF乳酸菌由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)所制備；21日齡斷奶的健康“杜洛克×長(zhǎng)白×約克夏”三元雜交仔豬45頭，平均體重6～7 kg，其中公豬23頭，母豬22頭。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)分組在同棟單列封閉式豬舍（舍溫18～23 ℃）內(nèi)預(yù)飼2 d后，選擇40頭體況和體重相近的仔豬，公母各半，隨機(jī)分為4組，每組10頭；對(duì)照組，灌喂等量生理鹽水；無菌組，只灌喂培養(yǎng)基；LL-EV組，灌喂培養(yǎng)基和普通乳酸菌；LL-pEGF組，灌喂表達(dá)EFG乳酸菌。飼喂5次/d（08：30、11：30、15：30、18：30、21：30），每次飼喂量以槽內(nèi)有少量余料為止，自由飲水。仔豬基礎(chǔ)日糧[8]見表1。

表1仔豬基礎(chǔ)日糧組成

種類1含量

（g/kg）1種類1含量

（g/kg）玉米1220.01CaCO319.2膨化玉米1264.51CaHPO3·2H2O16.1去皮豆粕185.0198.5%L-賴氨酸13.2全脂膨化大豆180.0199%DL-蛋氨酸12.0大豆?jié)饪s蛋白180.0198%L-蘇氨酸11.5魚粉140.0198%L-色氨酸10.5乳清粉1150.01氯化膽堿10.1蔗糖120.01NaCl13.0葡萄糖130.01礦物元素+維生素14.0

1.2.2生產(chǎn)性能以圈為單位，每周記錄飼喂量，計(jì)算各階段平均日采食量（ADFI）。在試驗(yàn)第1、第15天 06：00—07：00稱量仔豬空腹體重，并計(jì)算各階段平均日增重（ADG）。料肉比（F/G）=平均日采食量/平均日增重。

1.2.3試驗(yàn)階段每天在仔豬自由采食和飲水后，08：00、15：00 對(duì)每組仔豬灌喂50 mL相應(yīng)物質(zhì)（對(duì)照組灌喂50 mL生理鹽水，無菌組灌喂50 mL培養(yǎng)基，LL-EV組灌喂50 mL含有普通乳酸菌的培養(yǎng)基，LL-pEGF組灌喂50 mL含表達(dá)EGF乳酸菌的培養(yǎng)基），持續(xù)2周。

1.2.4對(duì)回腸中內(nèi)容物及腸內(nèi)容物中大腸桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)在最后1次試驗(yàn)稱重后從每組中選出4頭長(zhǎng)勢(shì)相對(duì)較好的仔豬進(jìn)行屠宰，無菌取回腸內(nèi)容物1 g，放入含有99 mL無菌水的滅菌三角瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)先加有適量玻璃珠），充分振蕩 30 min 后，按10倍稀釋法分別稀釋至10-4、10-5、10-6（稀釋梯度參照參考文獻(xiàn)[9]）；分別取10-4、10-5、10-6的稀釋液 20 μL 滴種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）上，每個(gè)平皿滴3個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度3次重復(fù)，待液體侵入以后，置于培養(yǎng)箱 37 ℃ 培養(yǎng)24 h，記錄大腸桿菌菌落數(shù)。腸內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)=大腸桿菌菌落數(shù)/（稀釋度×0.02）。

1.3數(shù)據(jù)處理

用Excel和SPSS 11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2結(jié)果與分析

從表2可見，在試驗(yàn)1～7 d，無菌組、LL-pEGF組、LL-EV 組的仔豬日采食量、日增重都顯著高于對(duì)照組，各組料肉比均無顯著差異。試驗(yàn)8～14 d，LL-EV組、LL-pEGF組、無菌組的日采食量、日增重均顯著高于對(duì)照組，而各組料肉比也無顯著差異。在整個(gè)試驗(yàn)中，無菌組、LL-EV組、LL-pEGF 組的日采食量、日增重均顯著高于對(duì)照組，各組料肉比均無顯著差異。試驗(yàn)?zāi)?，無菌組、LL-EV組、LL-pEGF組的總增重顯著高于對(duì)照組。表2不同處理對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

