牛耳楓主要病害的初步鑒定及其田間藥劑防治試驗

劉威等

摘要：通過野外及種植基地的調(diào)查，對牛耳楓上發(fā)生的主要病害進行了調(diào)查和初步鑒定，共發(fā)現(xiàn)2種危害較嚴(yán)重的病害，分別鑒定為牛耳楓枯梢病致病菌鐮刀菌屬（Fusarium sp.）、炭疽病病原菌刺盤孢屬（Colletotrichum sp.）。針對這2種病害做了田間藥劑防治試驗，篩選出對枯梢病防治效果較好的化學(xué)藥劑為1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑，對炭疽病防治效果較好的化學(xué)藥劑為25%丙環(huán)唑乳油、10%苯醚甲環(huán)唑乳油。

關(guān)鍵詞：牛耳楓；病害；化學(xué)藥劑；防治效果

中圖分類號： S435.671 文獻標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0111-03

收稿日期：2013-08-15

基金項目：廣西省科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃（編號：桂科攻1099063-13）。

作者簡介：劉威（1982—），女，廣西北流人，助理工程師，從事藥用植物病蟲害研究。E-mail：liuwei98@126.com。

通信作者：黃雪彥，碩士，副研究員。E-mail：xueyan-h@163.com。牛耳楓（Daphniphyllum calycinum Benth.）為虎皮楠科植物，其果實、枝葉、根均可入藥，具有祛風(fēng)止痛、解毒消腫、止痢等功效，主治外感發(fā)熱、咳嗽、咽喉腫痛、脅下痞塊、風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、毒蛇咬傷、瘡瘍腫毒等，在廣西，廣東、海南、云南、福建、江西等地均有分布[1]。牛耳楓是海南的道地藥材[2]，也是黎族常用的中草藥[3]，植物中主要含蕓香苷、槲皮素等黃酮類成分及生物堿類成分，其中蕓香苷在牛耳楓藥材中的含量較高，是治療高血壓、心血管疾病、糖尿病等多種疾病的良藥[4]。牛耳楓的葉及種子中含有的生物堿具有抗腫瘤作用[5]。牛耳楓的種子及種仁含油量較高，含油量達30%～40%，可作為制作油漆、肥皂、潤滑油等的原料[6-7]，牛耳楓也是適用于生物柴油資源開發(fā)利用的油料樹種。隨著牛耳楓市場需求量的增加，牛耳楓的野生資源已經(jīng)遠(yuǎn)不能滿足市場的要求，需要進行人工栽培方能解決資源匱乏的問題。近幾年來，海南、廣西等地相繼推廣人工牛耳楓的種植，2010—2013年，在廣西南寧市西鄉(xiāng)塘區(qū)石埠鄉(xiāng)的牛耳楓種植基地及廣西藥用植物園的種質(zhì)資源苗圃中均發(fā)現(xiàn)了一些重要病害，發(fā)生率達50%～70%，嚴(yán)重影響了牛耳楓的產(chǎn)量和品質(zhì)。目前國內(nèi)對牛耳楓的研究主要集中在化學(xué)成分及藥理活性方面，尚無關(guān)于其病蟲害研究的報道。本研究通過對牛耳楓生長發(fā)育期的觀察，對其上發(fā)生的主要病害種類進行調(diào)查和鑒定，并初步掌握其發(fā)生發(fā)展的規(guī)律，同時開展了田間藥劑防治對比試驗，以期為牛耳楓病害的有效防治打下基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗材料

染病的牛耳楓植株來源于廣西南寧市西鄉(xiāng)塘區(qū)石埠鄉(xiāng)牛耳楓種植基地；藥劑防治試驗也選擇在該種植基地進行。

1.2病害癥狀描述

對不同生長期的牛耳楓病害進行調(diào)查，觀察病害在田間的發(fā)病情況并記錄病害癥狀。采集具有典型癥狀的病株用于室內(nèi)病原菌的分離鑒定。

1.3病原鑒定

參考方中達的方法[8]對病原物進行常規(guī)組織分離培養(yǎng)和致病性測定。根據(jù)病害癥狀、病原菌的培養(yǎng)性狀及形態(tài)特征，參照相關(guān)文獻資料進行病原菌的種類鑒定。

