趨化因子受體CXCR4/CXCL12在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其與結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究

胡達(dá)水 胡 海 陳義華 羅偉昌 萬志剛

南昌市第三醫(yī)院普外科，江西南昌 330009

結(jié)腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，影響其遠(yuǎn)期療效及預(yù)后的主要瓶頸是結(jié)腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。肝臟是結(jié)腸癌主要遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的主要靶器官，也是影響結(jié)腸癌療效的主要因素之一。近來研究證實(shí)趨化因子CXCL12及其受體CXCR4在腫瘤的器官特異性轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，但其在結(jié)腸癌向肝臟特異轉(zhuǎn)移研究未見報(bào)道。本研究檢測(cè)了84例結(jié)腸癌標(biāo)本中趨化因子受體CXCR4/CXCL12的表達(dá)，探討CXCR4/CXCL12與結(jié)腸癌肝臟轉(zhuǎn)移的關(guān)系及意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集筆者所在醫(yī)院普通外科2008年1月～2012年1月84例結(jié)腸癌組織標(biāo)本，男49例，女35例，其中高分化腺癌26例，中分化腺癌34例，低分化腺癌24例。有肝臟轉(zhuǎn)移者43例，無肝轉(zhuǎn)移者41例。年齡38～73歲，中位年齡54歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

鼠抗人試劑CXCR4（深圳晶美生物工程有限公司，fusin，CD184），SP試劑（深圳晶美生物工程有限公司）。兔抗人CXCL12抗體試劑（深圳晶美生物工程有限公司）。

1.3 方法與結(jié)果判斷

84例結(jié)腸癌組織標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，分別連續(xù)切片，每片5μm厚備用，采用SP法對(duì)標(biāo)本切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，陰性對(duì)照使用PBS代替一抗。

陽性判斷：陽性染色以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色至棕褐色顆粒為準(zhǔn)，顯微觀察選擇400倍光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計(jì)，以定位明確、染色明顯，平均20%以上細(xì)胞染色的組織切片視為表達(dá)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS11.0軟件對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

通過免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)，在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中可見CXCR4陽性表達(dá)，呈淡黃色至棕黃色，弱染色基本出現(xiàn)在癌組織及周圍的基質(zhì)內(nèi)，而在細(xì)胞核不染色（圖1）。癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中可觀察到CXCL12的陽性表達(dá)率，局灶性或彌散性分布呈淡黃色至棕黃色，細(xì)胞膜和細(xì)胞核均不染色，可在強(qiáng)陽性染色的癌組織附近觀察到淋巴管內(nèi)皮著色（圖2）。

圖1 結(jié)腸癌CXCR4陽性染色（SP×400）

圖2 結(jié)腸癌CXCL12陽性染色（SP×400）

通過免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)，在84例CXCL12的陽性表達(dá)標(biāo)本中，陽性率56%（47/84）；伴肝臟轉(zhuǎn)移組CXCL12的陽性表達(dá)率62.3%（27/43），無肝臟轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率25.8%（11/41），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在84例標(biāo)本中CXCR4表達(dá)結(jié)果可見，陽性率53.6%（45/84）；伴有肝臟轉(zhuǎn)移組CXCR4的陽性表達(dá)率58.7%（25/43），無肝臟轉(zhuǎn)移組陽性染色率22.1%（9/41），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 84例患者CXCR4/CXCL12在結(jié)腸癌中及伴有結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的陽性表達(dá)[n（%）]

3 討論

惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)非隨機(jī)性過程，特定的腫瘤的轉(zhuǎn)移有其器官轉(zhuǎn)移的特異性。目前認(rèn)為導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移的嗜器官性與某些器官表達(dá)的趨化因子與腫瘤原發(fā)灶腫瘤細(xì)胞表面的趨化因子受體相關(guān)。其機(jī)制主要為表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的趨化因子與特定器官表達(dá)的受體特異性結(jié)合，研究認(rèn)為趨化因子還通過提高基質(zhì)蛋白酶-9來提高腫瘤的轉(zhuǎn)移能力[1]。Murakami T等[2]通過敲除趨化因子CXCR3和CXCR4基因的表達(dá)來抑制結(jié)腸癌肝臟和肺部的轉(zhuǎn)移取得理想較高。Kim J[3]對(duì)有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的腫瘤細(xì)胞用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行分析顯示，趨化因子受體CXCR4在這些患者的結(jié)直腸癌細(xì)胞呈高表達(dá)，陽性率高達(dá)97%。而在結(jié)直腸癌最常見的轉(zhuǎn)移部位，如淋巴結(jié)、肝臟、肺則高表達(dá)其配體CXCL12。所以也就不難理解為何結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移絕大多數(shù)發(fā)生在肝臟等部位。在其他消化道腫瘤轉(zhuǎn)移過程中CXCR4/CXCL12發(fā)揮著重要作用。Yan C等[4]對(duì)132例行胃癌根治術(shù)和30例內(nèi)鏡活檢的胃癌組織標(biāo)本檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CXCR4在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中的表達(dá)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，并且與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴管浸潤(rùn)和分期密切相關(guān)。

本研究顯示CXCR4/CXCLl2在結(jié)腸癌中有較高表達(dá)，且伴有肝臟轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織CXCR4陽性表達(dá)顯著高于無肝轉(zhuǎn)移患者。Cho等[5]通過運(yùn)用PCR技術(shù)檢查多個(gè)趨化因子受體在結(jié)腸癌患者肝臟中具有顯著表達(dá)，且與結(jié)腸癌的肝轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，并認(rèn)為趨化因子可以作為結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的一項(xiàng)指標(biāo)，這與我們報(bào)道相一致，僅與筆者的研究趨化因子及其受種類不同而于。另外在結(jié)腸癌肝臟的轉(zhuǎn)移中，微轉(zhuǎn)移灶往往不能早期發(fā)現(xiàn)，所以通過CXCR4/CXCLl2檢測(cè)，有望作為預(yù)測(cè)結(jié)腸癌潛在轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)和預(yù)后的有效指標(biāo)。

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