3結(jié)論與討論

本研究表明，添加表達(dá)EGF乳酸菌能抑制斷奶仔豬腸道中大腸桿菌的生長(zhǎng)，具有促增長(zhǎng)和提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的作用，從而抑制腸道中大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖，有效減少由大腸桿菌引起的斷奶仔豬黃痢、白痢、水腫病，改善腸道功能，增加消化吸收面積，從而提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能，在生產(chǎn)上提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低生產(chǎn)成本，增加經(jīng)濟(jì)效益。

有研究表明，EGF對(duì)胃腸道有修復(fù)作用，在損傷面周圍有活力的上皮細(xì)胞上沿基底膜移行，迅速覆蓋損傷上皮，使消化道黏膜上層在短時(shí)間內(nèi)迅速重建[10]。在應(yīng)激或其他傷害因素的作用下，黏膜深度損傷達(dá)到基底膜，導(dǎo)致基底膜的完整受到破壞時(shí)的修復(fù)則是通過伴有炎癥產(chǎn)生的緩慢細(xì)胞增殖過程，使損傷黏膜重新愈合完成，如斷奶仔豬因應(yīng)激導(dǎo)致腸道黏膜上皮損傷而發(fā)生的修復(fù)。在正常生理狀態(tài)或黏膜受到損傷的情況下，胃腸道黏膜組織在不斷合成和釋放一些包括EGF在內(nèi)的生長(zhǎng)因子，以旁分泌或內(nèi)分泌的形式維持黏膜屏障、調(diào)節(jié)黏液分泌以及參與修復(fù)過程[11]。表達(dá)EGF乳酸菌具有提高小腸黏度，增強(qiáng)養(yǎng)分消化利用能力，減少細(xì)菌移位，維持黏膜屏障[12]，降低細(xì)菌引發(fā)的感染，從而明顯加快初生動(dòng)物腸道成熟，改善消化道功能，提高抗病力。本研究表明，LL-pEGF組的仔豬日采食量、日增重都在增加，而料肉比下降不明顯。因此，表達(dá)EGF乳酸菌可以改善仔豬腸道形態(tài)，增加消化吸收面積，在14 d內(nèi)使21日齡斷奶仔豬體重提高2936%，從而提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能。

仔豬腸道的微生物區(qū)系隨宿主日齡增加逐漸變得復(fù)雜多樣，并形成一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的微生態(tài)系統(tǒng)，對(duì)豬的生長(zhǎng)起重要作用。斷奶引起的仔豬消化道環(huán)境改變主要表現(xiàn)為消化道菌群的變化。研究表明，斷奶后仔豬消化道乳酸桿菌數(shù)量下降，總細(xì)菌數(shù)量及腸桿菌（特別是大腸桿菌）比例上升，一旦腸道中優(yōu)勢(shì)菌屬于致病性的Escherichia和Streptococcus，就會(huì)引起仔豬腹瀉甚至死亡[13]。本研究中灌喂表達(dá)EGF乳酸桿菌能顯著降低斷奶仔豬回腸中的大腸桿菌數(shù)量，說明表達(dá)EGF乳酸（下轉(zhuǎn)第215頁(yè)）田福平，路遠(yuǎn)，張小甫，等. 苜蓿新品種（系）的抗旱性綜合評(píng)價(jià)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（1）：160-163，217.