1.3.1病原菌的分離與純化病原菌采用常規(guī)的組織分離法分離。選取初發(fā)病的牛耳楓梢部、葉片病健交界處的病組織，剪成0.5 cm×0.5 cm大小組織塊，先用75%乙醇浸泡30 s、01%氯化汞消毒3min，再用滅菌水漂洗3次后置于PDA培養(yǎng)基（配制方法同普通微生物培養(yǎng)試驗）上，于26 ℃條件培養(yǎng)；待長出菌絲后，挑取菌落邊緣進行純化，將純化后的菌落通過單孢分離而獲得純培養(yǎng)分離物。

1.3.2病原菌的致病性測定選取健康的牛耳楓植株，用滅菌蒸餾水沖洗干凈后晾干表面的水分，采用針刺接種的方法將純培養(yǎng)的病原菌菌絲塊接種到牛耳楓的健康梢部、葉片上，以不接種的病原菌組織為對照，每處理設(shè)3次重復(fù)。接種后置于25～30 ℃自然條件下培養(yǎng)，定期觀察各組織的發(fā)病情況。適時對接種發(fā)病的組織進行病原菌再分離，觀察分離得到的病原菌是否與接種菌株相同。

1.3.3病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定將有致病性的病原菌菌株接種于PDA培養(yǎng)基平板上，觀察病原菌的培養(yǎng)性狀。在光學(xué)顯微鏡下觀察并描述病原菌的菌絲體、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)及孢子的形態(tài)，隨機測量100個病原菌分生孢子的大小并拍照，對病原菌種類進行鑒定。

1.4田間防治試驗

1.4.1枯梢病防治試驗

1.4.1.1供試藥劑1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑（西安嘉科農(nóng)化有限公司）；5%利刃水溶劑[主要成分：雙（烷基氫基）氫基乙酸鹽，西安嘉科農(nóng)化有限公司]；45%甲霜·惡霉靈可濕性粉劑（山東化聯(lián)作物有限公司）。

1.4.1.2試驗設(shè)計試驗采用隨機區(qū)組設(shè)計，每處理設(shè)3次重復(fù)，每個小區(qū)處理面積30 m2，田間隨機排列。以不同的藥劑作為不同的處理，以噴施清水作為空白對照。共施藥3次，期間間隔7 d，以手動背負(fù)式噴霧器對全株進行噴霧。首次施藥前將牛耳楓枯梢病病株數(shù)及相對應(yīng)的病情基數(shù)做好記錄及標(biāo)記，第2、3次施藥前及第3次施藥后7 d分別調(diào)查1次防效，每個重復(fù)調(diào)查5點，每點30株，記錄病株率，并按照病情分級進行統(tǒng)計，計算病情指數(shù)及防治效果。使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行測量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。

枯梢病病情分級標(biāo)準(zhǔn)[9-10]如下：0級：全株無??；3級：梢部1/3以下發(fā)病；5級：梢部1/3～2/3發(fā)?。?級：梢部2/3以上發(fā)?。?級：整個梢部發(fā)病，梢部以上葉片萎蔫。病情指數(shù)、相對防效的計算公式如下。

1.4.2炭疽病防治試驗

1.4.2.1供試藥劑10%苯醚甲環(huán)唑乳油（瑞士諾華有限公司）；25%丙環(huán)唑乳油（海南博士威農(nóng)用化學(xué)有限公司）；25%咪鮮胺乳油（浙江興農(nóng)生物化工有限公司）。

1.4.2.2試驗設(shè)計試驗以不同的藥劑作為不同的處理，每處理設(shè)3次重復(fù)，每小區(qū)20 m2；以噴施清水作為空白對照。共施藥3次，期間間隔7 d，以手動背負(fù)式噴霧器對全株葉片進行噴霧。首次施藥前將牛耳楓的炭疽病總?cè)~數(shù)、病葉片數(shù)及相對應(yīng)的各病情基數(shù)分別做好記錄，第2、3次施藥前及第3次施藥后7 d分別調(diào)查1次防效。每個重復(fù)調(diào)查5點，每點20株，記錄發(fā)病病葉數(shù)及相對應(yīng)的病情級數(shù)，按照病害分級進行統(tǒng)計，計算病情指數(shù)及防治效果。使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行測量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。

