維、漢兩民族非小細(xì)胞肺癌患者血清中p53抗體的表達(dá)及其臨床意義

張騰宙， 雷法特·別克強(qiáng)塔伊夫， 瑪依努爾·艾力， 李秀娟, 唐鈺姣， 克拉拉·阿巴斯

(新疆醫(yī)科大學(xué)1基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室， 烏魯木齊 830011; 2第二附屬醫(yī)院胸外科， 烏魯木齊 830000;3第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科， 烏魯木齊 830054)

肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，是起始于肺支氣管和肺泡上皮細(xì)胞的一種疾病[1]。肺癌目前居全世界癌癥死因的首位[2]，每年癌癥死亡人數(shù)的1/3為肺癌患者。在中國,肺癌的發(fā)病率和死亡率也均居首位[3]。肺癌中85%的患者為非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC)[4]。非小細(xì)胞肺癌又包括鱗癌(squamous carcinoma,SC)和非鱗癌(non-squamous carcinoma,NSC)[5]。p53基因是一個(gè)重要的抗癌基因[6]，近年在肺癌分子生物學(xué)方面的研究表明，p53基因的點(diǎn)突變、缺失及滅活在肺癌的發(fā)生和進(jìn)展過程中起著關(guān)鍵性的作用，同時(shí)對(duì)肺癌的診斷、治療和預(yù)后也有一定的價(jià)值[7]。目前，已有維吾爾族(維族)與漢族非小細(xì)胞肺癌患者血清CEA差異性的報(bào)道[8]，但有關(guān)血清p53抗體差異性還未見報(bào)道。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)維族和漢族非小細(xì)胞肺癌患者血清p53抗體的含量，分析其表達(dá)在兩民族中是否有差異及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科2010年10月-2012年10月收治的非小細(xì)胞肺癌患者(病例組)50例，其中維吾爾族患者25例，男性15例，女性10例，年齡48～85歲，中位年齡67歲，≤60歲12例，>60歲13例；Ⅰ、Ⅱ期8例，Ⅲ期6例，Ⅳ期11例；鱗狀細(xì)胞癌13例，非鱗狀細(xì)胞癌12例；低分化程度14例，中、高分化程度11例。漢族患者25例，男性16例，女性9例，年齡35～78歲；中位年齡64歲，≤60歲10例，>60歲15例；Ⅰ、Ⅱ期8例，Ⅲ期7例，Ⅳ期10例；鱗狀細(xì)胞癌14例，非鱗狀細(xì)胞癌11例；低分化程度13例，中、高分化程度12例。所有病例均經(jīng)過相應(yīng)的儀器檢查及病理學(xué)診斷，且患者尚未行手術(shù)、放療化療等抗腫瘤治療。另選取新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院體檢中心體檢合格的維族、漢族健康體檢者各25例作為對(duì)照，所有健康體檢者無心、肝、肺和腎等重要器官疾病，肝腎功能正常。

1.2 標(biāo)本的收集

抽取非小細(xì)胞肺癌患者清晨空腹血2 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清，每例樣本分裝2份，1份置于-80℃冰箱保存用于ELISA檢測(cè)，1份立即送至新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科經(jīng)全自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光儀器自動(dòng)檢測(cè)。

1.3 儀器、試劑及檢測(cè)方法

酶標(biāo)儀(上海閃譜生物科技有限公司)，全自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光儀[Abbott AXSYM(美國雅培公司)]，人 p53 ELISA Kit試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)。嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行ELISA檢測(cè)，將制備好的標(biāo)準(zhǔn)品及已稀釋樣品100 μL 加入酶標(biāo)板上蓋反應(yīng)90 min，洗板并加入生物素標(biāo)記抗人p53工作液反應(yīng)60 min，PBS洗板3次加入ABC工作液反應(yīng)30 min，PBS再次洗板5次加入TMB顯色液避光反應(yīng)25 min。最后加入TMB終止液，于酶標(biāo)儀450 nm測(cè)定OD值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品及其OD值使用CurveExpert 1.4及ELISACalc軟件計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線公式，計(jì)算出各樣本含量；采用全自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)血清常用腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、前列腺特異性抗原(PSA)、癌抗原125(CA125)的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析比較，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或t′檢驗(yàn)和簡(jiǎn)單線性相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩民族對(duì)照組和病例組血清p53抗體含量的比較

漢族、維族病例組p53抗體含量均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；病例組及對(duì)照組p53抗體含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2 兩民族病例組不同臨床病理特征血清p53抗體含量的比較

兩民族病例組血清p53抗體含量在不同分化程度、TNM分期差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與性別、年齡之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在不同的病理分型下，維族病例組血清p53抗體含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，漢族病例組中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血清p53抗體含量在相同分化程度、TNM分期、年齡、性別和病理分型的維族與漢族病例組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表1 兩民族對(duì)照組、病例組p53抗體含量的比較

