復(fù)方金錢草顆粒利膽及體外抗豚鼠膽囊平滑肌痙攣?zhàn)饔醚芯?/h1>
2014-07-16 05:50:02溫幼敏曾憲彪韋寶偉馬軍花韋桂寧
中國(guó)藥業(yè) 2014年7期
溫幼敏 ，何 飛 ，曾憲彪 ，蘇 華 ，韋寶偉 ，馬軍花 ，韋桂寧
（1．廣西萬(wàn)通制藥有限公司，廣西 南寧 530003； 2．廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022）
復(fù)方金錢草顆粒由廣金錢草、車前草、光石韋、玉米須等組 方，具有清熱祛濕、利尿排石、消炎止痛之功效，用于泌尿系結(jié)石、尿路感染屬濕熱下注證者[1]。長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，復(fù)方金錢草顆粒對(duì)膽結(jié)石患者具有良好的臨床效果，但尚無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究中利用膽管引流法測(cè)定給復(fù)方金錢草顆粒前后大鼠膽汁的流量及成分，觀察豚鼠膽囊肌條，探討復(fù)方金錢草顆粒拮抗乙酰膽堿所致的膽囊收縮運(yùn)動(dòng)，旨在觀察復(fù)方金錢草顆粒的利膽及抗膽囊痙攣的作用。
1 儀器、試藥與動(dòng)物
722型分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）；分析天平（上海第二分析儀器廠）；ZH-Z離體器官測(cè)量系統(tǒng)（淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司）；BL-420S型生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；JZ301型微張力換能器（北京新航興業(yè)科貿(mào)有限公司）。復(fù)方金錢草顆粒（廣西萬(wàn)通制藥有限公司，批號(hào)為101213）；腎石通顆粒（修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)為110126）；阿托品；總膽紅素測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)為2011029）。Wistar大鼠，豚鼠、清潔級(jí)，均由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK桂2009-0003。
2 方法與結(jié)果
2．1 對(duì)大鼠膽汁流量及膽汁中膽紅素水平的影響[2]
取 Wistar大鼠 40只，雄性，250～300 g，均分為 4組，各 10只。試驗(yàn)前12 h禁食不禁水，試驗(yàn)時(shí)給大鼠腹腔注射烏拉坦麻醉后，仰位固定于固定板上，沿腹正中線切開(kāi)約2 cm，打開(kāi)腹腔，在十二指腸降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，在其下穿2根絲線，結(jié)扎乳頭部，向肝臟方向作“V”形切口，插入直徑為0．6 mm的塑料細(xì)管，可見(jiàn)有淡黃綠色膽汁流出，結(jié)扎固定塑料管，用1．5 mL的離心管收集膽汁。手術(shù)后用止血鉗夾閉腹壁，以鹽水紗布覆蓋。待穩(wěn)定20 min后，先收集30 min膽汁，選膽汁量為0．3～0．5 mL者進(jìn)行利膽試驗(yàn)，各組分別由十二指腸給藥，模型組給予金錢草顆粒高劑量（7．4 g ／kg）、低劑量（1．8 g ／kg），陽(yáng)性對(duì)照組給予腎石通顆粒（3．3 g／kg），空白對(duì)照組給予等容量蒸餾水。給藥后 2 h收集膽汁，記錄膽汁流量，并測(cè)定膽汁總膽紅素。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 對(duì)大鼠膽汁流量及膽紅素水平的影響(±s，n＝10)
表1 對(duì)大鼠膽汁流量及膽紅素水平的影響(±s，n＝10)
注：與對(duì)照組比較，t檢驗(yàn)， P ＜0．05。
組別對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組高劑量模型組低劑量模型組給藥劑量（g／kg）-3．3 7．4 1．8膽汁流量（mL）0．95 ± 0．26 1．34 ± 0．36 1．32 ± 0．40 1．15 ± 0．32膽汁總膽紅素濃度（ mol／L）30．78 ± 7．82 38．69 ± 8．58 40．65 ± 9．11 34．82 ± 9．17
