HPLC-ELSD法測定復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量

程世云，徐國兵

（1.安徽中醫(yī)藥大學，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗所，安徽 合肥 230051）

HPLC-ELSD法測定復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量

程世云1，2，徐國兵1，2

（1.安徽中醫(yī)藥大學，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗所，安徽 合肥 230051）

目的 采用高效液相色譜—蒸發(fā)光散射法建立復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法測定。色譜柱：TSK GEL G2000SWxl色譜柱（7.8 mm×300 mm，5 μm），流動相：乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92），流速：0.8 mL·min-1，柱溫：30℃，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度 103℃，載氣為氮氣，流量為 2.5 L·min-1。結果 聚山梨酯80進樣量在 2.515～100.6 μg范圍內線性關系良好，r＝0.999 6；平均加樣回收率為 100.87%（n＝6，RSD＝0.65%）。結論 試驗表明，該方法操作簡單、快速，重復性好，可以作為復方麝香注射液中聚山梨酯80的質量控制方法。

復方麝香注射液；聚山梨酯80；含量測定；HPLC；蒸發(fā)光散射

復方麝香注射液是由人工麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲、冰片和薄荷腦等六味中藥制成的復方制劑，標準收載于國家食品藥品監(jiān)督管理局國家中成藥標準匯編經(jīng)絡肢體腦系分冊［1］，具有豁痰開竅，醒腦安神的功效，用于痰熱內閉所致的中風昏迷。輔料聚山梨酯 80又稱吐溫80，其對脂溶性成分有較好的助溶作用，是復方麝香注射液中的助溶劑，本身有很強的細胞膜破碎作用而導致刺激性、溶血性和組胺釋放（過敏），如果用量不當可導致不良反應，為此，本次試驗參考部分文獻報道［2-11］，建立了復方麝香注射液中聚山梨酯 80的含量測定方法，該方法方便、快捷，方法學驗證符合要求，可用于復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量測定。

1 儀器與試藥

Agilent1200系 列 高 效液相 色 譜 儀，Alltech ELSD 2000ES檢測器；乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑為分析純；聚山梨酯80（BESTOWN-振翔公司提供，批號G0I359）；復方麝香注射液9批，分別由吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司（標為廠家1）和安徽金太陽生化藥業(yè)有限公司（標為廠家2）提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：TSK GEL G2000SWxl色譜柱（7.8 mm×300 mm，5 μm），流動相：乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92），流速：0.8 mL· min-1，檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器，柱溫：30℃；進樣量：10 μL。理論板數(shù)按聚山梨酯80峰計算不低于1 500，分離度大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取聚山梨酯 80對照品0.251 5 g，置50 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中含5.03 mg聚山梨酯80的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取復方麝香注射液1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方組成比例，將人工麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲加水蒸氣蒸餾得初餾液，再進行重蒸餾，收集重蒸液，將冰片、薄荷腦共研，用上述蒸餾液分次溶解；再按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.3 線性關系考察 分別精密量取上述對照品溶液0.5、1、2、4、8、16、20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，峰面積分別為：154.8、490.5、1 203.9、3 151.0、8 645.2、23 884.5、31 907.2。以峰面積的自然對數(shù)值（Y）為縱坐標，以聚山梨酯 80進樣量的自然對數(shù)值（X）為橫坐標，繪制標準曲線，經(jīng)回歸處理，方程：Y＝1.430X+1.646，r＝0.999 6，結果表明，聚山梨酯80進樣量在2.515～100.6 μg范圍內線性關系良好。

圖1 色譜圖（1.聚山梨酯80）

2.4 精密度考察 精密吸取同一對照品溶液連續(xù)進樣6次，每次4 μL，測定峰面積分別為：3 199.1、3 137.9、3 146.0、3 144.5、3 139.6、3 138.6。峰面積平均為 3 151.0，RSD為0.76%，表明精密度良好。

2.5 重復性試驗 精密稱取同一批號（13020713）樣品6份按供試液制備方法制備，依法測定。結果聚山梨酯 80含量分別為（g·L-1）：14.55、14.68、14.62、14.54、14.37、14.41，平均含量是14.53 g· L-1，其 RSD為 0.84%，表明本品測定方法重復性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液分別在配制后 0、4、8、12、24 h進樣 10 μL，測定峰面積分別為：2 057.7、2 125.8、2 097.4、2 055.7、2 069.9。RSD 為1.44%，結果顯示，供試品溶液在 24 h內基本穩(wěn)定。

2.7 專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，按本文條件各進樣10 μL，色譜圖見圖1，在本文條件下，陰性對照無干擾。

2.8 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的同一批（批號：13020713，含量：14.53 g·L-1）的樣品 6份，每份0.5 mL，分別精密加入聚山梨酯80對照品溶液（濃度為5.03 g·L-1）1.5 mL，置10 mL量瓶中，按上述含量測定方法測定，結果平均回收率為100.9%，RSD＝0.65%，具體結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.9 樣品含量測定 取不同廠家的 9批復方麝香注射液樣品，按供試品溶液的配制項下制備供試品溶液，每個批次的樣品平行制備 2份，測定復方麝香注射液中輔料聚山梨酯80的含量，結果見表2。