表2 兩民族病例組不同臨床病理特征血清p53抗體含量的比較

2.3 兩民族病例組血清p53含量與其各自常用腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性分析

維族及漢族非小細(xì)胞肺癌患者血清p53含量與其血清中的CEA、 AFP、 NSE、 PSA、 CA125均無相關(guān)性，見表3。

表3 兩民族病例組血清p53含量與其常用瘤標(biāo)志物相關(guān)性分析

3 討論

隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和醫(yī)療水平突飛猛進(jìn)的發(fā)展，對(duì)于肺癌的認(rèn)識(shí)和治療水平也有了相當(dāng)大的提高[9]。但是肺癌的治療效果仍然不容樂觀，患者的5年生存率只達(dá)到近15%[10]。p53基因是一種腫瘤抑制基因，對(duì)DNA監(jiān)視和修復(fù)起著重要的作用。人類p53基因位于17p13.1，全長約20 kb，包括11個(gè)內(nèi)含子，編碼一種分子量為53 ku的核磷酸蛋白，故稱p53。在所有惡性腫瘤中，50%以上會(huì)出現(xiàn)p53基因的突變[11]，其突變后從抑癌基因變?yōu)橹掳┗颉53蛋白過度表達(dá)是p53基因突變的表現(xiàn)形式，其積聚后，作為靶抗原引發(fā)自身的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生血清p53抗體[12-13]。已有研究結(jié)果顯示肺癌患者術(shù)前血清p53抗體指數(shù)和吸收率均明顯高于肺部良性疾病患者和正常人，而正常人與肺部良性疾病患者間無明顯差異，表明檢測(cè)肺癌患者血清p53抗體，用于肺部良惡性疾病的診斷和鑒別診斷，具有較好的特異性[14-15]。這一點(diǎn)在其他惡性腫瘤也得到了證實(shí)[16]。

本研究結(jié)果顯示維族、漢族非小細(xì)胞肺癌患者血清中p53抗體水平明顯高于本民族健康者,其兩兩比較差異明顯，提示p53抗體與維、漢兩民族的非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病關(guān)系密切。維族患者與漢族患者血清中p53抗體含量在同一水平，提示血清p53抗體含量在漢族和維吾爾族非小細(xì)胞肺癌患者之間沒有明顯差異。

本研究分別對(duì)維族、漢族非小細(xì)胞肺癌患者p53抗體在不同年齡、性別、病理分型、分化程度和TNM分期的表達(dá)情況進(jìn)行分析，結(jié)果表明兩民族非小細(xì)胞肺癌患者的p53抗體表達(dá)情況與年齡、性別無明顯相關(guān)關(guān)系，但是與分化程度和不同TNM分期有顯著的相關(guān)關(guān)系。說明兩民族非小細(xì)胞肺癌患者在不同的分化程度和TNM分期，p53抗體含量也不相同。而且由數(shù)據(jù)顯示：低分化的非小細(xì)胞肺癌患者p53抗體含量明顯高于高、中分化的患者；晚期非小細(xì)胞肺癌患者p53抗體含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于早、中期的非小細(xì)胞肺癌患者。所以，通過對(duì)p53的檢測(cè)，可以判斷兩民族非小細(xì)胞肺癌患者的腫瘤分化情況和病情進(jìn)展程度。在與病理分型相互關(guān)系的分析結(jié)果顯示，漢族非小細(xì)胞肺癌組中的鱗癌患者與非鱗癌患者p53抗體含量無明顯差異，與張向群等[17]研究結(jié)果相同。但維吾爾族非小細(xì)胞肺癌組中兩者p53抗體含量差異明顯，因無對(duì)維吾爾族非小細(xì)胞肺癌血清p53抗體研究的相關(guān)文獻(xiàn)，此差異性有待進(jìn)一步的分析研究。

本研究從年齡、性別、病理分型、分化程度和TNM分期對(duì)維吾爾族非小細(xì)胞肺癌組和漢族非小細(xì)胞肺癌組p53抗體含量進(jìn)行比較分析，說明在p53抗體表達(dá)上兩民族非小細(xì)胞肺癌患者間無年齡、性別、病理分型、分化程度和TNM分期的差異。在維族、漢族非小細(xì)胞肺癌患者血清p53抗體與其相應(yīng)的常用腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性研究結(jié)果顯示兩民族非小細(xì)胞肺癌血清p53抗體與其各自相應(yīng)腫瘤標(biāo)志物并不相關(guān)，提示兩民族非小細(xì)胞肺癌患者血清p53抗體的表達(dá)具有一定的特異性。

綜上所述,p53抗體對(duì)于維族和漢族非小細(xì)胞肺癌患者都是一個(gè)重要的指標(biāo)，它參與非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)歸中的每一環(huán)節(jié)。因此，可以考慮臨床上對(duì)兩民族非小細(xì)胞肺癌患者采用相似或者相同的與p53相關(guān)的檢測(cè)方法和治療方案，也可以用相似或相同的p53指標(biāo)判斷兩民族非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后，若要真正運(yùn)用于臨床，還期待更深層次的研究。對(duì)于p53在維、漢兩民族非小細(xì)胞肺癌表達(dá)的相關(guān)研究，本試驗(yàn)國內(nèi)外尚屬首次。同時(shí)也為維、漢兩民族非小細(xì)胞肺癌患者的基因靶向治療提供了一定的理論和試驗(yàn)依據(jù)。

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