2．2 對(duì)豚鼠膽囊平滑肌痙攣的影響[2]477-478
取豚鼠，體重300～350 g，雌雄不限。禁食24 h后擊頭致斃。迅速取出膽囊，去除附著物。放在37℃充氧的Kerbs液中，洗凈其內(nèi)容物，制成2個(gè)平滑肌條，將肌條固定于ZH-Z離體器官測(cè)量系統(tǒng)裝置上，給予應(yīng)力1．0 g。待其穩(wěn)定20 min，穩(wěn)定后描記基線，加乙酰膽堿溶液（反應(yīng)體系質(zhì)量濃度為0．01 g／L），平滑肌收縮穩(wěn)定后，分別加入復(fù)方金錢草顆粒(模型組)及陽(yáng)性藥阿托品(陽(yáng)性對(duì)照組)。觀察各樣品對(duì)乙酰膽堿引起膽囊平滑肌收縮的影響，結(jié)果見(jiàn)表2。張力變化值＝給乙酰膽堿后張力-給藥后張力，基礎(chǔ)張力變化率＝給藥后張力變化值／給乙酰膽堿后張力變化值×100%。
表2 對(duì)由乙酰膽堿所致豚鼠膽囊痙攣的影響(±s，n＝10)
表2 對(duì)由乙酰膽堿所致豚鼠膽囊痙攣的影響(±s，n＝10)
注：與對(duì)照組比較，t檢驗(yàn)， P ＜0．05， P ＜0．01。
給藥后張力變化率（%）組別 劑量 給乙酰膽堿后張力變化值(g)對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組模型組-1mg 62 g／L 31 g／L 6．89 ± 2．96 8．56 ± 2．36 8．07 ± 2．52 7．81 ± 2．09 5 min 18．48 ± 10．18 31．50 ± 11．50 36．65 ± 12．00 28．72 ± 12．06 10 min 17．89 ±9．84 30．93 ±11．35 38．53 ±11．42 27．65 ±9．03
3 討論
膽囊結(jié)石是由在膽囊內(nèi)形成的結(jié)石所引起的疾病。按照結(jié)石的化學(xué)成分可分為膽固醇結(jié)石、膽色素結(jié)石和混合結(jié)石3類，大多數(shù)膽囊結(jié)石都是以膽固醇結(jié)石為主的混合型結(jié)石。膽囊結(jié)石的具體形成原因至今尚未完全清楚，目前考慮與脂類代謝、膽固醇過(guò)飽和、成核過(guò)程異常、膽囊功能異常、細(xì)菌和基因片段等多種因素密切相關(guān)[3-8]。在膽結(jié)石移動(dòng)過(guò)程中，引起膽囊、膽管或奧狄氏括約肌發(fā)生痙攣性收縮，或因膽結(jié)石突然阻塞了膽囊管或膽總管，造成膽囊或膽管的擴(kuò)張或腔內(nèi)壓力升高，引起膽絞痛[9]。
本研究結(jié)果表明，該復(fù)方金錢草顆粒具有利膽和緩解乙酰膽堿引起膽囊痙攣的作用，但其作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及分子機(jī)制，尚待進(jìn)一步研究。
[1]周 軍，韋桂寧，吳超偉，等．復(fù)方金錢草顆粒對(duì)腎結(jié)石的影響及其利尿、解痙、抗炎作用[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(18)：206-209．
[2]李儀奎．中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]．第2版．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：472-473．
[3]Han T，Zhang D，F(xiàn)u Z，et al．Retinol-binding protein 4 as a risk factor for cholesterol gallstone formation[J]．Mol Cell Biochem，2013，377(1-2)：219-227．
[4]Renner O，Lütjohann D，Richter D，et al．Role of the ABCG8 19H risk allele in cholesterol absorption and gallstone disease[J]．BMC Gastroenterol，2013，13（13）:30．
[5]Shih SC，Yang HW，Chang TY，et al．Gender-specific association of the interleukin 18 gene with symptomatic gallstone disease[J]．J Gastroenterol Hepatol，2013，28(4)：744-749．