牛耳楓炭疽病病葉分級標(biāo)準(zhǔn)[11]如下：0級：全葉無病；1級：病斑面積占葉片面積的6%以下；3級：病斑面積占葉片面積的6%～15%；5級：病斑面積占葉片面積的16%～25%；7級：病斑面積占葉片面積的26%～50%；9級：病斑面積占整個葉片面積的50%以上。病情指數(shù)及相對防效的計算公式與枯梢病相同。

2結(jié)果與分析

2.1牛耳楓枯梢病

2.1.1病害癥狀牛耳楓枯梢病是苗期發(fā)生的主要病害之一，該病主要危害枝干嫩梢頸部，也可危害葉片、葉柄。受害莖稈初期產(chǎn)生水浸狀病斑，然后迅速向上、向下擴大并環(huán)繞莖稈，病部凹陷，病莖以上的莖葉呈萎蔫狀，而后由凹陷處下折，最后變褐色并干枯而死。受害葉柄呈水漬狀，病斑沒有明顯的界限，可向上蔓延至葉片，受害后葉片似開水燙過，后期整個梢部易從病部折斷。牛耳楓的枯梢病病害在苗期易發(fā)，發(fā)生率可達50%～60%，病害的發(fā)生與氣溫和雨量關(guān)系密切。春、秋陰涼天氣及雨季的發(fā)病情況較為嚴(yán)重，苗期種植密度過大也會成為該病發(fā)生的主要原因。

2.1.2病原菌的致病性測定對牛耳楓用針刺法接種枯梢病病原菌6 d后，牛耳楓開始發(fā)病，且發(fā)病植株的癥狀與田間的發(fā)病癥狀基本一致。重新對接種發(fā)病的病健交界處進行分離發(fā)現(xiàn)，病原菌形態(tài)與原分離物一致。

2.1.3病原菌的鑒定結(jié)果將病原菌在PDA平板上培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，菌落為圓形或近圓形，邊緣整齊，有絮狀突起，氣生菌絲白色質(zhì)密。菌落粉白色、淺粉色至肉色，略帶有紫色，由于大量孢子生成而呈粉質(zhì)。菌落高3～5 mm，分生孢子鐮刀形，上端略彎曲，無色，多胞，兩端細(xì)胞稍尖，大?。?4.6～62.4） μm×（5.5～7.9） μm。分生孢子座為紫色小點，直徑100～200 μm，由許多聚集成墊狀的、很短的分生孢子梗形成，頂端著生分生孢子。牛耳楓枯梢病的癥狀及病原形態(tài)見圖1。根據(jù)以上對病原菌的描述，同時參照《中國真菌總匯》[12]和布斯描述的鐮刀菌形態(tài)學(xué)特征[13]，將本病原菌初步鑒定為半知菌亞門鐮刀菌屬（Fusarium sp.）。

3結(jié)論與討論

本研究對牛耳楓生長過程中主要發(fā)生的病害進行調(diào)查，通過病害的發(fā)病癥狀、病原菌形態(tài)特征初步鑒定出牛耳楓枯梢病病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp.），炭疽病病原菌為刺盤孢屬（Colletotrichum sp.），但具體的種名尚未明確，還有待于進一步鑒定?？萆也?、炭疽病這2種病害在田間的發(fā)生較為嚴(yán)重，且環(huán)境條件適宜時極易造成流行發(fā)生，因此在防治上應(yīng)抓住最佳時期用藥，做到早發(fā)現(xiàn)早防治。此外還可以結(jié)合清除病葉、落葉，及時追肥，選擇適宜的種植密度，雨后及時排水等農(nóng)業(yè)方法進行有效防治。

