高效液相色譜法測(cè)定膚舒寧噴霧劑中大黃素和蘆薈苷含量*

宮 麗，袁 兵，卞 俊

（中國(guó)人民解放軍第411醫(yī)院藥學(xué)科，上海 200081）

膚舒寧噴霧劑為醫(yī)院制劑，主要成分為虎杖、蘆薈、冰片等藥物，用于治療輕中度燒燙傷。其研究目前還處于試驗(yàn)階段，動(dòng)物燙傷試驗(yàn)結(jié)果表明，可加速結(jié)痂，且有一定的抗炎、促進(jìn)組織生長(zhǎng)和抑制瘢痕產(chǎn)生的作用。本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法測(cè)定了膚舒寧噴霧劑中大黃素和蘆薈苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－10AT／LC－ATVP型高效液相色譜儀（日本島津公司）；AB104－N型電子分析天平（梅特勒－托利多上海儀器有限公司）；SK3300H型超聲波清洗儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；R206型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生科技有限公司）。大黃素對(duì)照品（批號(hào)為 110756－200110）、蘆薈苷對(duì)照品（批號(hào)為 110787－200504），均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；膚舒寧噴霧劑，由本實(shí)驗(yàn)室自制；甲醇（上?；瘜W(xué)試劑研究所）為色譜純；乙腈（Merck公司）為色譜純，水為純化水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件[1]與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2．1．1 大黃素

色譜柱：C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 －0．1%磷酸（80 ∶20）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流速：1．0 mL ／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量為20 μL。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算不低于3 000。在上述色譜條件下，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．1．2 蘆薈苷

色譜柱：C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：以乙腈 －水（25 ∶75）；檢測(cè)波長(zhǎng)：355 nm；流速：1．0 mL ／min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。理論板數(shù)按蘆薈苷峰計(jì)算不低于2 000。在上述色譜條件下，色譜圖見(jiàn)圖1。

2．2 溶液制備

取虎杖90．0 g、蘆薈20．0 g等藥材，用75%乙醇1 L密封浸泡7 d，每天攪拌1次，過(guò)濾，照上法重復(fù)浸泡2次，合并3次濾液，回收乙醇，再加入1．5 g冰片，加水至500 mL即得膚舒寧藥液。取大黃素對(duì)照品0．002 4 g，精密稱定，加甲醇溶解，定容至50 mL，即得大黃素對(duì)照品溶液。稱取蘆薈苷對(duì)照品0．005 0 g，精密稱定，加甲醇溶解，定容至50 mL，即得蘆薈苷對(duì)照品溶液。精密量取膚舒寧藥液1 mL，置100 mL圓底燒瓶?jī)?nèi)，精密加入三氯甲烷25 mL和2．5 mol／L硫酸溶液20 mL，精密稱定，置80℃水浴中加熱回流2 h，冷卻至室溫，再精密稱定，用三氯甲烷補(bǔ)足減少的質(zhì)量，搖勻。分取三氯甲烷液，精密量取10 mL，蒸干，殘?jiān)准状枷♂屩量潭?，搖勻，取適量，過(guò)0．45 μm濾膜，即得大黃素供試品溶液。精密量取膚舒寧藥液10 mL置100 mL容量瓶?jī)?nèi)，加入甲醇適量，超聲處理（功率 250w，頻率 33Hz）30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，取適量，過(guò)0．45 μm濾膜，即得蘆薈苷供試品溶液。分別取缺虎杖、蘆薈藥材各3份樣品，按比例同供試品溶液制備方法制得缺大黃素陰性對(duì)照品溶液。分別取缺蘆薈藥材，按比例同供試品溶液制備方法制得缺蘆薈苷陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察[2]：分別精密量取大黃素與蘆薈苷對(duì)照品溶液各 0．5，1．0，2．0，4．0，8．0 mL，置 10 mL 容量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20 μL。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、對(duì)照品質(zhì)量濃度為（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得大黃素回歸方程Y＝ 23 151X－3 768．2，r＝0．999 9（n＝5），線性范圍為 2．400 ～48．00 μg／mL；蘆薈苷回歸方程為Y＝7 220．4X－ 2 476，r＝0．999 9（n＝5），線性范圍為 5．000 ～100．0 μg／mL。

精密度試驗(yàn)：分別精密吸取同一大黃素和蘆薈苷對(duì)照品溶液20 μL，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果大黃素峰面積的RSD為 0．46%（n＝5），蘆薈苷峰面積的RSD為 0．50%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別取同一大黃素和蘆薈苷供試品溶液，于制備 0，2，4，6，8，10 h 時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣 20 μL，記錄峰面積。結(jié)果大黃素峰面積的RSD為1．26%（n＝6），蘆薈苷峰面積的RSD為0．49%（n＝6），表明大黃素和蘆薈苷供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一膚舒寧藥液樣品5份，分別依法制備大黃素和蘆薈苷供試品溶液，按擬訂色譜條件，分別進(jìn)樣20 μL。結(jié)果樣品中大黃素含量的RSD為0．48%（n＝5），蘆薈苷含量的

RSD為1．56%（n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)[3－4]：精密量取已知大黃素含量的膚舒寧藥液（含量為0．304 mg／mL）1 mL 6份，分別加入已知含量的大黃素對(duì)照品溶液（48．00 μg／mL）2，4，6 mL，同法重復(fù)一組。依法制備大黃素供試品溶液，按擬訂項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣20 μL，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。精密量取已知蘆薈苷含量的膚舒寧藥液（0．341 g／L）2 mL 6份，分別加入已知含量的蘆薈苷對(duì)照品溶液（100．0 μg／mL）1，2，3 mL，同法重復(fù)一組。依法制備蘆薈苷供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣20 μL，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大黃素和蘆薈苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取大黃素對(duì)照品溶液（48．00 μg／mL）與 3份大黃素供試品溶液、蘆薈苷對(duì)照品溶液（100 μg／mL）與 3 份蘆薈苷供試品溶液各 20 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣分析，外標(biāo)法以峰面積計(jì)算大黃素和蘆薈苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

虎杖的陰性對(duì)照試驗(yàn)中，先前制備的是缺虎杖陰性對(duì)照品溶液，但隨后發(fā)現(xiàn)蘆薈中也含有大黃素，則改成缺虎杖及蘆薈的陰性對(duì)照品溶液。

蘆薈苷對(duì)照品試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)蘆薈苷前面有一峰，估計(jì)為其分解產(chǎn)物，且隨著存放時(shí)間越長(zhǎng)，產(chǎn)物峰面積越來(lái)越大，而蘆薈苷峰面積則變小。該溶液見(jiàn)光不穩(wěn)定后，立即新配對(duì)照品溶液且改用棕色瓶避光保存，縮短存放時(shí)間，并加快試驗(yàn)進(jìn)度。在此過(guò)程中，還發(fā)現(xiàn)蘆薈峰稍有拖尾現(xiàn)象，本試驗(yàn)色譜條件參考《中國(guó)藥典（一部）》，因試驗(yàn)效果良好及時(shí)間緊張，未深究其色譜條件。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（g／L）

本研究中采用高效液相色譜法，選用大黃素和蘆薈苷作為指標(biāo)成分對(duì)膚舒寧噴霧劑進(jìn)行含量測(cè)定，并對(duì)精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和加樣回收率進(jìn)行了考察，都得到了良好結(jié)果，證明此法能夠有效控制膚舒寧噴霧劑的質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：22，151．

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