[6]Fracanzani AL，Valenti L，Russello M．Gallstone disease is associated with more severe liver damage in patients with non-alcoholic fatty liver disease[J]．PLoS One，2012，7(7):e41 183．
[7]Chuang SC，Hsi E，Lee KT．Mucin genes in gallstone disease[J]．Clin Chim Acta，2012，413(19-20):1 466-1 471．
[8]Cui Y，Li Z，Zhao E，et al．Risk factors in patients with hereditary gallstones in Chinese pedigrees[J]．Med Princ Pract，2012，21(5):467-471．
[9]Lavoie B，Nausch B，Zane EA，et al．Disruption of gallbladder smooth muscle function is an early feature in the development of cholesterol gallstone disease[J] ．Neurogastroenterol Motil，2012，24(7):e313-e324．
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1 儀器、試藥與動(dòng)物
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表1 對(duì)大鼠膽汁流量及膽紅素水平的影響(±s，n＝10)
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注：與對(duì)照組比較，t檢驗(yàn)， P ＜0．05。
組別對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組高劑量模型組低劑量模型組給藥劑量（g／kg）-3．3 7．4 1．8膽汁流量（mL）0．95 ± 0．26 1．34 ± 0．36 1．32 ± 0．40 1．15 ± 0．32膽汁總膽紅素濃度（ mol／L）30．78 ± 7．82 38．69 ± 8．58 40．65 ± 9．11 34．82 ± 9．17
2．2 對(duì)豚鼠膽囊平滑肌痙攣的影響[2]477-478
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表2 對(duì)由乙酰膽堿所致豚鼠膽囊痙攣的影響(±s，n＝10)
表2 對(duì)由乙酰膽堿所致豚鼠膽囊痙攣的影響(±s，n＝10)
注：與對(duì)照組比較，t檢驗(yàn)， P ＜0．05， P ＜0．01。
給藥后張力變化率（%）組別 劑量 給乙酰膽堿后張力變化值(g)對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組模型組-1mg 62 g／L 31 g／L 6．89 ± 2．96 8．56 ± 2．36 8．07 ± 2．52 7．81 ± 2．09 5 min 18．48 ± 10．18 31．50 ± 11．50 36．65 ± 12．00 28．72 ± 12．06 10 min 17．89 ±9．84 30．93 ±11．35 38．53 ±11．42 27．65 ±9．03
3 討論
膽囊結(jié)石是由在膽囊內(nèi)形成的結(jié)石所引起的疾病。按照結(jié)石的化學(xué)成分可分為膽固醇結(jié)石、膽色素結(jié)石和混合結(jié)石3類，大多數(shù)膽囊結(jié)石都是以膽固醇結(jié)石為主的混合型結(jié)石。膽囊結(jié)石的具體形成原因至今尚未完全清楚，目前考慮與脂類代謝、膽固醇過(guò)飽和、成核過(guò)程異常、膽囊功能異常、細(xì)菌和基因片段等多種因素密切相關(guān)[3-8]。在膽結(jié)石移動(dòng)過(guò)程中，引起膽囊、膽管或奧狄氏括約肌發(fā)生痙攣性收縮，或因膽結(jié)石突然阻塞了膽囊管或膽總管，造成膽囊或膽管的擴(kuò)張或腔內(nèi)壓力升高，引起膽絞痛[9]。
本研究結(jié)果表明，該復(fù)方金錢草顆粒具有利膽和緩解乙酰膽堿引起膽囊痙攣的作用，但其作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及分子機(jī)制，尚待進(jìn)一步研究。
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