除對牛耳楓的主要病害種類進行調(diào)查外，本研究還在牛耳楓種植基地的發(fā)病區(qū)對枯梢病、炭疽病進行了田間藥劑對比試驗，篩選出防治枯梢病、炭疽病較好的藥劑，分別為18%辛菌胺醋酸鹽水溶劑、25%丙環(huán)唑乳油和10%苯醚甲環(huán)唑乳油，為牛耳楓生產(chǎn)上發(fā)生這2種病害的化學(xué)防治提供了科學(xué)依據(jù)。

枯梢病及炭疽病是牛耳楓生產(chǎn)過程中極易發(fā)生的病害，且病情逐年加重，為了更有效地對這2種病害進行防治控制，還需要進一步對病害的發(fā)病條件、病原菌的侵染循環(huán)、生物學(xué)特性等方面進行更深入的研究，從而促進牛耳楓生產(chǎn)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。

參考文獻：

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[14]魏景超. 真菌鑒定手冊[M]. 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1979：468-475.

1.4.2.2試驗設(shè)計試驗以不同的藥劑作為不同的處理，每處理設(shè)3次重復(fù)，每小區(qū)20 m2；以噴施清水作為空白對照。共施藥3次，期間間隔7 d，以手動背負(fù)式噴霧器對全株葉片進行噴霧。首次施藥前將牛耳楓的炭疽病總?cè)~數(shù)、病葉片數(shù)及相對應(yīng)的各病情基數(shù)分別做好記錄，第2、3次施藥前及第3次施藥后7 d分別調(diào)查1次防效。每個重復(fù)調(diào)查5點，每點20株，記錄發(fā)病病葉數(shù)及相對應(yīng)的病情級數(shù)，按照病害分級進行統(tǒng)計，計算病情指數(shù)及防治效果。使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行測量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。

牛耳楓炭疽病病葉分級標(biāo)準(zhǔn)[11]如下：0級：全葉無??；1級：病斑面積占葉片面積的6%以下；3級：病斑面積占葉片面積的6%～15%；5級：病斑面積占葉片面積的16%～25%；7級：病斑面積占葉片面積的26%～50%；9級：病斑面積占整個葉片面積的50%以上。病情指數(shù)及相對防效的計算公式與枯梢病相同。

2結(jié)果與分析

2.1牛耳楓枯梢病

2.1.1病害癥狀牛耳楓枯梢病是苗期發(fā)生的主要病害之一，該病主要危害枝干嫩梢頸部，也可危害葉片、葉柄。受害莖稈初期產(chǎn)生水浸狀病斑，然后迅速向上、向下擴大并環(huán)繞莖稈，病部凹陷，病莖以上的莖葉呈萎蔫狀，而后由凹陷處下折，最后變褐色并干枯而死。受害葉柄呈水漬狀，病斑沒有明顯的界限，可向上蔓延至葉片，受害后葉片似開水燙過，后期整個梢部易從病部折斷。牛耳楓的枯梢病病害在苗期易發(fā)，發(fā)生率可達50%～60%，病害的發(fā)生與氣溫和雨量關(guān)系密切。春、秋陰涼天氣及雨季的發(fā)病情況較為嚴(yán)重，苗期種植密度過大也會成為該病發(fā)生的主要原因。

2.1.2病原菌的致病性測定對牛耳楓用針刺法接種枯梢病病原菌6 d后，牛耳楓開始發(fā)病，且發(fā)病植株的癥狀與田間的發(fā)病癥狀基本一致。重新對接種發(fā)病的病健交界處進行分離發(fā)現(xiàn)，病原菌形態(tài)與原分離物一致。