1.3數(shù)據(jù)處理

用Excel和SPSS 11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2結(jié)果與分析

從表2可見，在試驗(yàn)1～7 d，無菌組、LL-pEGF組、LL-EV 組的仔豬日采食量、日增重都顯著高于對(duì)照組，各組料肉比均無顯著差異。試驗(yàn)8～14 d，LL-EV組、LL-pEGF組、無菌組的日采食量、日增重均顯著高于對(duì)照組，而各組料肉比也無顯著差異。在整個(gè)試驗(yàn)中，無菌組、LL-EV組、LL-pEGF 組的日采食量、日增重均顯著高于對(duì)照組，各組料肉比均無顯著差異。試驗(yàn)?zāi)?，無菌組、LL-EV組、LL-pEGF組的總增重顯著高于對(duì)照組。表2不同處理對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

3結(jié)論與討論

本研究表明，添加表達(dá)EGF乳酸菌能抑制斷奶仔豬腸道中大腸桿菌的生長(zhǎng)，具有促增長(zhǎng)和提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的作用，從而抑制腸道中大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖，有效減少由大腸桿菌引起的斷奶仔豬黃痢、白痢、水腫病，改善腸道功能，增加消化吸收面積，從而提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能，在生產(chǎn)上提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低生產(chǎn)成本，增加經(jīng)濟(jì)效益。

有研究表明，EGF對(duì)胃腸道有修復(fù)作用，在損傷面周圍有活力的上皮細(xì)胞上沿基底膜移行，迅速覆蓋損傷上皮，使消化道黏膜上層在短時(shí)間內(nèi)迅速重建[10]。在應(yīng)激或其他傷害因素的作用下，黏膜深度損傷達(dá)到基底膜，導(dǎo)致基底膜的完整受到破壞時(shí)的修復(fù)則是通過伴有炎癥產(chǎn)生的緩慢細(xì)胞增殖過程，使損傷黏膜重新愈合完成，如斷奶仔豬因應(yīng)激導(dǎo)致腸道黏膜上皮損傷而發(fā)生的修復(fù)。在正常生理狀態(tài)或黏膜受到損傷的情況下，胃腸道黏膜組織在不斷合成和釋放一些包括EGF在內(nèi)的生長(zhǎng)因子，以旁分泌或內(nèi)分泌的形式維持黏膜屏障、調(diào)節(jié)黏液分泌以及參與修復(fù)過程[11]。表達(dá)EGF乳酸菌具有提高小腸黏度，增強(qiáng)養(yǎng)分消化利用能力，減少細(xì)菌移位，維持黏膜屏障[12]，降低細(xì)菌引發(fā)的感染，從而明顯加快初生動(dòng)物腸道成熟，改善消化道功能，提高抗病力。本研究表明，LL-pEGF組的仔豬日采食量、日增重都在增加，而料肉比下降不明顯。因此，表達(dá)EGF乳酸菌可以改善仔豬腸道形態(tài)，增加消化吸收面積，在14 d內(nèi)使21日齡斷奶仔豬體重提高2936%，從而提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能。

仔豬腸道的微生物區(qū)系隨宿主日齡增加逐漸變得復(fù)雜多樣，并形成一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的微生態(tài)系統(tǒng)，對(duì)豬的生長(zhǎng)起重要作用。斷奶引起的仔豬消化道環(huán)境改變主要表現(xiàn)為消化道菌群的變化。研究表明，斷奶后仔豬消化道乳酸桿菌數(shù)量下降，總細(xì)菌數(shù)量及腸桿菌（特別是大腸桿菌）比例上升，一旦腸道中優(yōu)勢(shì)菌屬于致病性的Escherichia和Streptococcus，就會(huì)引起仔豬腹瀉甚至死亡[13]。本研究中灌喂表達(dá)EGF乳酸桿菌能顯著降低斷奶仔豬回腸中的大腸桿菌數(shù)量，說明表達(dá)EGF乳酸（下轉(zhuǎn)第215頁(yè)）田福平，路遠(yuǎn)，張小甫，等. 苜蓿新品種（系）的抗旱性綜合評(píng)價(jià)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（1）：160-163，217.

