反相高效液相色譜法測(cè)定保嬰鎮(zhèn)驚丸中甘草苷含量

鞏長(zhǎng)芹，李學(xué)紅，周利章

（山東省臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）

保嬰鎮(zhèn)驚丸收載于部頒標(biāo)準(zhǔn)第八冊(cè)，由大黃、甘草、朱砂組方，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀和檢查項(xiàng)目而無(wú)含量測(cè)定，不能有效地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。方中甘草是常用藥，甘草苷為甘草的主要活性成分。因此，選擇測(cè)定甘草藥材中甘草苷的含量作為本品質(zhì)量控制定量指標(biāo)，并建立了準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、可靠的甘草苷分析方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括四元泵、在線脫氣機(jī)、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315D 1260DAD VL檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）；XS205DU型電子分析天平（梅特勒－托利多公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）。甘草苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為111610－201106，含量以93．7%計(jì)）；保嬰鎮(zhèn)驚丸（濟(jì)南宏濟(jì)堂制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)分別為 1012001，1012002，1012003）；乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm），填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：乙腈－0．2%磷酸溶液（14∶86）；流速：1．0 mL ／min；柱溫：40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm。理論板數(shù)按甘草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。在此條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取甘草苷對(duì)照品5．19 mg，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。參考2010年版《中國(guó)藥典（一部）》中快胃片的含量測(cè)定方法[1]。取本品，剪碎，取約0．7 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：按保嬰鎮(zhèn)驚丸中處方比例精密稱取全方中除甘草外的其他藥材，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。照樣品測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果在主成分出峰處無(wú)干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對(duì)照品溶液 1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝1 609．09X＋4．850 7，r＝0．999 6（n＝6），結(jié)果表明，甘草苷進(jìn)樣量在 0．097 3～0．973 0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取甘草苷對(duì)照品溶液5 μL，分別進(jìn)樣6次，按擬訂色譜條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算。結(jié)果的RSD為0．24%（n＝6），表明儀器的精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品（1012002）6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果甘草苷含量的RSD為1．26%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液（1012002），分別于0，1，2，4，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果甘草苷含量的RSD為 1．37%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取6份已知含量的樣品（1012002，甘草苷的含量為3．12 mg／g），精密稱定，共取6份，每份中精密加入甘草苷對(duì)照品溶液，依法制備成供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 甘草苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)分別為1012001，1012002，1012003 的樣品中甘草苷含量分別為 3．13，3．12，3．21 mg ／g。

3 討論

對(duì)甘草苷進(jìn)行進(jìn)行紫外吸收光譜掃描，結(jié)果在276 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此選擇276 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

在對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行選擇時(shí)，參考2010年版《中國(guó)藥典（一部）》中快胃片含量測(cè)定的流動(dòng)相[1]，通過(guò)調(diào)整比例，結(jié)果表明，以乙腈－0．2%磷酸溶液（14∶86）為流動(dòng)相，所得色譜峰峰形較好，陰性無(wú)干擾，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

通過(guò)線性范圍、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率的試驗(yàn)考察，證明本方法快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能有效控制本制劑的質(zhì)量，可作為保嬰鎮(zhèn)驚丸中甘草的質(zhì)量控制方法。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：769 －770．