2.1.3病原菌的鑒定結(jié)果將病原菌在PDA平板上培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，菌落為圓形或近圓形，邊緣整齊，有絮狀突起，氣生菌絲白色質(zhì)密。菌落粉白色、淺粉色至肉色，略帶有紫色，由于大量孢子生成而呈粉質(zhì)。菌落高3～5 mm，分生孢子鐮刀形，上端略彎曲，無色，多胞，兩端細(xì)胞稍尖，大?。?4.6～62.4） μm×（5.5～7.9） μm。分生孢子座為紫色小點，直徑100～200 μm，由許多聚集成墊狀的、很短的分生孢子梗形成，頂端著生分生孢子。牛耳楓枯梢病的癥狀及病原形態(tài)見圖1。根據(jù)以上對病原菌的描述，同時參照《中國真菌總匯》[12]和布斯描述的鐮刀菌形態(tài)學(xué)特征[13]，將本病原菌初步鑒定為半知菌亞門鐮刀菌屬（Fusarium sp.）。

3結(jié)論與討論

本研究對牛耳楓生長過程中主要發(fā)生的病害進行調(diào)查，通過病害的發(fā)病癥狀、病原菌形態(tài)特征初步鑒定出牛耳楓枯梢病病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp.），炭疽病病原菌為刺盤孢屬（Colletotrichum sp.），但具體的種名尚未明確，還有待于進一步鑒定?？萆也?、炭疽病這2種病害在田間的發(fā)生較為嚴(yán)重，且環(huán)境條件適宜時極易造成流行發(fā)生，因此在防治上應(yīng)抓住最佳時期用藥，做到早發(fā)現(xiàn)早防治。此外還可以結(jié)合清除病葉、落葉，及時追肥，選擇適宜的種植密度，雨后及時排水等農(nóng)業(yè)方法進行有效防治。

除對牛耳楓的主要病害種類進行調(diào)查外，本研究還在牛耳楓種植基地的發(fā)病區(qū)對枯梢病、炭疽病進行了田間藥劑對比試驗，篩選出防治枯梢病、炭疽病較好的藥劑，分別為18%辛菌胺醋酸鹽水溶劑、25%丙環(huán)唑乳油和10%苯醚甲環(huán)唑乳油，為牛耳楓生產(chǎn)上發(fā)生這2種病害的化學(xué)防治提供了科學(xué)依據(jù)。

枯梢病及炭疽病是牛耳楓生產(chǎn)過程中極易發(fā)生的病害，且病情逐年加重，為了更有效地對這2種病害進行防治控制，還需要進一步對病害的發(fā)病條件、病原菌的侵染循環(huán)、生物學(xué)特性等方面進行更深入的研究，從而促進牛耳楓生產(chǎn)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。

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[11]姚紅燕，邱宏良，陳若霞，等. 幾種藥劑對草霉炭疽病的效果[J]. 植物保護，2010，36（6）：162-164.

[12]戴芳瀾. 中國真菌總匯[M]. 北京：科學(xué)出版社，1979.

[13]布斯. 鐮刀菌屬[M]//陳其煐，譯. 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1988.

[14]魏景超. 真菌鑒定手冊[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1979：468-475.

1.4.2.2試驗設(shè)計試驗以不同的藥劑作為不同的處理，每處理設(shè)3次重復(fù)，每小區(qū)20 m2；以噴施清水作為空白對照。共施藥3次，期間間隔7 d，以手動背負(fù)式噴霧器對全株葉片進行噴霧。首次施藥前將牛耳楓的炭疽病總?cè)~數(shù)、病葉片數(shù)及相對應(yīng)的各病情基數(shù)分別做好記錄，第2、3次施藥前及第3次施藥后7 d分別調(diào)查1次防效。每個重復(fù)調(diào)查5點，每點20株，記錄發(fā)病病葉數(shù)及相對應(yīng)的病情級數(shù)，按照病害分級進行統(tǒng)計，計算病情指數(shù)及防治效果。使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行測量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。

牛耳楓炭疽病病葉分級標(biāo)準(zhǔn)[11]如下：0級：全葉無??；1級：病斑面積占葉片面積的6%以下；3級：病斑面積占葉片面積的6%～15%；5級：病斑面積占葉片面積的16%～25%；7級：病斑面積占葉片面積的26%～50%；9級：病斑面積占整個葉片面積的50%以上。病情指數(shù)及相對防效的計算公式與枯梢病相同。