表2 復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量（n＝2）

3 討論

3.1 檢測器的選擇 聚山梨酯80本身沒有紫外吸收，故不能選擇紫外檢測器，而蒸發(fā)光散射檢測器為通用型檢測器，對所有化合物均有相應，故此次試驗采用蒸發(fā)光散射檢測器，進行復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量檢測。

3.2 色譜柱的選擇 聚山梨酯 80為極性化合物，在常規(guī)的C18柱上幾乎無保留，無法測定。此次試驗采用的凝膠色譜柱TSK GEL G2000SWxl（7.8 mm ×300 mm，5 μm）為排阻色譜柱，其鍵合相能與聚山梨酯80選擇性作用，達到分離檢測的結果。

3.3 流動相與流速的選擇 此次試驗分別比較了乙腈—水（8∶92）、乙腈—0.02 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92）和乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92）三種不同的流動相，結果顯示以乙腈—0.01 mol· L-1乙酸銨溶液（8∶92）為流動相時，聚山梨酯 80得到較好的分離及較高的理論塔板數(shù)。同時此次試驗還比較了0.6、0.8和1.0 mL·min-1三種不同流速，結果顯示 0.6 mL·min-1的流速出峰時間晚且峰較寬，1.0 mL·min-1的流速出峰時間較早且柱壓增大，采用 0.8 mL·min-1的流速時峰型較好，出峰時間適中，故選用 0.8 mL·min-1的流速。

4 小結

本研究首次建立復方麝香注射液中聚山梨酯80的HPLC-ELSD測定方法，方法可靠，重現(xiàn)性好，考慮到聚山梨酯80的特殊生理作用且易誘發(fā)臨床不良反應，建議在現(xiàn)行標準中增加聚山梨酯 80的含量測定檢查項目。

［1］ 國家藥品監(jiān)督管理局.國家中成藥標準匯編中成藥地方標準上升國家標準部分經(jīng)絡肢體腦分冊［S］，2002：240-244.

［2］ 高文分，袁文娟，王 梅.HPLC-ELSD法測定醒腦靜注射液中聚山梨酯80的含量［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2012，22（7）：59 -60.

［3］ 李櫻紅，黃琴偉，祝 明，等.高效液相色譜法-蒸發(fā)光散射法測定冠心寧注射液中聚山梨酯80的含量［J］.藥物分析雜志，2012，32（5）：826-828.

［4］ 王少敏，夏 晶，陳 潔，等.黃芪注射液中藥用輔料聚山梨酯80兩種含量測定方法的比較研究［J］.齊魯藥事，2011，30 （11）：19-21.

［5］ 尹利輝，范可青，朱 俐，等.凝膠色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定中藥注射液中聚山梨酯 80的含量［J］.藥物分析雜志，2012，32（9）：1686-1689.

［6］ 吳 燕，李華龍，米亞嫻.中藥注射劑中吐溫80的定性定量測定研究［J］.天津藥學，2011，23（6）：3-5.

［7］ 叢 英，張明令，蘇柘僮，等.中藥注射劑用輔料“吐溫80”的增溶適宜性研究［J］.中成藥，2011，33（3）：439-442.

［8］ 張 俏，史文靜，曹愛蘭.野菊花注射液中吐溫-80含量的測定［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8（6）：39-40.

［9］ 郭志鑫，孫會敏，楊 銳，等.藥用輔料聚山梨酯80（吐溫80）質量狀況分析［J］.藥學實踐雜志，2012，30（6）：459-461.

［10］裴小龍，楊曉莉，張志蕓.硝基咪唑類藥物無菌檢查中吐溫80應用的研究［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17（4）：571-572.

［11］朱 勤，許雷鳴.復方麝香注射液體外溶血反應研究［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17（10）：1672-1673.

Determination of polysorbate 80 in compound shexiang injection by HPLC-ELSD

CHENG Shi-yun1，2，XU Guo-bing1，2
（1.Anhui University of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230031，China；2.Anhui Provincial Institute for Food and Drug Control，Hefei，Anhui 230051，China）

Objective To establish the method for determination of polysorbate 80 in compound shexiang injection by HPLC-ELSD.Methods It was performed by HPLC-ELSD with TSK GEL G2000SWxl（7.8 mm×300 mm，5 μm）column.Acetonitrile and 0.01 mol ·L-1ammonium acetate（8∶92）was used as mobile phase，the flow rate was 0.8ml·min-1，and the temperature was set at 30℃.The evaporated light scattering detector was adopted.The drift tube temperature was 103℃，and the gas flow rate was 2.5 L·min-1.Results The calibration cueve showed good linearity of polysorbate 80 in the test range from 2.515 to 100.6 μg（r＝0.999 9），and average recovety was 100.87% （n＝6，RSD＝0.65%）.Conclusion The method is simple，rapid，accurate and reliable，and it can be applied to control the quality of polysorbate 80 in compound shexiang injection.

Compound shexiang injection；polysorbate 80；determination；HPLC；ELSD

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.03.016

2013-11-11，

2014-01-06）

國家藥典委員會中藥注射劑標準提高項目

程世云，女，碩士研究生

徐國兵，男，主任藥師，碩士生導師，研究方向：中藥質量控制，Email：xgb119＠163.com