1.3數(shù)據(jù)處理

用Excel和SPSS 11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2結(jié)果與分析

從表2可見，在試驗(yàn)1～7 d，無菌組、LL-pEGF組、LL-EV 組的仔豬日采食量、日增重都顯著高于對(duì)照組，各組料肉比均無顯著差異。試驗(yàn)8～14 d，LL-EV組、LL-pEGF組、無菌組的日采食量、日增重均顯著高于對(duì)照組，而各組料肉比也無顯著差異。在整個(gè)試驗(yàn)中，無菌組、LL-EV組、LL-pEGF 組的日采食量、日增重均顯著高于對(duì)照組，各組料肉比均無顯著差異。試驗(yàn)?zāi)?，無菌組、LL-EV組、LL-pEGF組的總增重顯著高于對(duì)照組。表2不同處理對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

3結(jié)論與討論

本研究表明，添加表達(dá)EGF乳酸菌能抑制斷奶仔豬腸道中大腸桿菌的生長(zhǎng)，具有促增長(zhǎng)和提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的作用，從而抑制腸道中大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖，有效減少由大腸桿菌引起的斷奶仔豬黃痢、白痢、水腫病，改善腸道功能，增加消化吸收面積，從而提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能，在生產(chǎn)上提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低生產(chǎn)成本，增加經(jīng)濟(jì)效益。

有研究表明，EGF對(duì)胃腸道有修復(fù)作用，在損傷面周圍有活力的上皮細(xì)胞上沿基底膜移行，迅速覆蓋損傷上皮，使消化道黏膜上層在短時(shí)間內(nèi)迅速重建[10]。在應(yīng)激或其他傷害因素的作用下，黏膜深度損傷達(dá)到基底膜，導(dǎo)致基底膜的完整受到破壞時(shí)的修復(fù)則是通過伴有炎癥產(chǎn)生的緩慢細(xì)胞增殖過程，使損傷黏膜重新愈合完成，如斷奶仔豬因應(yīng)激導(dǎo)致腸道黏膜上皮損傷而發(fā)生的修復(fù)。在正常生理狀態(tài)或黏膜受到損傷的情況下，胃腸道黏膜組織在不斷合成和釋放一些包括EGF在內(nèi)的生長(zhǎng)因子，以旁分泌或內(nèi)分泌的形式維持黏膜屏障、調(diào)節(jié)黏液分泌以及參與修復(fù)過程[11]。表達(dá)EGF乳酸菌具有提高小腸黏度，增強(qiáng)養(yǎng)分消化利用能力，減少細(xì)菌移位，維持黏膜屏障[12]，降低細(xì)菌引發(fā)的感染，從而明顯加快初生動(dòng)物腸道成熟，改善消化道功能，提高抗病力。本研究表明，LL-pEGF組的仔豬日采食量、日增重都在增加，而料肉比下降不明顯。因此，表達(dá)EGF乳酸菌可以改善仔豬腸道形態(tài)，增加消化吸收面積，在14 d內(nèi)使21日齡斷奶仔豬體重提高2936%，從而提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能。

仔豬腸道的微生物區(qū)系隨宿主日齡增加逐漸變得復(fù)雜多樣，并形成一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的微生態(tài)系統(tǒng)，對(duì)豬的生長(zhǎng)起重要作用。斷奶引起的仔豬消化道環(huán)境改變主要表現(xiàn)為消化道菌群的變化。研究表明，斷奶后仔豬消化道乳酸桿菌數(shù)量下降，總細(xì)菌數(shù)量及腸桿菌（特別是大腸桿菌）比例上升，一旦腸道中優(yōu)勢(shì)菌屬于致病性的Escherichia和Streptococcus，就會(huì)引起仔豬腹瀉甚至死亡[13]。本研究中灌喂表達(dá)EGF乳酸桿菌能顯著降低斷奶仔豬回腸中的大腸桿菌數(shù)量，說明表達(dá)EGF乳酸（下轉(zhuǎn)第215頁(yè)）田福平，路遠(yuǎn)，張小甫，等. 苜蓿新品種（系）的抗旱性綜合評(píng)價(jià)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（1）：160-163，217.