2結(jié)果與分析

2.1牛耳楓枯梢病

2.1.1病害癥狀牛耳楓枯梢病是苗期發(fā)生的主要病害之一，該病主要危害枝干嫩梢頸部，也可危害葉片、葉柄。受害莖稈初期產(chǎn)生水浸狀病斑，然后迅速向上、向下擴大并環(huán)繞莖稈，病部凹陷，病莖以上的莖葉呈萎蔫狀，而后由凹陷處下折，最后變褐色并干枯而死。受害葉柄呈水漬狀，病斑沒有明顯的界限，可向上蔓延至葉片，受害后葉片似開水燙過，后期整個梢部易從病部折斷。牛耳楓的枯梢病病害在苗期易發(fā)，發(fā)生率可達50%～60%，病害的發(fā)生與氣溫和雨量關(guān)系密切。春、秋陰涼天氣及雨季的發(fā)病情況較為嚴(yán)重，苗期種植密度過大也會成為該病發(fā)生的主要原因。

2.1.2病原菌的致病性測定對牛耳楓用針刺法接種枯梢病病原菌6 d后，牛耳楓開始發(fā)病，且發(fā)病植株的癥狀與田間的發(fā)病癥狀基本一致。重新對接種發(fā)病的病健交界處進行分離發(fā)現(xiàn)，病原菌形態(tài)與原分離物一致。

2.1.3病原菌的鑒定結(jié)果將病原菌在PDA平板上培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，菌落為圓形或近圓形，邊緣整齊，有絮狀突起，氣生菌絲白色質(zhì)密。菌落粉白色、淺粉色至肉色，略帶有紫色，由于大量孢子生成而呈粉質(zhì)。菌落高3～5 mm，分生孢子鐮刀形，上端略彎曲，無色，多胞，兩端細(xì)胞稍尖，大小（44.6～62.4） μm×（5.5～7.9） μm。分生孢子座為紫色小點，直徑100～200 μm，由許多聚集成墊狀的、很短的分生孢子梗形成，頂端著生分生孢子。牛耳楓枯梢病的癥狀及病原形態(tài)見圖1。根據(jù)以上對病原菌的描述，同時參照《中國真菌總匯》[12]和布斯描述的鐮刀菌形態(tài)學(xué)特征[13]，將本病原菌初步鑒定為半知菌亞門鐮刀菌屬（Fusarium sp.）。

3結(jié)論與討論

本研究對牛耳楓生長過程中主要發(fā)生的病害進行調(diào)查，通過病害的發(fā)病癥狀、病原菌形態(tài)特征初步鑒定出牛耳楓枯梢病病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp.），炭疽病病原菌為刺盤孢屬（Colletotrichum sp.），但具體的種名尚未明確，還有待于進一步鑒定。枯梢病、炭疽病這2種病害在田間的發(fā)生較為嚴(yán)重，且環(huán)境條件適宜時極易造成流行發(fā)生，因此在防治上應(yīng)抓住最佳時期用藥，做到早發(fā)現(xiàn)早防治。此外還可以結(jié)合清除病葉、落葉，及時追肥，選擇適宜的種植密度，雨后及時排水等農(nóng)業(yè)方法進行有效防治。

除對牛耳楓的主要病害種類進行調(diào)查外，本研究還在牛耳楓種植基地的發(fā)病區(qū)對枯梢病、炭疽病進行了田間藥劑對比試驗，篩選出防治枯梢病、炭疽病較好的藥劑，分別為18%辛菌胺醋酸鹽水溶劑、25%丙環(huán)唑乳油和10%苯醚甲環(huán)唑乳油，為牛耳楓生產(chǎn)上發(fā)生這2種病害的化學(xué)防治提供了科學(xué)依據(jù)。

枯梢病及炭疽病是牛耳楓生產(chǎn)過程中極易發(fā)生的病害，且病情逐年加重，為了更有效地對這2種病害進行防治控制，還需要進一步對病害的發(fā)病條件、病原菌的侵染循環(huán)、生物學(xué)特性等方面進行更深入的研究，從而促進牛耳楓生產(chǎn)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。

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